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.2018年6月11日；51（8）：e6896。
doi:10.1590/1414-431X20186896。

长非编码RNA HOTAIR通过上调角质形成细胞PKR促进UVB诱导的凋亡和炎症损伤

郭刘 1, 张文浩 1
附属公司

长非编码RNA HOTAIR通过上调角质形成细胞PKR促进UVB诱导的凋亡和炎症损伤

郭刘等。 Braz医学生物研究杂志. .

缩回

摘要

过度暴露于紫外线（UV）会导致皮肤损伤，并可能导致癌症、免疫抑制、光老化和炎症。长非编码RNA（lncRNA）HOX反义基因间RNA（HOTAIR）参与多种人类生物过程。然而，其在UVB诱导的角质形成细胞损伤中的作用尚不清楚。本研究旨在研究HOTAIR在UVB诱导的人角质形成细胞（HaCaT细胞）凋亡和炎症损伤中的作用。采用实时定量聚合酶链反应分析HOTAIR、PKR、TNF-α和IL-6的表达水平。细胞活力用台盼蓝排除法测定，细胞凋亡用流式细胞术和western blot检测。ELISA检测TNF-α和IL-6的浓度。Western blot检测PKR、凋亡相关蛋白、PI3K/AKT和NF-κB通路蛋白的表达。UVB通过抑制细胞活性、促进细胞凋亡以及IL-6和TNF-α的表达诱导HaCaT细胞损伤。UVB也促进HOTAIR的表达。在UVB处理的细胞中，HOTAIR抑制增加了细胞活力，减少了凋亡和炎症因子的表达。HOTAIR也促进PKR的表达。在UVB处理的细胞中，HOTAIR的过度表达通过上调PKR降低了细胞活力，增加了细胞凋亡和炎症因子的表达。在UVB处理的细胞中，PKR的过度表达降低了细胞活力并促进了细胞凋亡。PKR激活的PI3K/AKT和NF-κB通路的过度表达。我们的研究发现，HOTAIR通过上调角质形成细胞中的PKR，在促进UVB诱导的凋亡和炎症损伤中发挥着重要作用。

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数字

图1。
图1.UVB诱导的HaCaT细胞损伤；A类细胞活力测定显示UVB抑制HaCaT细胞活力；B类凋亡检测显示UVB促进HaCaT细胞凋亡；C类Western blotting分析显示Bax表达增加，Bcl-2表达减少，caspase-3和caspase-9激活；D类ELISA结果表明，UVB促进TNF-α的表达；E类ELISA结果表明，UVB促进了IL-6的表达；F类，蛋白质印迹分析显示在UVB诱导的细胞中TNF-α和IL-6的过度表达。数据报告为平均值±标准偏差**与对照组相比，P<0.01，***P<0.001（方差分析）。UVB：紫外线B；ELISA：酶联免疫吸附试验；TNF-α：肿瘤坏死因子-α；IL-6：白细胞介素-6。
图2。
图2..qRT-PCR用于评估UVB对HOTAIR的影响，数据显示UVB上调HOTAIR表达。数据报告为平均值±标准偏差***与对照组（0 UVB）相比，P<0.001（方差分析）。qRT-PCR：定量实时聚合酶链反应；UVB：紫外线B；HOTAIR：HOX反义基因间RNA。
图3。
图3 HOTAIR对UVB诱导的细胞损伤的影响；A类，qRT-PCR显示转染后HaCaT细胞HOTAIR过度表达和抑制；B类细胞活性测定显示，HOTAIR的抑制减轻了UVB诱导的细胞活性低下，HOTAIR的过度表达进一步促进了UVB-诱导的细胞活力抑制；C类凋亡检测显示，HOTAIR的抑制减轻了UVB诱导的高细胞凋亡，HOTAIR的过度表达进一步促进了UVB-诱导的高凋亡。D类qRT-PCR分析表明，沉默HOTAIR后Bcl-2的mRNA表达增加，过度表达HOTAIR时Bcl-2 mRNA表达降低。E类Western blotting分析显示，HOTAIR过度表达细胞中Bax表达增加，Bcl-2表达减少；F类ELISA结果显示，抑制HOTAIR可减轻UVB诱导的TNF-α高表达，HOTAIR的过度表达进一步促进UVB诱发的TNF--α高表达；G公司ELISA结果显示，抑制HOTAIR可以减轻UVB诱导的IL-6高表达，HOTAIR的过度表达进一步促进UVB导致的IL-6的高表达；H（H）Western blotting分析显示，随着HOTAIR过度表达，TNF-α和IL-6的表达增加。数据报告为平均值±标准偏差*P<0.05**P<0.01***P<0.001（方差分析）。ns：P>0.05。UVB处理时间为16小时。HOTAIR：HOX反义基因间RNA；UVB：紫外线B；qRT-PCR：定量实时聚合酶链反应；TNF-α：肿瘤坏死因子-α；IL-6：白细胞介素-6。
图4。
图4 HOTAIR对PKR表达的影响；A类，qRT-PCR显示HOTAIR的过表达促进了PKR的表达；B类Western blotting分析显示HOTAIR的过度表达促进了PKR的表达。数据报告为平均值±标准偏差*P＜0.05**P<0.01（方差分析）。HOTAIR：HOX反义基因间RNA；PKR：RNA依赖性蛋白激酶；qRT-PCR：定量实时聚合酶链反应。
图5。
图5 PKR对UVB诱导的细胞损伤的影响；A类qRT-PCR显示HaCaT细胞PKR下调；B、，Western blotting分析显示HaCaT细胞PKR下调；C类，qRT-PCR显示PKR在HaCaT细胞中过度表达；D类Western blotting分析显示PKR在HaCaT细胞中过度表达；E类细胞活性测定显示，PKR的过度表达促进了UVB诱导的细胞活性抑制，并且PKR的抑制作用减弱；F类凋亡检测显示，PKR的过度表达促进了UVB诱导的细胞凋亡，而PKR的抑制则降低了这种作用；G公司Western blotting分析显示，PKR的过度表达促进了UVB诱导的凋亡相关因子的改变，而PKR的抑制降低了这种影响。数据报告为平均值±标准偏差*P<0.05**P<0.01（方差分析）。UVB处理时间为16小时；PKR:RNA依赖性蛋白激酶；UVB：紫外线B；qRT-PCR：定量实时聚合酶链反应。
图6。
图6 HOTAIR和PKR对UVB诱导的细胞损伤的影响；A类细胞活性测定表明，HOTAIR的过度表达通过上调PKR促进了UVB诱导的细胞活性抑制，而PKR的抑制逆转了结果；B、，凋亡检测显示HOTAIR的过度表达通过上调PKR促进UVB诱导的细胞凋亡，而PKR的抑制逆转了上述结果；C中，Western blotting分析显示，HOTAIR的过度表达通过上调PKR促进了UVB对凋亡相关因子的影响，而PKR的抑制则逆转了这一结果；D类和E类ELISA显示，HOTAIR过表达通过上调PKR促进UVB诱导的TNF-α和IL-6的高表达，而PKR的抑制逆转了结果；F类Western blotting分析显示，HOTAIR的过度表达通过上调PKR促进了UVB诱导的TNF-α和IL-6的高表达，而PKR的抑制则逆转了这一结果；G公司，抑制HOTAIR的表达可逆转PKR的活性抑制作用；H（H），抑制HOTAIR的表达逆转了PKR的促凋亡作用；我HOTAIR沉默可逆转PKR对凋亡相关因子的影响。数据报告为平均值±标准偏差*P＜0.05**P<0.01（方差分析）。UVB处理时间为16小时。HOTAIR：HOX反义基因间RNA；PKR：RNA依赖性蛋白激酶；UVB：紫外线B；qRT-PCR：定量实时聚合酶链反应；TNF-α：肿瘤坏死因子-α；IL-6：白细胞介素-6。
图7。
图7 PI3K/AKT和NF-κB信号通路上PKR的Western blotting分析表明PKR的过度表达激活了A类PI3K/AKT途径和B类，NF-κB途径。UVB处理时间为16小时。UVB：紫外线B；PKR：RNA依赖性蛋白激酶；PI3K：磷脂酰肌醇-3激酶。
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