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.2018年8月23日；26(7):1055-1062.
doi:10.3727/096504018X15152056890500。 Epub 2018年1月10日。

低氧条件下靶向HIF-1α的微小RNA-519d-3p抑制宫颈癌增殖和促进细胞凋亡

江丽霞 1, 史少华 2, 巧发石 三, 张慧娟 1, 于霞 4, 天宇钟 1
附属公司

MicroRNA-519d-3p靶向HIF-2α抑制缺氧条件下宫颈癌细胞增殖和促进细胞凋亡

江丽霞等。 Oncol Res公司. .

摘要

HIF-2α敲除抑制宫颈癌细胞的增殖，阻止细胞周期，并在缺氧条件下促进细胞凋亡和自噬。然而，HIF-2α表达的上游调控机制尚不清楚。MicroRNAs（miRNAs）通过与mRNAs的3'非翻译区结合来降解靶mRNAs。在这项研究中，我们研究了miRNAs在低氧条件下调控宫颈癌HIF-2α表达中的作用。使用TargetScan和miRanda预测调节HIF-2α表达的miRNAs，并通过qRT-PCR在低氧条件下测定宫颈癌中的miRNA。此外，通过Western blot和荧光素酶报告分析评估miR-519d-3p对HIF-2α的靶向调节。通过CCK-8和流式细胞术分析miR-519d-3p和HIF-2α对细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。根据TargetScan和miRanda的预测，miR-106a-5p、miR-17-5p、miR-519d-3p、miR526b-3p和miR-20b-5p是潜在的调控性miRNAs，与HIF-2α3'-非翻译区结合。与常氧条件相比，低氧条件下HeLa细胞中五种miRNA的表达受到抑制，miR-519d-3p的表达低于其他miRNA。荧光素酶报告分析表明HIF-2α是miR-519d-3p的靶点。此外，miR-519d-3p过表达抑制宫颈癌细胞增殖，阻止细胞周期从G1期向S期的过渡，并促进缺氧条件下细胞凋亡。HIF-2α过度表达部分逆转了miR-519d-3p的作用。总之，在缺氧条件下，miR-519d-3p过表达通过靶向HIF-2α抑制HeLa细胞增殖、抑制细胞周期并促进细胞凋亡。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

图1
图1
通过逆转录定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测低氧或常氧条件下HeLa细胞中miR-106a-5p、miR-17-5p、miR519d-3p、miR-526b-3p和miR-20b-5p的表达。数据表示为平均值 ± 标准偏差**第页 < 0.01和***第页 < 0.001与正常氧条件相比。
图2
图2
缺氧条件下，miR-519d-3p过度表达抑制HeLa细胞的增殖和细胞周期，并促进细胞凋亡。（A） 在缺氧条件下，用miR-519d-3p模拟物或阴性对照物（NC）转染48小时后，通过RT-qPCR检测miR-519 d-3p的表达水平。（B） 低氧条件下CCK-8分析miR-519d-3p过表达抑制HeLa细胞增殖。（C） 在缺氧条件下通过流式细胞术分析miR-519d-3p过表达促进HeLa细胞凋亡。（D） 通过流式细胞术分析低氧条件下miR-519d-3p过度表达对HeLa细胞周期的抑制作用。数据表示为平均值 ± 标准偏差*第页 < 0.05, **第页 < 0.01, ***第页 < 0.001，ns（不显著）与NC。
图3
图3
miR-519d-3p通过靶向其3′-非翻译区（3′-UTR）调节HIF-2α的表达水平。（A） 通过TargetScan和miRanda分析HIF-2α3′-UTR与miR-519d-3p之间的推测结合位点。（B） 转染miR-519d-3p模拟物或NC（阴性对照）的293T细胞中野生型（WT）或突变型（Mut）HIF-2α3′-UTR的荧光素酶活性。（C） 通过RT-qPCR测量缺氧条件下用miR-519d-3p模拟物或NC转染的HeLa细胞中的HIF-1αmRNA。（D） 通过Western blotting检测缺氧条件下转染miR-519d-3p模拟物或NC的HeLa细胞HIF-2αmRNA的表达。数据表示为平均值 ± 标准偏差***第页 < 0.001和ns与NC。
图4
图4
HIF-2α过度表达部分逆转了miR-519d-3p在低氧条件下对HeLa细胞增殖和凋亡的诱导作用。（A） 缺氧条件下，miR-519d-3p模拟物与pcDNA-NC或pcDNA-HIF-2α共转染后，通过Western blot检测HIF-2的表达。（B–D）增殖显著增强（B），凋亡显著降低（C），细胞周期从G1与缺氧条件下miR-519d-3p模拟物和pcDNA-HIF-2α联合转染的HeLa细胞相比，miR-519-3p模拟体和pcDNA-NC联合转染HeLa细胞对S的诱导作用显著增强（D）。数据表示为平均值 ± 标准偏差*第页 < 0.05, **第页 < 0.01, ***第页 < 0.001，ns与NC。
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