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.2018年9月;32(9):5132-5142.
doi:10.1096/fj.201800077RR。 Epub 2018年5月29日。

基于CRISPR/Cas9的斑马鱼基因组工程

附属公司

基于CRISPR/Cas9的斑马鱼基因组工程

娟娟·罗等。 美国财务会计准则委员会J. 2018年9月.

摘要

已经开发出许多可行的方法,将外源DNA序列的大片段插入斑马鱼基因组,以及使用可编程核酸酶的基因组编辑技术。然而,靶向内源基因的编码序列被破坏,并且插入的外源基因的表达模式不能完全再现内源基因的表达模式。在这里,我们描述了一种新的策略的建立,该策略用于内源性启动子驱动和微同源介导的供体载体的末端连接依赖性整合,该策略使用聚集的规则间隔短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR相关(Cas)9。我们成功地将mCherry整合到目标基因的最终编码序列中,以高效地生成无缝转基因斑马鱼品系。这种新型的无缝转基因技术不仅保持了内源性基因的完整性,而且没有破坏靶基因的功能。因此,我们的微同源介导的终接介导的转基因策略可能在基因治疗中有更广泛的应用。此外,这种新颖的斑马鱼无缝基因编辑策略为转化医学提供了一种有价值的新转基因技术,该技术由内源性启动子和体内动物报告模式驱动。它有望成为斑马鱼领域的标准基因编辑技术,为早期胚胎发生研究带来一些重要突破-Luo,J.-J.、Bian,W.-P.、Liu,Y.、Huang,H.-Y.、Yin,Q.、Yang,X.-J.,Pei,D.-S.CRISPR/Cas9基于斑马鱼基因组工程的无缝整合策略。

关键词:MMEJ;基因编辑;敲入;转基因。

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