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.2019;52（4）：e7728。
doi:10.1590/1414-431X20197728。 Epub 2019年4月15日。

lncRNA HULC基因敲除对大鼠垂体腺瘤GH3细胞的影响

邱洪瑞 1, 马建波 1, 廖玉凤 1, 金华代 1, 甄玉才 2
附属公司

lncRNA HULC基因敲除对大鼠垂体腺瘤GH3细胞的影响

邱洪瑞等。 Braz医学生物学研究杂志. 2019.

缩回

摘要

垂体腺瘤是神经内分泌系统中最常见的肿瘤之一。本研究研究了肝癌（HULC）中高度上调的长非编码RNA（lncRNAs）对大鼠垂体腺瘤GH3细胞存活、迁移、侵袭、凋亡和激素分泌的影响，以及潜在的机制。细胞转染和qRT-PCR用于改变和测量HULC、miR-130b和FOXM1的表达水平。采用台盼蓝染色法、MTT法、双腔穿孔法、番石榴-内新法和western印迹法评估细胞活力、迁移、侵袭和凋亡。用ELISA法测定GH3细胞培养上清中催乳素（PRL）和生长激素（GH）的浓度。使用双荧光素酶活性验证miR-130b和FOXM1之间的靶向关系。最后，使用western blotting评估PI3K/AKT/mTOR和JAK1/STAT3通路中关键因子的表达水平。我们发现HULC在GH3细胞中高度表达。HULC的过度表达促进了GH3细胞的存活、迁移、侵袭、PRL和GH分泌，并激活了PI3K/AKT/mTOR和JAK1/STAT3通路。敲除HULC具有相反的作用并诱导细胞凋亡。HULC负调控miR-130b的表达，miR-130b+参与了HULC对GH3细胞的作用。FOXM1是miR-130b的靶基因，参与调节GH3细胞存活、迁移、侵袭和凋亡，以及PI3K/AKT/mTOR和JAK1/STAT3通路。总之，HULC在垂体腺瘤分泌中的促瘤作用可能是通过下调miR-130b、上调FOXM1、激活PI3K/AKT/mTOR和JAK1/STAT3通路实现的。

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数字

图1。
图1肝癌（HULC）中的高表达在GH3细胞中高度表达。采用qRT-PCR检测大鼠垂体原代细胞（PPC）和大鼠垂体腺瘤GH3细胞中HULC的表达水平。数据报告为平均值±标准偏差。**P<0.01（方差分析）。
图2。
图2肝癌（HULC）高表达在GH3细胞中发挥致癌作用。sh-HULC或pc-HULC转染后，A类，HULC在GH3细胞中的表达，B类–E类GH3细胞的活性、迁移和侵袭，F类GH3细胞中E-钙粘蛋白、N-cadherin、vimentin和snail的表达水平，G公司GH3细胞的凋亡，H（H）GH3细胞中PARP、cleaved-PARP、pro-caspase 3、cleaved caspase 3、pro-capase 9和cleaved capase 9的表达水平，以及我和J型采用qRT-PCR、台盼蓝染色法、MTT法、双室转染法、番石榴Nexin法、western blotting法和ELISA法测定GH3细胞培养上清中催乳素（PRL）和生长激素（GH）的浓度。NC：阴性对照；TGF-β：转化生长因子β；PARP：聚ADP-核糖聚合酶。数据报告为平均值±标准偏差*P<0.05，**P<0.01，#P<0.05，##与pcDNA3.1组相比，P<0.01（方差分析）。
图3。
图3肝癌高表达（HULC）对GH3细胞中miR-130b的表达进行负调控。sh-HULC或pc-HULC转染后，用qRT-PCR检测miR-130b在GH3细胞中的表达水平。miR-130b:MicroRNA-130b；NC：阴性对照。数据报告为平均值±标准偏差*P<0.05**P<0.01（方差分析）。
图4。
图4.miR-130b参与了肝癌高表达（HULC）对GH3细胞生存能力、迁移、侵袭和凋亡的影响。A类用qRT-PCR检测miR-130b模拟物或miR-130b-抑制剂转染后GH3细胞中miR-130a的表达。sh-HULC和/或miR-130b模拟物（抑制剂）转染后，B类–E类GH3细胞的活性、迁移、侵袭和凋亡，以及F类采用台盼蓝染色法、双腔穿孔法、番石榴内酯法和western blotting法检测GH3细胞中PARP、cleaved-PARP、pro-caspase 3、cleaved-caspase3、pro-capase 9和cleaved-caspase 9的表达水平。miR-130b:microRNA-130b；NC：阴性对照；PARP：聚ADP-核糖聚合酶。数据报告为平均值±标准差。*P<0.05，**P<0.01（ANOVA）。
图5。
图5 FOXM1是GH3细胞中miR-130b的靶基因。A类采用qRT-PCR和western blotting方法检测miR-130b模拟物或miR-130b-抑制剂转染GH3细胞后FOXM1的mRNA和蛋白表达水平。B类，与miR-130b模拟物和FOXM1-wt（FOXM1-mt）共转染后检测相对荧光素酶活性。C类，利用生物信息学分析预测FOXM1的miR-130b与3′UTR之间的潜在结合序列。miR-130b:microRNA-130b；FOXM1：叉头盒蛋白M1；NC：阴性对照；wt：野生型；mt：变异型。数据以平均值±标准差报告。*P<0.05**P<0.01（方差分析）。
图6。
图6 pc-FOXM1或sh-FOXM2转染后，A类FOXM1的mRNA和蛋白质水平，B类–E类GH3细胞的活性、迁移、侵袭和凋亡，以及F类采用qRT-PCR、western blotting、台盼蓝染色法、双室转染法和番石榴Nexin法检测GH3细胞中PARP、cleaved-PARP、pro-casase 3、cleaved-caspase 3、pro-case 9和cleaved-Casase 9的表达水平。FOXM1：叉盒蛋白M1；NC：阴性对照；PARP：聚ADP-核糖聚合酶。数据报告为平均值±标准偏差*P<0.05**P<0.01（方差分析）。
图7。
图7：GH3细胞中FOXM1激活PI3K/AKT/mTOR和JAK1/STAT3通路的过度表达。(A类和B类)用western blotting法评估pc-HULC或sh-HULC转染后GH3细胞中p-PI3K、t-PI3K，p-AKT，t-AKT，p-mTOR，t-mTOR、p-JAK1、t-JAK1，p-STAT3和t-STAT3的表达水平。(C类和天)用western blotting检测pc-FOXM1或sh-FOXM2转染GH3细胞后相同蛋白的表达水平。HULC：肝癌中高表达；FOXM1：叉头盒蛋白M1；NC：阴性对照；PI3K：磷脂酰肌醇3-激酶；AKT：蛋白激酶3；mTOR：雷帕霉素的哺乳动物靶点；JAK1：janus激酶1；STAT3：信号转导转录激活因子3。数据报告为平均值±标准偏差*P<0.05**P<0.01（方差分析）。
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