An improved measurement of the Ca2+-binding affinity of fluorescent Ca2+ indicators

doi:10.1016/j.ceca.2018.01.001

.2018年5月：71:86-94。

doi:10.1016/j.ceca.2018.01.001。 Epub 2018年1月8日。

钙的改进测量²⁺-荧光Ca的结合亲和力²⁺指标

陈泰文¹, 迈克尔·C·H·帕克², 克里斯蒂安·斯特里克^三

附属公司

¹埃克斯神经科学研究所，JCSMR，ANU，Acton ACT，2601，澳大利亚。电子地址：Le-Thuy-Van.Tran@anu.edu.au。
²埃克斯神经科学研究所，JCSMR，ANU，Acton ACT，2601，澳大利亚。
^三埃克尔斯神经科学研究所，JCSMR，ANU，Acton ACT，2601，澳大利亚；澳大利亚国立大学医学院，澳大利亚国立大学，阿克顿ACT，2601，澳大利亚。

PMID： 29604967
内政部： 2016年10月10日/j.ceca.2018.01.001

钙的改进测量²⁺-荧光钙的结合亲和力²⁺指标

陈泰文等。细胞钙. 2018年5月.

.2018年5月：71:86-94。

doi:10.1016/j.ceca.2018.01.001。 Epub 2018年1月8日。

作者

陈泰文¹, 迈克尔·C·H·帕克², 克里斯蒂安·斯特里克^三

附属公司

¹埃克斯神经科学研究所，JCSMR，ANU，Acton ACT，2601，澳大利亚。电子地址：Le-Thuy-Van.Tran@anu.edu.au。
²埃克斯神经科学研究所，JCSMR，ANU，Acton ACT，2601，澳大利亚。
^三埃克尔斯神经科学研究所，JCSMR，ANU，Acton ACT，2601，澳大利亚；澳大利亚州立大学医学院，澳大利亚州立大学，阿克顿行政区，2601。

PMID： 29604967
内政部： 2016年10月10日/2010年10月18日

摘要

荧光钙²⁺指示剂广泛用于测量细胞内钙²⁺浓度（[Ca²⁺]_我)活细胞，包括神经元。通过在模拟实际细胞质主要离子成分的溶液中校准指示剂[Ca²⁺]_我可以根据测量的荧光强度来确定。然而，不同的研究报告了显著不同的钙²⁺-结合亲和力（K_d日)对于相同的指示剂，即使他们使用了成分相似的校准溶液。本文提出了一种精确测定K值的方法_d日非比例Ca值²⁺模拟标准配线架内部解决方案的解决方案中的指示器。游离Ca²⁺浓度（[Ca²⁺])在这些由EGTA或HEDTA设定的溶液中，用Ca测定²⁺-选择性大电极。我们发现，这种测量对于准确校准钙至关重要²⁺指标。K系列_d日OGB-1、OGB-6F、fluo-5F和fluo-4FF的值分别为0.26±0.01、8.7±0.4、1.00±0.05和23.0±0.7μM。计算[Ca²⁺]使用广泛使用的计算机程序Maxchestrator，导致对K的显著低估_d日OGB-6F、fluo-5F和fluo-4FF的值。这是因为EGTA的纯度远低于制造商所宣传的纯度。此外，K_d日Maxchelator高估了HEDTA的价值。因此，除了批次间的变化外²⁺]在许多研究的校准溶液中，用Maxchestrator估计很可能是K值不同的原因_d日钙的²⁺指标。用反应扩散模型再现钙²⁺在神经末梢上升时，我们进一步表明荧光钙的校准不正确²⁺这些指标可以解释内源性钙的巨大变化²⁺不同类型兴奋性突触之间的结合率。

关键词：钙结合亲和力；Fluo-4FF；氟-5F；荧光钙指示剂；OGB-1；OGB-6F。

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