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.2013年11月；27(11):4619-29.
doi:10.1096/fj.13-2288577。 Epub 2013年8月2日。

内皮素-1受体拮抗剂调节镰状细胞病患者细胞表面相关蛋白二硫键异构酶

格雷戈里·普拉多 1, 何塞·罗梅罗, 艾丽西娅·里维拉
附属公司

内皮素-1受体拮抗剂调节镰状细胞病患者细胞表面相关蛋白二硫键异构酶

格雷戈里·普拉多等。 美国财务会计准则委员会J. 2013年11月.

摘要

内皮素-1（ET-1）水平升高、巯基蛋白紊乱和红细胞水合状态通过尚未解决的机制在镰状细胞病（SCD）中发挥重要作用。蛋白质二硫键异构酶（PDI）是一种介导硫醇/二硫键交换反应的氧化还原酶。我们提供证据表明，PDI存在于人和小鼠红细胞膜中，用抗PDI单克隆抗体选择性阻断可导致Gardos通道活性降低（1.6±0.03至0.56±0.02 mmol·10（13）细胞（-1）·min（-1），P<0.001）和镰状红细胞密度降低（D50:1.115±0.001至1.104±0.001 g/ml，P=0.012）IC50为4 ng/ml。我们观察到，ET-1通过酪蛋白激酶II的机制增加了红细胞相关的PDI活性（3.1±0.2至5.6±0.4%，P<0.0001）。与这些结果一致，用ET-1受体拮抗剂对BERK镰刀转基因小鼠进行体内治疗，可降低循环和红细胞相关的PDI活性（7.1±0.3至5.2±0.2%，P<0.0001），同时改善血液学参数和Gardos通道活性。因此，我们的结果表明，PDI是SCD中的一个新靶点，它调节红细胞体积和氧化应激，并可能促进细胞粘附和内皮激活，导致SCD中观察到的血管阻塞。

关键词：伯克利转基因SCD小鼠；加尔多斯海峡；红细胞；氧化还原反应。

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数字

图1。
图1。
硫醇阻滞剂抑制体外人类红细胞。新鲜分离人镰状红细胞，并按照材料和方法中的描述，在存在或不存在0.1 mM DTNB、0.1 mM PAO、3 mM杆菌肽（Bac）或10 mM DTT的情况下测量通道活性(A类)或0.1 mM三碘甲状腺原氨酸（T3）、20 ng/ml单抗PDI或20 ng/ml IgG(B类). 根据K的差值计算通道活性+50 nM木瓜毒素（ChTX）存在或不存在时的通量。数值代表平均值±标准偏差,n个=3名受试者中5人*P（P）< 0.05, **P（P）< 0.01;βP（P）< 0.001.
图2。
图2。
红细胞sa-PDI活性。PDI在中的活动体外使用放射性标记物测量完整的小鼠和人类红细胞125材料和方法中所述的I-Tyr-S-PDL分析。A类)来自其他健康人血液的完整红细胞中的RBC sa-PDI活性与血红蛋白A（AA，n个=18），镰刀形细胞血液中含有血红蛋白SS（SS，n个=21), *P（P）< 0.0001.B类)BERK镰状细胞转基因、BERK性状、SAD转基因和β-S公司-安的列斯群岛（βS公司-Ant）转基因小鼠与野生型C57BL/6J和HbAKO小鼠的比较；n个= 6. *P（P）< 0.0003.C类)在人类镰状红细胞中，Gardos通道活性与sRBC sa-PDI活性相关。在同一血液样本中同时测量Gardos通道和PDI活性(n个=21). 与的线性相关第页2= 0.17642,P（P）= 0.029.D类)PDI阻断可减少细胞脱水。如材料和方法中所述，在氧合/脱氧循环之前的基线sRBCs中，以及在不存在（实心圆圈）或存在mAb PDI（空心圆圈）或非特异性IgG（空心圆圈）的情况下，测定红细胞密度分布图。数值代表平均值±标准偏差3例SCD患者的3个实验。
图3。
图3。
人红细胞中PDI和KCNN4的免疫检测。A类)人镰状红细胞（SS）和正常红细胞（AA）血浆膜相关PDI的免疫检测。B类)对KCNN4进行免疫沉淀，然后对PDI（左侧面板）或KCNN4（右侧面板）进行Western blot。C类)如材料和方法中所述，在镰状红细胞中进行PDI免疫沉淀，然后进行PDI（左面板）或KCNN4（右面板）的Western blot。IgG作为对照。
图4。
图4。
ET-1刺激RBC Gardos通道活性和sa-PDI活性。A类)mAb PDI（20 ng/ml）阻断ET-1刺激的Gardos通道活性。在缺乏A23187和1.5 mM细胞外钙的情况下测量通道活性2+镰状红细胞。数值代表平均值±标准偏差,n个= 9. *P（P）< 0.05, **P（P）< 0.01.B类)ET-1（500nM）在镰状红细胞中诱导sa PDI活性。BQ3020（1μM）和IRL1620（1µM）是两种选择性ET-1受体B亚型激动剂，用作阳性对照。数值代表平均值±标准偏差三次测定*P（P）< 0.0001.
图5。
图5。
蛋白激酶CKII抑制剂阻断ET-1诱导的镰状红细胞sa-PDI活性和细胞脱水。A类)按照材料和方法中的描述测量膜和细胞溶质部分的CKII活性；使用了500 nM ET-1和2μM TBB（一种特定的CKII抑制剂）。ET-1的统计比较与。ET-1在TBB在场的情况下。数值代表平均值±标准偏差三份测定结果*P（P）< 0.05,**P（P）< 0.001;βP（P）< 0.003;αP（P）< 0.002;#P（P）<0.004。B类)在存在或不存在2μM TBB的情况下，ET-1在完整镰状红细胞中诱导sa-PDI活性。按照材料和方法中的描述，用荧光法测量sa-PDI。数值表示平均值±标准偏差共6次测定。RFU，相对荧光单位*P（P）< 0.05, **P（P）< 0.001.C类)按照材料和方法中的描述，在没有（对照组，开口三角形）或存在20μM芹菜素（开口圆形）或2μM TBB（实心三角形）的情况下，在氧合/除氧循环之前（基线，实心方形）或之后3 h，测量镰状红细胞的红细胞密度分布。结果代表了对3名不同受试者进行的重复测定的一项实验。
图6。
图6。
体内用ETRA治疗BERK镰状转基因小鼠导致PDI活性降低。A类)用放射性标记物测定红细胞sa-PDI活性125如材料和方法所述，完整细胞中的I-Tyr-SS-PDL偶联物；n个= 5. *P（P）< 0.02.B类)如材料和方法中所述，使用荧光标记共轭方案测量血浆循环PDI活性水平；n个= 9. *P（P）< 0.003.C类)如材料和方法中所述，使用来自Applied Biosystems的市售探针和引物组，通过在单重实时RT-PCR反应上的TaqMan基因表达测定，测定小鼠主动脉内皮细胞早期培养物的PDI mRNA水平。β-2-微球蛋白用作内源性对照，n个= 5. 对照组，载体（盐水）处理的BERK小鼠*P（P）< 0.0001.
图7。
图7。
欧洲贸易监管局体内改善BERK镰刀转基因小鼠的血液学参数。A类)ETRA对平均细胞体积（MCV）和平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）的影响。按照材料和方法中的描述确定血液学参数；n个= 6. *P（P）< 0.001.B类)按照材料和方法中的描述测量Gardos通道，并表示为K的charybodotoxin敏感性分数+注入完整的小鼠红细胞。数值代表平均值±标准偏差在6个实验中进行三次测定*P（P）< 0.001.
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    1. Bartolucci P.、Brugnara C.、Teixeira-Pinto A.、Pissard S.、Moradkhani K.、Jouault H.、Galacteros F.（2012）镰状细胞综合征的红细胞密度与特定临床表现和溶血相关。血液120、3136–3141-公共医学
    1. Kaul D.K.、Fabry M.E.、Windisch P.、Baez S.、Nagel R.L.（1983）镰状细胞性贫血的红细胞在流变学和血流动力学特征上具有异质性。临床杂志。投资。72、22–31-项目管理委员会-公共医学
    1. Hebbel R.P.、Morgan W.T.、Eaton J.W.、Hedlund B.E.（1988）镰刀血红蛋白不稳定导致的加速自氧化和血红素损失。国家。阿卡德。科学。美国85、237–241-项目管理委员会-公共医学
    1. Halliwell B.、Gutteridge J.M.（1984）脂质过氧化、氧自由基、细胞损伤和抗氧化治疗。《柳叶刀》1396–1397-公共医学
    1. Sheng K.，Shariff M.，Hebbel R.P.（1998）血红蛋白A和S.血液的比较氧化91，3467–3470-公共医学

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