跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2017年8月29日；7(1):9702.
doi:10.1038/s41598-017-09813-x。

低氧应激降低心脏前体细胞c-Myc蛋白的稳定性，导致细胞静止并破坏其增殖和血管生成潜能

迈克尔·A·贝利奥 1, 玛丽安娜·T·品托 1, 维多利亚·弗洛里亚 1, Paola A Barrios公司 1, 克里斯蒂·泰勒 1, Ariel B Brown公司 1, 考特尼·拉蒙丁 1, 约书亚·M·黑尔 1 2, 伊冯·舒尔曼 1 三, 克劳迪娅·罗德里格斯 4 5
附属机构

低氧应激降低心脏前体细胞c-Myc蛋白的稳定性，导致细胞静止并破坏其增殖和血管生成潜能

迈克尔·A·贝利奥等。 科学代表. .

摘要

心脏前体细胞（CPC）已被证明可以促进心脏再生和改善心脏功能。然而，有证据表明，在严重缺氧的条件下，它们的再生能力可能会受到限制。阐明CPC对缺氧应激的保护机制对于最大限度地发挥其心脏保护和治疗潜力至关重要。我们研究了低氧应激对CPC的影响，发现CPC的增殖明显减少，血管生成受损，这与诱导静止有关，如细胞在细胞周期的G0期积累和细胞恢复常氧后的生长恢复。通过蛋白质降解和p21上调机制，诱导静止与c-Myc表达减少相关。c-Myc的抑制模拟了严重缺氧对CPC增殖的影响，也引发了静止。令人惊讶的是，这些效应并不涉及p21表达的变化，这表明其他低氧激活因子可能会诱导CPC中的p21。我们的结果表明，低氧应激通过下调c-Myc部分诱导CPC功能静止，从而损害CPC功能。此外，我们发现c-Myc是维持CPC生长所必需的，这表明其下游通路的调节可能在缺血条件下重新激活CPC再生潜力。

PubMed免责声明

利益冲突声明

Hare博士拥有心脏细胞疗法的专利；他持有Vestion Inc.的股权。；作为董事会和科学咨询委员会的顾问和成员，与Vestion保持专业关系；并且是Longeveron LLC的股东。其他作者声明，他们没有相互竞争的利益。

数字

图1
图1
低氧应激降低心脏祖细胞增殖。（A）CPC增长的时间过程分析，以正常氧（闭合圈）和缺氧（开放圈）条件下总计96个周期的细胞数量（顶部面板）和人口倍增（下部面板）为代表 小时（n = 7，*p < 0.05).（B）通过荧光激活的细胞分选对CPCs暴露于缺氧后Ki67阳性细胞的定量分析。48-96年常氧和缺氧条件下的典型图像 显示小时数。图表显示了不同时间点（n）正常氧（黑条）和缺氧（灰条）下Ki67阳性细胞的平均百分比 = 3，*p < 0.05, ** < 0.005).
图2
图2
低氧暴露不会导致心脏祖细胞死亡或衰老。(一个)24和72岁时，在常氧和缺氧条件下，用活性/死染料钙黄绿素AM（绿色）和乙炔同二聚体-1（红色）染色的CPC的代表性图像 小时（n = 放大10倍）。通过使用200 µM过氧化氢（H2O（运行）2)在相同的时间范围内，显示亮场图像，用于分析缺氧和过氧化氢处理后相对于对照组的形态学变化。(B)24和72℃常氧（黑条）和缺氧（灰条）培养的CPC上清液中乳酸脱氢酶活性的检测 小时（n = 6，*p < 0.05，**p < 0.005).（C）在常氧（黑条）和缺氧（灰条）条件下培养72小时的CPC细胞裂解物中衰老相关-β-半乳糖苷酶活性的检测 小时（n = 5).
图3
图3
低氧应激不会诱导心脏祖细胞分化，但会损害血管生成潜能。(一个)具有代表性的western blot图像显示72和96岁CPC中平滑肌标记物的表达 常压（黑条）和低氧（灰条）下的小时数。图表示通过对归一化为Gapdh内源性对照（n = 5). (B)6岁时氧合正常和缺氧治疗的CPC的代表性图像 小时（顶部面板，4倍放大）和24小时 在Matrigel（n）上培养后小时（下面板，放大10倍） = 5). 24个单元格 用钙黄绿素AM对小时点图像进行染色，以表明他们在研究结束时仍然活着。
图4
图4
缺氧应激导致心脏祖细胞静止，c-Myc表达降低。（A）常氧和缺氧条件下CPC细胞周期进展的时间-过程分析。点图显示了7-AAD和Ki67染色的细胞的代表性图像，并在48（顶面板）、72（中面板）和96（下面板）小时进行了分析。图表显示了正常氧（黑条）和缺氧（灰条）（n）条件下每个时间点细胞周期每个阶段的平均百分比 = 3，*p < 0.05，**p < 0.005).（B）CPC增长的时间过程分析，以常氧（闭合圈）、缺氧（开放圈）和缺氧后常氧（复氧、闭合三角形）（n = 7，**p < 0.005缺氧vs常氧，*p < 0.05复氧与常氧，#第页 < 0.05复氧与缺氧）。（C）典型的western blot图像显示48岁时c-Myc蛋白表达下降 小时。图形表示通过对归一化为肌动蛋白内源性对照（n = 4，*p < 0.05).
图5
图5
抑制c-Myc可降低心脏祖细胞增殖并诱导静止。(一个)通过CellTrace染料稀释72显示CPC增殖分析的代表性直方图 使用c-Myc抑制剂10058-F4（虚线）和DMSO对照（实线，浅灰色）治疗后小时，与基线（实线、深灰色）进行比较。图表显示CellTrace平均荧光强度显示，与DMSO对照相比，使用c-Myc抑制剂处理的样品中的染料稀释较少，表明生长延迟（n = 4，*p < 0.03). (B)Ki67表达定量72 使用c-Myc抑制剂治疗CPC后小时，通过荧光激活细胞分选控制DMSO。图中显示了对照组（黑色条）和c-Myc抑制剂处理的CPC（灰色条）中Ki67平均荧光强度（MFI）的平均值（n = 4，*p < 0.03). (C)c-Myc抑制后CPC的细胞周期分析。点图显示7-AAD和Ki67染色细胞的代表性图像，并分析72 几个小时后。图表显示了DMSO对照组（黑色条）和c-Myc抑制剂处理的CPC（灰色条）中细胞周期每个阶段的平均细胞百分比（n================================================================================4，*p < 0.05).
图6
图6
低氧应激和c-Myc抑制不同程度地影响细胞周期抑制剂p21的表达。(一个)代表性的western blot图像显示，相对于常氧，缺氧暴露的CPC中p21的诱导。图表示通过对归一化为肌动蛋白内源性对照（n==========================================================================5，**p < 0.006). (B)实时PCR分析c-Myc抑制剂10058-F4作用24小时的CPC中p21的表达 相对于DMSO控制的小时数（n = 5，*p < 0.03). (C)显示c-Myc抑制对c-Myc和p21表达的影响的典型western blot图像。图表示通过对归一化为肌动蛋白内源性对照（n = 4，*p < 0.03).
图7
图7
缺氧应激加速了心脏祖细胞中c-Myc蛋白的降解。(一个)缺氧条件下c-Myc RNA（黑条）和蛋白质（灰条）表达的时间进程分析 = 4-7，*p < 0.05). (B)典型的western blot图像显示在常氧和缺氧条件下培养48小时的CPC翻译阻断后c-Myc蛋白降解 小时。(C)常氧（黑条）和缺氧（灰条）下蛋白质合成阻断后c-Myc表达的时间进程分析（n = 4–12，*p < 0.05，**p < 0.006,#第页 < 0.005,Ɨ第页 < 0.001）。(D类)典型的western blot图像显示蛋白酶体抑制剂MG132对缺氧条件下c-Myc表达的影响（n = 4，*p < 0.05，**p < 0.005). C和D中的图表示通过对归一化为肌动蛋白内源性对照的所有印迹进行密度测定分析确定的C-Myc表达。出于统计目的，比较各组之间每个时间点（*）的c-Myc表达，以及每个实验组、常氧对照组（#）和缺氧组（Ɨ）的时间点之间的c-Myc表达。
图8
图8
低氧条件下GSK-3β的表达及其对c-Myc表达的影响。(一个)典型的western blot图像显示，在培养基短时间刺激后，低氧（灰色条）下相对于常氧（黑色条），抑制的GSK-3β（Ser9）表达增加。图中表示通过所有印迹（n）的密度分析测定的磷酸/总GSK-3β表达 = 4个，*个 < 0.05，**p < 0.007). (B)TCS2002抑制GSK-3β对常氧和缺氧条件下CPC增殖的影响（n = 4，*p < 0.05，**p < 0.001）。(C)TCS2002对GSK-3β的抑制作用（灰条）对常氧和缺氧培养的CPC中c-Myc表达的影响（相对于载体对照（黑条））。在50和100时测试抑制剂 纳米。图形表示通过对归一化为肌动蛋白内源性对照（n = 4，*p < 0.05).
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

工具书类

    1. Felker GM等。失代偿性心力衰竭住院后的风险分层。J卡故障。2004;10:460–466. doi:10.1016/j.cardfail.2004.02.011。-DOI程序-公共医学
    1. Lloyd Jones，D.等人以及美国心脏协会统计委员会和中风统计小组委员会。心脏病和中风统计2009年更新：美国心脏协会统计委员会和中风统计小组委员会的报告。发行量119，e21–e181（2009）。-公共医学
    1. Hare JM。间充质干细胞治疗心血管疾病的转化发展。德克萨斯心脏研究所杂志2009；36:145–147.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. 兔子JMaCSV。心脏再生和干细胞治疗。货币。操作。器官移植。2008年；13:536–542. doi:10.1097/MOT.0b013e32830fdfc4。-DOI程序-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Guntheroth工作组。改善小儿扩张型心肌病和心脏移植的预后。美国心脏病杂志。2005;45:1733–1734. doi:10.1016/j.jacc.2005.02.045。-DOI程序-公共医学

出版物类型

LinkOut-更多资源