Skeletal Muscle CLARITY: A Preliminary Study of Imaging The Three-Dimensional Architecture of Blood Vessels and Neurons

doi:10.22074/cellj.2018.5266

.2018年7月；20(2):132-137.

doi:10.22074/cellj.2018.5266。 Epub 2018年3月18日。

骨骼肌清晰度：血管和神经元三维结构成像的初步研究

张文丽^#¹, 刘少华^#², 张卫晨^#^三, 魏虎^4 5, 闽江⁴, 阿明·塔马登^6 5, 易峰^4 7

附属公司

¹复旦大学华山医院消化科，上海，中国。
²复旦大学华山医院运动医学系，中国上海。
^三复旦大学华山医院肾脏科，中国上海。
⁴复旦大学脑科学协同创新中心医学神经生物学国家重点实验室和脑科学研究所，中国上海。
⁵中国上海复旦大学综合医学研究所上海医学院基础医学院综合医学与神经生物学系。
⁶复旦大学脑科学协同创新中心医学神经生物学国家重点实验室和脑科学研究所，中国上海。电子地址：amitamaddon@yahoo.com。
⁷中国上海复旦大学综合医学研究所上海医学院基础医学院综合医学与神经生物学系。电子地址：fengyi17@fudan.edu.cn。

^#贡献均等。

PMID： 29633589
预防性维修识别码：项目编号：5893283
内政部： 10.22074/单元2018.5266

骨骼肌清晰度：血管和神经元三维结构成像的初步研究

张文丽（Wen Li Zhang）等。单元格J. 2018年7月.

.2018年7月；20(2):132-137.

doi:10.22074/cellj.2018.5266。 Epub 2018年3月18日。

作者

张文丽（Wen Li Zhang）^#¹, 刘少华^#², 张卫晨^#^三, 魏虎^4 5, 蒋敏⁴, 阿明·塔马登^6 5, 一峰^4 7

附属公司

¹复旦大学华山医院消化科，上海，中国。
²复旦大学华山医院运动医学系，中国上海。
^三复旦大学华山医院肾脏科，中国上海。
⁴复旦大学脑科学协同创新中心医学神经生物学国家重点实验室和脑科学研究所，中国上海。
⁵中国上海复旦大学综合医学研究所上海医学院基础医学院综合医学与神经生物学系。
⁶复旦大学脑科学协同创新中心医学神经生物学国家重点实验室和脑科学研究所，中国上海。电子地址：amitamaddon@yahoo.com。
⁷中国上海复旦大学综合医学研究所上海医学院基础医学院综合医学与神经生物学系。电子地址：fengyi17@fudan.edu.cn。

^#贡献均等。

PMID： 29633589
预防性维修识别码：项目编号：5893283
内政部： 10.22074/单元2018.5266

摘要

目标：被动清晰度是一种基于十二烷基硫酸钠（SDS）清除的全组织清除协议，用于对含有转基因或免疫标记荧光蛋白的完整组织进行成像。在本研究中，我们提出了一种改进的被动CLARITY方案，该方案具有高效的免疫标记，无需电泳或复杂仪器。

材料和方法：在本实验研究中，先用磷酸盐缓冲盐水（PBS）灌流C57BL/6N小鼠，然后用丙烯酰胺多聚甲醛（PFA）灌流，去除股四头肌。肌肉样品固定后脱气以引发聚合。去除肌肉周围多余的水凝胶后，用被动澄清技术清洗脂质。透明的完整肌肉被标记为血管和神经元标记物，然后通过共焦显微镜成像。重建三维图像以呈现肌肉组织结构。

结果：我们建立了一个简单的清除方案，使用野生型小鼠肌肉并标记血管和神经元。荧光信号的成像是通过蛋白质固定、调整SDS溶液的pH值和使用组织清除的最佳温度（37˚C）实现的，所有这些都有助于我们方案的优越性。

结论：我们的结论是，这种被动CLARITY协议可以成功应用于小鼠的三维细胞和全肌肉成像，并将促进三维系统中肌肉细胞、血管和神经元大集合的结构分析和连接组学。

关键词：清晰；小鼠；肌肉；神经元；船舶。

PubMed免责声明

利益冲突声明

本研究不存在利益冲突。

数字

图2
免疫染色小鼠肌肉用被动CLARITY方案清除。血管（CD31）、神经元（酪氨酸羟化酶，移除后背景和伊玛瑞斯的“背景减法选项”）、肌束（酪氨酸羟化酶）和细胞核（DAPI）都被标记。这个组织用大图像扫描选项在×25放大倍率下使用共焦显微镜进行扫描。被动CLARITY方法也进行了免疫染色股四头肌肌腱中的血管、神经元及其细胞核（图像中央的黑色部分）。

图3
通过被动CLARITY协议清除小鼠肌肉的高分辨率成像。血管（CD31）和神经元（酪氨酸羟化酶和NeuN）标记。共聚焦显微镜在×25倍放大率下使用，面积为1024×1024µ，Z为250µm。

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