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.2016年2月;13(2):1618-26.
doi:10.3892/mmr.2015.4745。 Epub 2015年12月30日。

电针通过靶向miR-9介导的NF-κB信号通路抑制缺血性脑卒中后的炎症损伤

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电针通过靶向miR-9介导的NF-κB信号通路抑制缺血性卒中后的炎症损伤

刘伟林等。 分子医学代表. 2016年2月.

摘要

本研究的目的是通过电针刺激大脑中动脉闭塞(MCAO)大鼠曲池(LI11)和足三里(ST36)穴位,研究miR-9介导的核因子(NF)-κB信号通路激活的神经保护机制。本研究表明,电针减轻了大鼠神经功能缺损的症状,并减少了脑梗塞体积。电针组与MCAO组相比,miR-9在梗死周围皮质的表达增加,NF-κB信号通路相关因子、NF-κ·B p65、肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β的表达降低。值得注意的是,miR-9抑制剂能够抑制EA-缓解的脑炎症和NF-κB下游相关因子、NF-κ·B p65、TNF-α和IL-1β的表达,并且对κBα上游相关蛋白抑制剂的水平没有影响,提示电针的脑保护作用靶向缺血性卒中后miR-9介导的NF-κB下游通路。

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图1
图1
电针对大鼠脑梗塞体积和形态学结构的影响。(A) 2,3,5-三苯基四氮唑氯化物染色显示Sham、MCAO、MCAO+EA、EA+DMSO和EA+miR-9抑制剂组的脑梗死体积。(B) 条形图显示了各组总脑容量的百分比(n=4;*与MCAO和EA+miR-9抑制剂组相比,P<0.05)。大脑中动脉闭塞;电针;miR-9,microRNA-9;二甲基亚砜。
图2
图2
HE染色。实验结束时,对(A)Sham、(B和C)MCAO、(D)MCAO+EA、(E)EA+DMSO和(F)EA+miR-9抑制剂组的脑组织进行HE染色(n=6)。在光学显微镜下,分别以(A和B)×200和(C–F)×400的放大倍数观察各组梗死区大脑皮层组织病理学变化和炎性细胞浸润程度。HE、苏木精和曙红;大脑中动脉闭塞;电针;二甲基亚砜;miR-9,microRNA-9。
图3
图3
电针对大脑皮层miR-9表达的影响。MCAO和再灌注72h后Sham、MCAO、MCAO+EA、EA+DMSO和EA+miR-9抑制剂组近梗死大脑皮层miR-9表达水平的逆转录定量聚合酶链反应(*与Sham组相比,P<0.05;#与MCAO和EA+miR-9抑制剂组相比,P<0.05)。大脑中动脉闭塞;电针;miR-9,microRNA-9;二甲基亚砜。
图4
图4
电针对NF-κB信号通路相关因子的影响。(A) 评估Sham、MCAO、MCAO+EA、EA+DMSO和EA+miR-9抑制剂组(n=4)近端皮质组织中NF-κB p65(绿色)、DAPI(蓝色)和共定位阳性细胞。(B) MCAO、MCAO+EA、EA+DMSO和EA+miR-9抑制剂组梗死周围皮质组织中NF-κB p65、TNF-α、IL-1β和IκBα蛋白表达水平的蛋白质印迹分析。(C) 显示各组NF-κB p65、TNF-α、IL-1β和IκBα折叠变化的条形图(n=4)(*与MCAO组相比,P<0.05;#与MCAO+EA和EA+DMSO组相比P<0.05)。电针;DAPI,4′,6-二氨基-2-苯基吲哚;大脑中动脉闭塞;二甲基亚砜;miR-9,microRNA-9;核因子-κB;肿瘤坏死因子-α;IL-1β、IL-1β;κBα抑制剂。
图4
图4
电针对NF-κB信号通路相关因子的影响。(A) 评估Sham、MCAO、MCAO+EA、EA+DMSO和EA+miR-9抑制剂组(n=4)近端皮质组织中NF-κB p65(绿色)、DAPI(蓝色)和共定位阳性细胞。(B) Western blot分析MCAO、MCAO+EA、EA+DMSO和EA+miR-9抑制剂组近梗死皮质组织中NF-κB p65、TNF-α、IL-1β和IκBα的蛋白表达水平。(C) 显示各组NF-κB p65、TNF-α、IL-1β和IκBα折叠变化的条形图(n=4)(*与MCAO组相比,P<0.05;#与MCAO+EA和EA+DMSO组相比,P<0.05)。电针;DAPI,4′,6-二氨基-2-苯基吲哚;大脑中动脉闭塞;二甲基亚砜;miR-9,microRNA-9;核因子-κB;肿瘤坏死因子-α;IL-1β、IL-1β;κBα抑制剂。
图5
图5
miR-9与NF-κB的相互作用。(A) miR-9与NF-κB结合的位点。(B) 在转染miR-9抑制剂的原代皮层神经元细胞中检测到psiCHECK2-NF-κB-luc和psiCHECK2-NFκB-Mut-luc的荧光素酶活性(n=3;*与NC抑制剂组相比,P<0.05)。空白,空白对照组;NC抑制剂,转染miR-9抑制剂阴性细胞组;miR-9抑制剂组转染细胞。miR-9,microRNA-9;核因子-κB。

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