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.2019年2月14日；9(1):2032.
doi:10.1038/s41598-018-38435-0。

miR-302a通过靶向MAP3K2和PBX3抑制人HepG2和SMMC-7721细胞增殖并促进凋亡

孟旺 1, 吕国岳 1, 潮江 1, 谢淑丽 1, 王光毅（Guangyi Wang） 2
附属公司

miR-302a通过靶向MAP3K2和PBX3抑制人HepG2和SMMC-7721细胞增殖并促进凋亡

孟旺等。 科学代表. .

摘要

肝细胞癌（HCC）是最常见的肝癌，预后较差。miR-302a是肿瘤发生和恶化的重要调节因子，而MAP3K2和PBX3基因参与肿瘤细胞的增殖和凋亡。本研究采用qPCR方法检测肝癌细胞系中miR-302a和MAP3K2/PBX3的表达。接下来，使用荧光素酶分析验证miR-302a和MAP3K2/PBX3之间的靶向关系。同时，分析miR-302a与靶基因在癌组织和癌旁组织中的表达相关性。此外，通过miR-302a模拟物转染HepG2细胞和SMMC-7721细胞，可以提高其miR-302 a水平，并通过MTT、流式细胞术、qPCR和western blot检测来确定其对HepG2.和SMMC7721细胞增殖、凋亡和MAPK通路的影响。结果表明，肝癌细胞株miR-302a表达较低，MAP3K2和PBX3被证实为miR-302的靶基因。同时，HE结果显示HCC标本中细胞变大，胞质疏松，形成气球状病变，我们发现miR-302a与MAP3K2/PBX3表达呈显著负相关。此外，miR-302a模拟物治疗抑制HepG2细胞和SMMC-7721细胞的增殖并增加凋亡率。进一步研究表明，在miR-302a转染细胞和MAP3K2/PBX3沉默细胞中，MAPK关键因子p-p38、p-ERK1/2和p-JNK显著降低。此外，miR-302a模拟物处理细胞中MAP3K2和PBX3的过度表达产生了相反的作用。总之，miR-302a通过靶向MAP3K2和PBX3抑制人肝癌细胞的增殖并促进其凋亡。

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利益冲突声明

作者声明没有相互竞争的利益。

数字

图1
图1
地图3K2和PBX3系列是miR-302a的靶点。(A类)在肝癌细胞（HepG2、Bel-7402、SMMC-7721和PLC）和人类永生化正常肝上皮细胞（L02）中检测到miR-302a的表达。(B类)种子识别位点在地图3K2和PBX3系列3英尺UTR。(C类)在与miR-302a模拟物和MAP3K2-3′UTR地图或PBX3-3′非屏蔽双绞线(**P（P）<0.01). (D类)在转染miR-302a模拟物、抑制剂和miR-shNC的HepG2和SMMC-7721细胞中，检测miR-302 a对靶基因MAP3K2或PBX3的影响。采用Fisher最小显著性差异（LSD）双向方差分析（ANOVA）进行统计分析。
图2
图2
肝癌组织中miR-302a与靶基因的形态学观察及相关性分析。(A类–D类)HE染色的A（×200）和B（×400）肝细胞癌组织表现为典型的HCC形态，相邻组织表现为正常的肝细胞形态（C×200和D×400）。(E类)miR-302a的表达，地图3K2和PBX3系列qPCR在10例肝癌组织和10例癌旁组织中检测到(**P（P）<0.01). (F类)应用线性相关性分析miR-302a和地图3K2或PBX3系列信使核糖核酸表达水平(**P（P）<0.01). 使用Student t检验和Fisher最小显著性差异（LSD）的双向方差分析（ANOVA）方法进行统计分析。
图3
图3
miR-302a抑制细胞增殖和MAPK公司信号通路，并增强肝癌细胞的凋亡。(A类–C类)miR-302a模拟物抑制HepG2细胞增殖。miR-302a的过度表达增加了HepG2细胞的凋亡率。然后在转染miR-302a模拟物、抑制剂和miR-shNC的细胞中检测ALDH1、p-ERK、p-JNK、p-p38、Cyclin A、Cycrin D、Bcl-2和Caspase-3(*P（P）<0.05,**P（P）<0.01). (D类–F类)miR-302a载体转染SMMC-7721细胞，包括模拟物、抑制剂和miR-shNC。细胞增殖能力、凋亡率和ALDH1、Cyclin A、Cycrin D、Bcl-2、Caspase-3及关键因子MAPK公司在SMMC-7721细胞中检测到信号通路(*P（P）<0.05,**P（P）<0.01). 采用Fisher最小显著性差异（LSD）双向方差分析（ANOVA）进行统计分析。
图4
图4
秒iMAP3K2或单个PBX3对的影响MAPK公司信号通路。(A类)信号MAP3K2转染HepG2细胞和SMMC-7721细胞。然后检测mRNA和蛋白表达以验证干扰效率(**P（P）<0.01). (B类)关键因素MAPK公司在HepG2细胞中检测到信号MAP3K2转染，包括p-ERK、p-JNK和p-p38。(C类)培养并转染HepG2细胞和SMMC-7721细胞单个PBX3向量(**P（P）<0.01). (D类)western blot检测细胞中p-ERK、p-JNK和p-p38的表达PBX3系列干扰。使用Fisher最小显著性差异（LSD）的双向方差分析（ANOVA）方法进行统计分析。
图5
图5
细胞增殖能力和凋亡率可以通过地图3K2或PBX3系列培养HepG2细胞和SMMC-7721细胞并转染miR-302a模拟,miR-302a模拟 + 超过MAP3K2,miR-302a模拟 + 超过PBX3或miR-shNC. (A类–C类)的过度表达地图3K2可以显著增加地图3K2在细胞中表达。然后高表达地图3K2可以促进细胞增殖，减少细胞凋亡(*P（P）<0.05,**P（P）<0.01). (D类–F类)的过度表达PBX3系列可以拯救PBX3系列在HepG2和SMMC-7721细胞中。然后高表达PBX3系列可以促进细胞增殖和减少凋亡（*P<0.05，**P<0.01). 采用Fisher最小显著性差异（LSD）双向方差分析（ANOVA）进行统计分析。
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