Knockout of the placenta specific 8 gene radiosensitizes nasopharyngeal carcinoma cells by activating the PI3K/AKT/GSK3β pathway

。2018年2月15日；10（2）：455-464。

2018年eCollection。

胎盘特异性8基因的敲除通过激活PI3K/AKT/GSK3β途径对鼻咽癌细胞放射增敏

瑞阳（Rui Yang）¹, 泽章涛^1 2, 黄茂玲¹, 雍法正^三, 孟元代^1 4, 邹优¹, 陈世明^1 2

附属机构

¹中国湖北省武汉市解放路238号武汉大学人民医院耳鼻咽喉头颈外科，邮编430060。
²武汉大学人民医院耳鼻咽喉头颈外科研究所，湖北省武汉市解放路238号，430060。
^三中国湖北省武汉市解放路238号武汉大学人民医院肿瘤科，邮编430060。
⁴David H.Koch癌症综合研究所，马萨诸塞州，技术研究所剑桥02139，马萨诸塞诸塞州（MA），美国。

PMID： 29511439
预防性维修识别码：项目编号5835810

胎盘特异性8基因敲除通过激活PI3K/AKT/GSK3β途径使鼻咽癌细胞放射增敏

瑞阳（Rui Yang）等。美国翻译杂志。 2018。

。2018年2月15日；10(2):455-464.

2018年eCollection。

作者

瑞阳（Rui Yang）¹, 泽章涛^1 2, 黄茂玲¹, 雍法正^三, 孟元代^1 4, 你邹¹, 陈世明^1 2

附属机构

¹中国湖北省武汉市解放路238号武汉大学人民医院耳鼻咽喉头颈外科，邮编430060。
²武汉大学人民医院耳鼻咽喉头颈外科研究所，湖北省武汉市解放路238号，430060。
^三中国湖北省武汉市解放路238号武汉大学人民医院肿瘤科，邮编430060。
⁴David H.Koch癌症综合研究所，马萨诸塞州，技术研究所剑桥02139，马萨诸塞诸塞州（MA），美国。

PMID： 29511439
预防性维修识别码：项目编号5835810

摘要

本研究探讨胎盘特异性8（PLAC8）对鼻咽癌细胞的放射增敏作用。使用CRISPR/Cas9系统构建了PLAC8敲除CNE2细胞系。CCK-8分析表明，与对照细胞和未辐照的PLAC8敲除细胞相比，PLAC8的敲除显著降低了辐射后的细胞增殖和细胞存活率。克隆形成实验表明，PLAC8基因敲除增强了NPC细胞的放射敏感性。流式细胞术显示PLAC8基因敲除增加了照射后细胞凋亡和G2/M期阻滞。Western blotting显示PLAC8基因敲除与γHA2X水平升高、BAX:BCL-2比率升高、磷酸化Akt和磷酸化GSK-3β水平升高相关。总的来说，本研究表明PLAC8通过抑制PI3K/AKT/GSK3β途径而促进鼻咽癌的放射抗性。

关键词：细胞凋亡；PI3K/Akt/GSK3β途径；淘汰赛；鼻咽癌；胎盘特异性8；辐射敏感性。

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利益冲突声明

没有。

数字

图1
PLAC8-敲除CNE2细胞的构建。A：利用CRISPR/CAS9基因编辑，通过同源重组，将PLAC8基因第二外显子和第三外显子之间的内含子序列替换为Puro。B、 C：基因分型显示，第12、14、17、33、35、41和49个菌落为PLAC8-敲除细胞系。D：与亲代CNE-2细胞相比，菌落P49和P33中PLAC8基因的相对mRNA表达。所示的所有定量数据代表3个独立重复的平均值±SD(*P（P）*< 0.05). E： Western blotting证实PLAC8基因敲除菌落P49和P33中未检测到PLAC8蛋白表达。

图2
PLAC8基因敲除降低CNE2细胞的增殖，降低照射后存活率。A、 B:CCK-8测定6Gy照射后24、48和72小时存活的PLAC8（+）和PLAC8（-）细胞的数量。在所有时间点，与PLAC8（+）细胞相比，PLAC8的敲除显著降低了未照射和照射的CNE2细胞的存活率。所示的所有定量数据代表3个独立重复的平均值±SD；显著差异如下所示**P（P）*< 0.05. C、 D:IR-PLAC8（-）细胞在2、4、6和8 Gy照射后的存活率显著低于IR-PLAC 8（+）细胞。E:IR-PLAC8（–）细胞在24 h和48 h照射后的增殖显著低于IR-PLAC8细胞。

图3
PLAC8基因敲除诱导CNE2细胞凋亡和G2/M期阻滞。A：在0或6 Gy照射后48 h，用Annexin V-FITC/碘化丙啶（PI）染色检测PLAC8（+）和PLAC8。C： 0或6 Gy照射后48 h PLAC8（+）和PLAC8细胞的细胞周期分析。D：IR-PLAC8（-）细胞的G2/M细胞周期阻滞率显著高于PLAC8、PLAC8和IR-PLAC0（+）细胞；所示的所有定量数据代表3个独立重复的平均值±SD；显著差异如下所示***P（P）*< 0.01.

图4
PLAC8基因敲除改变与凋亡和细胞周期相关的蛋白的表达。在0或6 Gy照射后48 h，PLAC8（+）和PLAC8细胞的蛋白质印迹裂解。A:IR-PLAC8（-）细胞中的BAX、BCL-2和γH2AX蛋白表达增加，细胞周期蛋白D1和survivin表达降低，而PLAC8+、PLAC8-和IR-PLAC0（+）细胞相比。B： BAX:BCL2比率和γH2AX水平的量化。C： IR-PLAC8（-）细胞中survivin表达的定量。D：细胞周期蛋白D1表达的量化。所示的所有定量数据代表3个独立重复的平均值±SD；显著差异如下所示**P（P）*< 0.05. ***P（P）*< 0.01.

图5
敲除PLAC8激活PI3K/AKT/GSK3β途径。在0或6 Gy照射后48 h，PLAC8（+）和PLAC8-细胞的蛋白质印迹裂解。A:IR-PLAC8（-）细胞中的磷酸化Akt和磷酸化GSK-3β蛋白表达增加，但与PLAC8+、PLAC8-和IR-PLAC0（+）细胞相比，总Akt及GSK-3α保持不变。B：磷酸化Akt:Akt比率的量化。C：磷酸化葡萄糖激酶-3β：谷胱甘肽激酶-3β比率的量化。所示的所有定量数据代表3个独立重复的平均值±SD；显著差异如下所示**P（P）*< 0.05. ***P（P）*< 0.01.

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