The transcription factor Egr3 is a putative component of the microtubule organizing center in mouse oocytes

doi:10.1371/journal.pone.0094708

.2014年4月10日；9（4）：e94708。

doi:10.1371/journal.pone.0094708。 2014年电子采集。

转录因子Egr3是小鼠卵母细胞微管组织中心的假定成分

Hyejin Shin先生¹, Sojung Kwon先生¹, Haengseok Song先生², Hyunjung Jade Lim先生¹

附属公司

PMID： 24722338
预防性维修识别码：项目经理3983223
内政部： 10.1371/journal.pone.0094708

转录因子Egr3是小鼠卵母细胞微管组织中心的假定成分

Hyejin Shin先生等。公共科学图书馆一号. 2014.

.2014年4月10日；9（4）：e94708。

doi:10.1371/journal.pone.0094708。 2014年电子采集。

作者

Hyejin Shin先生¹, Sojung Kwon先生¹, Haengseok Song先生², 林贤俊¹

附属公司

¹韩国首尔孔雀大学生物医学科学技术研究所生物医学科学与技术系。
²韩国首尔CHA大学生命科学学院生物医学系。

PMID： 24722338
预防性维修识别码：项目经理3983223
内政部： 10.1371/journal.pone.0094708

摘要

锌指转录因子的早期生长反应（Egr）家族由4个成员组成。在对小鼠卵巢中Egr因子定位的研究中，我们注意到Egr3表现出与卵母细胞减数分裂纺锤体重叠的亚细胞定位。利用Egr3特异性抗体，我们确定Egr3在卵母细胞减数分裂成熟过程中与纺锤体和胞质微管组织中心（MTOCs）共定位。值得注意的是，Egr3蛋白似乎在MTOCs的γ-微管蛋白周围积聚。诺卡唑治疗导致微管解聚，导致纺锤体形成和Egr3定位中断，表明Egr3的定位依赖于纺锤体的正确配置。玻璃化卵母细胞升温后不久，在大簇Egr3附近观察到微管生长阵列。体外微管相互作用试验表明，Egr3不与聚合微管直接相互作用。在早期植入前小鼠胚胎中，Egr3在纺锤体上的定位持续存在，但这种模式直到囊胚期才持续。总之，我们的结果首次表明，Egr3a转录因子可能在小鼠卵母细胞微管组织中发挥新的非转录功能。

PubMed免责声明

利益冲突声明

竞争利益：作者特此声明，通讯作者Hyunjung Jade Lim是PLOS ONE编辑委员会成员。这并不会改变作者对《PLOS ONE》编辑政策和标准的坚持。

数字

**图1。小鼠卵母细胞减数分裂纺锤体中Egr3蛋白的亚细胞定位。**
（A） Egr3在生长卵泡内的小鼠卵母细胞中的定位。在丙酮固定的卵巢冷冻切片上进行Egr3免疫荧光染色。以2μg/ml的剂量使用兔多克隆抗Egr3抗体（Santa Cruz）。用山羊抗兔IgG Alexa Fluor 488抗体探测初级抗体。用TO-PRO-3-碘化物对DNA进行反染色。白色刻度条，100μm。模拟对照，兔IgG。绿色，Egr3；红色，DNA。（B） Egr3在小鼠卵母细胞成熟的各个阶段都定位于减数分裂纺锤体。通过卵巢穿刺获得生殖囊期卵母细胞，并在M16中培养。卵母细胞固定在3.7%甲醛中，并用抗Egr3抗体（Santa Cruz）进行免疫荧光染色。左图中的卵母细胞显示为60X，右图中显示了含有染色体区域的放大图像。模拟对照，兔IgG。PI，前期I；PMI，前中期I（培养3h）；MI，中期I（培养8h）；MII、中期II（培养12小时）。红色标尺，30μm；白色刻度条，10μm。绿色，Egr3；蓝色，DNA。

**图2。的表达式*出口风险3*小鼠组织和培养细胞中的转录物和蛋白质。**
（A） RT-PCR分析*出口风险3*在各种组织中表达。与核糖体蛋白L7的表达进行比较(*rpl7型*)或*Gapdh公司*将PI期（130个卵母细胞）或MI期（120个卵母公司）的卵母细胞合并，并进行Egr3 RT-PCR和巢式PCR。Cu，卵丘细胞；-，无RT.（B）不同组织和细胞类型中Egr3的Western blot分析。上图：用抗Egr3抗体探针Western blots分析转染CMV-GFP质粒（GFP）、空质粒（-）、pcDNA3.1/myc-his-NM质粒（NM）或pcDNA3.1/myc-his-BC质粒（BC）的293个T细胞。在10%的SDS-PAGE凝胶上运行50微克的每个细胞裂解物。底部面板：通过Western blotting分析MI卵母细胞（体外培养8小时的268个GV卵母细胞）、PI卵母细胞、卵巢、大脑和MCF7细胞（有或没有雌激素治疗）裂解物。在12%SDS-PAGE凝胶的每条通道中装载200微克组织提取物。剥离印迹，并使用抗α-微管蛋白抗体检测微管蛋白。

**图3。MI卵母细胞中Egr3和微管蛋白的免疫荧光染色。**
PI卵母细胞体外培养8%甲醛，并用抗Egr3（上部为Santa Cruz抗体，下部为Abcam抗体）、抗α-微管蛋白或抗γ-微管素（Sigma-Aldrich）抗体进行免疫荧光染色。所有抗体均以2μg/ml的浓度使用。DNA用TO-PRO-3-碘化物反染。红色标尺，30μm；白色刻度条，5μm。绿色，Egr3；红色、α-微管蛋白或γ-微管蛋白；蓝色，DNA。箭头表示Egr3蛋白在γ-微管蛋白阳性MTOCs附近的定位。

**图4。Egr3定位与小鼠卵母细胞中的微管组织有关。**
（A） MI卵母细胞用紫杉醇（微管稳定剂，1μM）或诺卡唑（微管解聚剂，10μg/ml）处理1–2 h，并用抗Egr3抗体（Santa Cruz）进行免疫荧光染色。红色标尺，30μm；白色刻度条，10μm。绿色，Egr3；红色，γ-微管蛋白；蓝色，DNA。（B） Egr3在用CytoD（肌动蛋白解聚剂，10μM）处理的MI卵母细胞和*第二组*-/-卵母细胞。*第二组*-/-卵母细胞与抗Egr3（Santa Cruz）和抗γ-微管蛋白抗体共同染色。红色标尺，30μm。绿色，Egr3；红色，γ-微管蛋白；蓝色，DNA。（C）玻璃化卵母细胞解冻时Egr3和微管的定位。玻璃化MII卵母细胞保存在LN中₂持续2周。从LN中取出卵母细胞₂，在降低浓度的蔗糖中培养，然后立即固定。用抗Egr3（Abcam）和抗α-微管蛋白抗体对这些卵母细胞进行免疫荧光染色。箭头表示Egr3积聚部位微管的生长阵列。绿色，Egr3；红色，微管（MT）。

**图5。利用体外翻译的Egr3亚型进行微管相互作用分析。**
为了检测聚合微管是否与Egr3蛋白直接相互作用，我们进行了微管相互作用分析。将来自牛脑的管蛋白（5μg/μl）在37℃聚合并稀释至0.2μg/微升。将4微升体外翻译裂解物（NM或BC）和50微升稀释的MT在室温下培养30分钟。将反应在100000×g下离心30分钟，以使聚合的MT颗粒化。上清液（S）和颗粒（P）在10%SDS-PAGE上进行，并用检测pcDNA3.1/Myc-his载体中表位的抗Egr3或抗Myc抗体进行蛋白质印迹。抗体的使用比例为1∶5000。剥离印迹，用抗微管蛋白抗体检测微管蛋白。数据表明，微管的存在并不影响上清液和颗粒中Egr3产物的数量，这表明微管与Egr3之间没有直接的相互作用。

**图6。Egr3在MCF7细胞和小鼠睾丸中的定位。**
（A） MCF7人乳腺癌细胞Egr3的免疫荧光染色。细胞在甲醇中固定，并用抗Egr3（Santa Cruz）和抗α-微管蛋白（Sigma）抗体染色。所有抗体均以2μg/ml的浓度使用。下面板中的白色方框区域扩大。绿色，Egr3；红色，α-微管蛋白；蓝色，DNA。（B）将4周龄小鼠睾丸冷冻切片固定在4%多聚甲醛中，并用抗Egr3（Santa Cruz）和抗α-微管蛋白抗体进行免疫荧光染色。绿色，Egr3；红色，α-微管蛋白；蓝色，DNA。（C）小鼠脑冷冻切片进行Egr3免疫荧光染色。白色矩形内的区域放大显示（左）。

**图7。植入前小鼠胚胎中Egr3的免疫荧光染色。**
将不同发育阶段的胚胎固定在4%多聚甲醛中，并用抗Egr3（Santa Cruz）和抗α-微管蛋白抗体进行免疫荧光染色。箭头表示卵裂球中的有丝分裂纺锤体。绿色，Egr3；红色，α-微管蛋白；蓝色，DNA。

请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

小鼠卵母细胞中周心蛋白的缺失破坏了微管组织中心功能和减数分裂纺锤体组织。
Ma W，Viveiros MM。 Ma W等人。 Mol Reprod Dev.2014年11月；81(11):1019-29. doi:10.1002/mrd.22422。Epub 2014年9月29日。 2014年摩尔再现发展。 PMID：25266793 免费PMC文章。
NEDD1对哺乳动物卵母细胞减数分裂纺锤体的稳定性和染色体的准确分离至关重要。
Ma W、Baumann C、Viveiros MM。 Ma W等人。开发生物学。2010年3月15日；339(2):439-50. doi:10.1016/j.ydbio.2010.01.009。Epub 2010年1月15日。开发生物学。2010 PMID：20079731
的表达式埃及3小鼠性腺及其在卵母细胞中的定位和功能。
Shin H、Seol DW、Nam M、Song H、Lee DR、Lim HJ。 Shin H等人。亚洲-澳大利亚动物科学杂志。2017年6月；30(6):781-787. doi:10.5713/ajax.16.0798。Epub 2016年12月17日。亚洲-澳大利亚动物科学杂志。2017 PMID：28002932 免费PMC文章。
微管组织中心：重新评估。
Lüders J，Stearns T。 Lüders J等人。 Nat Rev Mol细胞生物学。2007年2月；8(2):161-7. doi:10.1038/nrm2100。 Nat Rev Mol细胞生物学。2007 PMID：17245416 审查。
植物细胞中无着丝粒微管阵列组装的微管成核。
Lee YJ、Liu B。 Lee YJ等人。新植物醇。2019年6月；222(4):1705-1718. doi:10.1111/nph.15705。Epub 2019年2月25日。新植物醇。2019 PMID：30681146 审查。

查看所有类似文章

引用人

基于预测性干细胞相关特征构建卵巢癌转移特异性调控网络。
王W、郭H、吴S、西安S、张W、张R、陈Z、苏K、张Y、朱Y、楚D、赵M、唐Z、郑C、黄Z、马Q、郭R。王伟等。生殖科学。2023年9月；30(9):2634-2654. doi:10.1007/s43032-022-01134-3。Epub 2023年3月20日。生殖科学。2023 PMID：36940084
转录组和代谢组的综合分析揭示了母猪从发情到泌乳的生物学基础。
石磊，李浩，黄X，舒Z，李J，王L，闫H，王L。 Shi L等。 iScience。2022年12月17日；26（1）：105825。doi:10.1016/j.isci.2022.105825。eCollection 2023年1月20日。 iScience。2022 PMID：36636351 免费PMC文章。
结肠癌干细胞中神经发育基因表达特征的鉴定揭示了表皮生长因子2在肿瘤发生中。
Regan JL、Schumacher D、Staudte S、Steffen A、Lesche R、Toedling J、Jourdan T、Haybaeck J、Golob-Schwarzl N、Mumberg D、Henderson D、Győrfy B、Regenbrecht CRA、Keilholz U、Schäfer R、Lange M。 Regan JL等人。 iScience。2022年5月31日；25(7):104498. doi:10.1016/j.isci.2022.104498。eCollection 2022年7月15日。 iScience。2022 PMID：35720265 免费PMC文章。
有丝分裂中的月光：转录和剪接因子的有丝分裂功能分析。
Somma MP、Andreyeva EN、Pavlova GA、Pellacani C、Bucciarelli E、Popova JV、Bonaccosi S、Pindyurin AV、Gatti M。 Somma MP等人。细胞。2020年6月26日；9(6):1554. doi:10.3390/cells9061554。细胞。2020 PMID：32604778 免费PMC文章。审查。
转录因子EGR1和EGR3在胶质瘤中的表达及预后价值。
Knudsen AM、Eilertsen I、Kielland S、Pedersen MW、Sörensen MD、Dahlrot RH、Boldt HB、Munthe S、Poulsen FR、Kristensen BW。 Knudsen AM等人。科学报告2020年6月9日；10(1):9285. doi:10.1038/s41598-020-66236-x。科学报告2020。 PMID：32518380 免费PMC文章。

查看所有“被引用”文章

工具书类

1. O'Donovan KJ、Tortellotte WG、Millbrandt J、Baraban JM（1999）转录调节因子的EGR家族：分子和系统神经科学界面的进展。《神经科学趋势》22:：167-173。S0166-2236（98）01343-5[pii]。-公共医学
1. Gashler A，Sukhatme VP（1995）早期生长反应蛋白1（Egr-1）：锌指转录因子家族的原型。Prog核酸分子生物学50:191–224。-公共医学
1. Tortellotte WG，Milbrandt J（1998），缺乏转录因子Egr3的小鼠感觉共济失调和肌梭发育不全。《自然遗传学》20:87–91 10.1038/1757[doi]-内政部-公共医学
1. Gallitano-Mendel A、Izumi Y、Tokuda K、Zorumski CF、Howell MP等（2007）。即刻早期基因早期生长反应基因3调节对压力和新奇性的适应。神经科学148:633–643 S0306-4522（07）00597-0[pii]；10.1016/j.neuroscience.2007.05.050[doi]-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
1. Katche C、Goldin A、Gonzalez C、Bekinschtein P、Medina JH（2012）长期记忆储存的维持依赖于训练后晚期Egr-1的表达。神经生理学学习记忆98:220–227 S1074-7427（12）00097-4[pii]；10.1016/j.nlm.2012.08.001[美国国防部]-内政部-公共医学

出版物类型

行动

物质

行动
行动
行动

赠款和资金

本文来源于2011年孔雀大学研究支持项目(网址：www.konkuk.ac.kr)。资助者在研究设计、数据收集和分析、决定出版或编写手稿方面没有任何作用。

LinkOut-更多资源

[1] O'Donovan KJ、Tortellotte WG、Millbrandt J、Baraban JM（1999）转录调节因子的EGR家族：分子和系统神经科学界面的进展。《神经科学趋势》22:：167-173。S0166-2236（98）01343-5[pii]。-公共医学

[2] O'Donovan KJ、Tortellotte WG、Millbrandt J、Baraban JM（1999）转录调节因子的EGR家族：分子和系统神经科学界面的进展。《神经科学趋势》22:：167-173。S0166-2236（98）01343-5[pii]。-公共医学

[3] Gashler A，Sukhatme VP（1995）早期生长反应蛋白1（Egr-1）：锌指转录因子家族的原型。Prog核酸分子生物学50:191–224。-公共医学

[4] Gashler A，Sukhatme VP（1995）早期生长反应蛋白1（Egr-1）：锌指转录因子家族的原型。Prog核酸分子生物学50:191–224。-公共医学

[5] Tortellotte WG，Milbrandt J（1998），缺乏转录因子Egr3的小鼠感觉共济失调和肌梭发育不全。《自然遗传学》20:87–91 10.1038/1757[doi]-内政部-公共医学

[6] Tortellotte WG，Milbrandt J（1998），缺乏转录因子Egr3的小鼠感觉共济失调和肌梭发育不全。《自然遗传学》20:87–91 10.1038/1757[doi]-内政部-公共医学

[7] Gallitano-Mendel A、Izumi Y、Tokuda K、Zorumski CF、Howell MP等（2007）。即刻早期基因早期生长反应基因3调节对压力和新奇性的适应。神经科学148:633–643 S0306-4522（07）00597-0[pii]；10.1016/j.neuroscience.2007.05.050[doi]-内政部-项目管理咨询公司-公共医学

[8] Gallitano-Mendel A、Izumi Y、Tokuda K、Zorumski CF、Howell MP等（2007）。即刻早期基因早期生长反应基因3调节对压力和新奇性的适应。神经科学148:633–643 S0306-4522（07）00597-0[pii]；10.1016/j.neuroscience.2007.05.050[doi]-内政部-项目管理咨询公司-公共医学

[9] Katche C、Goldin A、Gonzalez C、Bekinschtein P、Medina JH（2012）长期记忆储存的维持依赖于训练后晚期Egr-1的表达。神经生理学学习记忆98:220–227 S1074-7427（12）00097-4[pii]；10.1016/j.nlm.2012.08.001[美国国防部]-内政部-公共医学

[10] Katche C、Goldin A、Gonzalez C、Bekinschtein P、Medina JH（2012）长期记忆储存的维持依赖于训练后晚期Egr-1的表达。神经生理学学习记忆98:220–227 S1074-7427（12）00097-4[pii]；10.1016/j.nlm.2012.08.001[美国国防部]-内政部-公共医学

将引文保存到文件

电子邮件引文

添加到集合

添加到我的书目

您保存的搜索

为外部引文管理软件创建文件

你的RSS订阅源

转录因子Egr3是小鼠卵母细胞微管组织中心的假定成分

附属公司

转录因子Egr3是小鼠卵母细胞微管组织中心的假定成分

作者

附属公司

摘要

利益冲突声明

数字

类似文章

引用人

工具书类

出版物类型

MeSH术语

物质

赠款和资金

LinkOut-更多资源

全文源

其他文献来源

分子生物学数据库

摘要

利益冲突声明

数字

类似文章

引用人

工具书类

出版物类型

MeSH术语

物质

相关信息

赠款和资金

LinkOut-更多资源

全文源

其他文献来源

分子生物学数据库