Generation of iPS Cells from Human Hair Follice Dermal Papilla Cells

。2014年1月；6(1):45-53.

人毛囊真皮乳头细胞诱导分化为iPS细胞

附属公司

¹俄罗斯科学院科尔佐夫发育生物学研究所，俄罗斯莫斯科Vavilova街26号，117808；俄罗斯莫斯科Ostrovitianov街117997号Pirogov俄罗斯国立研究医科大学。
²俄罗斯莫斯科Ostrovitianov街117997号Pirogov俄罗斯国立研究医科大学。
^三俄罗斯科学院恩格尔哈特分子生物学研究所，Vaviolva街道，32，119991，莫斯科，俄罗斯。
⁴俄罗斯科学院恩格尔哈特分子生物学研究所，Vaviolva街道，32，119991，莫斯科，俄罗斯；俄罗斯科学院Shemyakin and Ovchinnikov生物有机化学研究所，Miklukho-Maklay str.，16/10117997，Moscow，Russia。
⁵俄罗斯科学院科尔佐夫发育生物学研究所，俄罗斯莫斯科Vavilova街26号，邮编117808。

PMID： 24772326
预防性维修识别码： PMC3999465型

人毛囊真皮乳头细胞诱导分化为iPS细胞

I A穆奇卡耶娃等。 Naturae女演员。 2014年1月。

。2014年1月；6(1):45-53.

附属公司

¹俄罗斯科学院科尔佐夫发育生物学研究所，俄罗斯莫斯科Vavilova街26号，117808；俄罗斯莫斯科Ostrovitianov街117997号Pirogov俄罗斯国立研究医科大学。
²俄罗斯莫斯科Ostrovitianov街117997号Pirogov俄罗斯国立研究医科大学。
^三俄罗斯科学院恩格尔哈特分子生物学研究所，Vaviolva街道，32，119991，莫斯科，俄罗斯。
⁴俄罗斯科学院恩格尔哈特分子生物学研究所，Vaviolva街道，32，119991，莫斯科，俄罗斯；Shemyakin和Ovchinnikov生物有机化学研究所，俄罗斯科学院，Miklukho Maklay街，16/10，117997，俄罗斯莫斯科。
⁵俄罗斯科学院科尔佐夫发育生物学研究所，俄罗斯莫斯科Vavilova街26号，邮编117808。

PMID： 24772326
预防性维修识别码： PMC3999465型

摘要

真皮乳头（DP）细胞是皮肤中独特的局部干细胞，可诱导毛囊的形成及其再生周期。DP是多能干细胞；因此，我们认为DPC重编程的效率可以超过皮肤成纤维细胞重编程。我们使用慢病毒转染Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc，并在添加丙戊酸的培养基和生理水平的氧气（5%）中培养细胞，从人类DP细胞中生成诱导的多能干细胞。DP细胞重编程效率为~0.03%，而在相同条件下真皮成纤维细胞重编程的效率为~0.01%。因此，我们证明了DP细胞作为iPS细胞替代来源的适用性。

关键词：毛囊毛乳头细胞；诱导多能干细胞；重新编程。

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数字

图1
人类iDP细胞的生成。培养的DP细胞的形态学重编程因子感染（A）和第一个重编程克隆的出现关于8^第个感染后第天（B）和第11天^第个后天感染（C）。碱性磷酸酶在非程序化（传代）中的表达6） DP细胞（D）和生成的（第6代）iDP细胞（E）。免疫荧光检测细胞核蛋白：Oct4（F）、Sox2（G）和Nanog（H），以及表面抗原：iDP细胞中的SSEA3（L）、SSEA4（M）、Tra-1-60（N）和Tra-1-81（O）。G、 I、K、L-O-核用DAPI（蓝色）复染。比例尺=200微米。（G、I、K–分别与F、H、J具有相同的视觉范围）

图2
未经处理（DP）与表达多潜能的重组（iDP）细胞的比率标记，*Tra-1-60、Tra-1-81、SSEA3*、和*上海证券交易所4*，根据流式细胞荧光测定法（A）。正常二倍体iDP细胞核型（46，XX）。染色体用DAPI（绿色）染色7-AAD（红色）（B）。iDP细胞中的端粒酶重新激活（C）。端粒酶活性在样品中，带有与端粒重复序列（iDP，电子稳定控制系统）。对照组：ES和iDP细胞在端粒酶失活（iDP）前加热（无效）。初始iDP细胞培养的端粒酶不活跃。反向iDP细胞（D）的转录-PCR（RT-PCR）分析。的表达式级别*Oct4、Sox2、Nanog、Tert、Klf4、Lin28、Dppa4、Dnmt3*在DP、iDP、，和ES细胞（E），根据实时PCR

图3
iDP细胞体外分化。胚状体的形成和特征iDP细胞培养物（A–D）中的小体（EB）和对照组中的人类ES细胞（E–H）。iDP（A）和ES（E）细胞培养中EB的形态。巢蛋白（Nes）、结蛋白（Des）和α-脂肪蛋白（AFP）、iDP-（B-D）和hES衍生的EBs分化细胞（F–H）EB。iDP细胞的定向分化（I–T）。成骨分化标志物的表达：骨连接蛋白（ON，I）和骨桥蛋白（OP，J）。肝细胞分化标志物的表达：Foxa2（K）、Hnf4α（L）、细胞角蛋白18（CK18，M）、甲胎蛋白（AFP，N）和白蛋白（ALB，O）。神经元分化标记物Prox1（P）的表达，巢蛋白（Nes，Q）双皮质激素（DC，R）、神经元特异性烯醇化酶（NSE，S）和β-III-微管蛋白（Tub3b，T）。比例尺=200μm

图4
iDP细胞形成畸胎瘤。患有畸胎瘤的受体小鼠（A）（箭头）和切除的畸胎瘤（B）皮下注射iDP单元。苏木精和伊红畸胎瘤的组织切片（C–F）：神经胶质细胞（神经上皮小管和玫瑰花结，箭头）（C）；腺上皮（D），间充质（脂肪细胞，D中的箭头松散结缔组织和血管，F）箭头（E，F）；沾满抗：波形蛋白（G）、巢蛋白（H）、泛CK（I）CK8（J）、CK18（K）和AFP（左）

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