跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https公司

网站是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2011年12月23日；286(51):44211-44217.
doi:10.1074/jbc。M111.242289。 Epub 2011年10月25日。

组蛋白去乙酰化酶3对内皮细胞半乳糖凝集素-9蛋白表达的正向调节

赛杜尔·阿拉姆 1, 李洪玲 1, 安德里亚娜·玛格丽蒂 1, 丹尼尔-马丁 1, 安娜·赞佩塔基 1, 瓦西拉·哈比 1, 吉莉安·科克里尔 2, 胡燕华 1, 徐庆波 1, 曾玲芳 三
附属公司

组蛋白去乙酰化酶3对内皮细胞半乳糖凝集素-9蛋白表达的正向调节

赛杜尔·阿拉姆等。 生物化学杂志. .

摘要

炎症反应可诱导内皮细胞中半乳糖凝集素-9的表达。然而，其表达机制尚不清楚。在本研究中，我们发现干扰素-γ（IFN-γ）以时间依赖性的方式诱导人内皮细胞中galectin-9的表达，这与组蛋白去乙酰化酶（HDAC）的激活相一致。当内皮细胞被HDAC3抑制剂apicidin或shRNA-HDAC3敲除处理时，IFN-γ诱导的galectin-9表达被消除。HDAC3的过度表达诱导了磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）和干扰素反应因子3（IRF3）之间的相互作用，导致IRF3磷酸化、核移位和半乳糖凝集素-9的表达。HDAC3是PI3K/IRF3相互作用的支架蛋白。除了半乳糖凝集素-9的表达外，IFN-γ还诱导半乳糖凝素-9定位到质膜上，这与HDAC3无关。重要的是，HDAC3对PI3K和IRF3的组成性转录至关重要，这可能与galectin-9表达的基础水平有关。IRF3的磷酸化对galectin-9的表达至关重要。本研究提供了新的证据，证明HDAC3通过与PI3K-IRF3信号通路的相互作用调节内皮细胞中半乳糖凝集素-9的表达。

PubMed免责声明

数字

图1。
图1。
IFN-γ诱导人脐静脉内皮细胞中半乳糖凝集素-9在mRNA和蛋白质水平上的表达。 A类和B类，用10 ng/ml IFN-γ处理HUVECs指定的时间，然后对半乳糖凝集素-9 mRNA进行定量RT-PCR分析(A类)半乳糖凝集素-9蛋白的Western blot分析(B类,下部面板代表galectin-9蛋白相对于GAPDH的相对水平。*，第页< 0.05; **,第页< 0.01.C类，用10 ng/ml IFN-γ处理HUVEC 16 h，然后用半乳糖凝集素-9抗体进行免疫荧光染色(绿色). 包括DAPI对细胞核进行反染色(蓝色). 采用PBS作为载体控制。IgG作为染色的主要抗体对照。比例尺，5微米。注意，IFN-γ处理细胞的荧光强度显著高于未处理细胞。所示数据代表平均值±S.E(误差线)三个独立实验的结果。
图2。
图2。
HDAC3活性对半乳糖凝集素-9的表达至关重要。 A类，IFN-γ增加HDAC活性。在指定的时间内用10 ng/ml IFN-γ处理HUVEC，然后进行HDAC活性测定。任意单位定义为A420纳米/μg蛋白质，未经处理的设定值为1.0.*，第页< 0.05.B–D类apicidin降低了基础水平和IFN-γ诱导的galectin-9表达。HUVEC用200 nmol/L的阿司匹丁预处理1 h，然后用10 ng/ml的IFN-γ在阿司匹定存在下处理16 h，然后进行免疫荧光染色(B类:绿色，半乳糖凝集素-9；蓝色，DAPI；比例尺，5μm），Western blot分析(C类)和定量RT-PCR分析(D类)如图所示。*，第页< 0.05; ***,第页< 0.0001. 所示数据代表平均值±S.E(误差线)三个独立实验的结果。二甲基亚砜，二甲基亚砜。
图3。
图3。
敲除HDAC3可降低基础水平和IFN-γ诱导的galectin-9表达。 A–CHDAC3的敲除降低了galectin-9表达的基础水平。HUVEC感染非靶点(NTsh公司)或HDAC3(HD3小时)1×10的shRNA慢病毒7单位/1×106细胞72小时，然后进行Western blotting(A类)，常规RT-PCR(B类)和定量RT-PCR(C类)化验。任意单位定义为靶基因mRNA与18S RNA的比率，NTsh的比率设置为1.0。**，第页< 0.01; ***,第页< 0.0001.D类和E类，敲除HDAC3可消除IFN-γ诱导的galectin-9表达。HUVEC感染1×10的NTsh或HD3sh RNA7单位/1×106细胞48小时，然后用10 ng/ml IFN-γ处理16小时，然后分离膜部分和提取RNA。Western blotting检测总细胞裂解物和膜组分中HDAC3和半乳糖凝集素-9蛋白水平(D类)，用定量RT-PCR检测mRNA(E类). *,第页< 0.05; ***,第页< 0.0001. 所示数据代表平均值±S.E(误差线)三个独立实验的结果。
图4。
图4。
HDAC3的过度表达增加了galectin-9的表达。 A–C，HUVEC转染pShuttle2-FLAG-HDAC3质粒（pHDAC3，2μg/2×106细胞），然后进行Western印迹(A类)，常规RT-PCR(B类)和实时RT-PCR(C类)转染后48h检测。pShuttle2-FLAG矢量作为模拟控件包含在内。**，第页< 0.01; ***,第页< 0.0001.D–F型，HUVECs在m.o.i.指示时感染Ad-FLAG-HDAC3病毒，然后进行蛋白质印迹(D类)，常规RT-PCR(E类)和实时RT-PCR(F类)感染后48h检测。Ad-null病毒被纳入阴性对照，以补偿m.o.i.*，第页< 0.05; **,第页< 0.01. -诱导倍数定义为靶基因mRNA与18S RNA的比值，对照组的比值设为1.0。所示数据代表平均值±S.E(误差线)三个独立实验的结果。
图5。
图5。
HDAC3对IFN-γ诱导的PI3K-IRF3活化和半乳糖凝集素-9表达至关重要。 A类和B类，PI3K对IFN-γ诱导的半乳糖凝集素-9的表达和IRF3的激活至关重要。用PI3K抑制剂LY294002（5μmol/L）预处理HUVECs 1小时，然后在LY294002存在下用10ng/ml IFN-γ处理16小时，然后进行免疫荧光染色(A类:绿色，半乳糖凝集素-9；蓝色，DAPI；比例尺，5μm）和Western blot分析(B类). 加入相同数量的二甲基亚砜作为载体对照。第页-IRF3表示Ser-386处IRF3的磷酸化。C–E类，HDAC3对PI3K和IRF3的基础水平表达以及IFN-γ诱导的IRF3激活至关重要。HUVEC感染NTsh或HD3sh RNA 48 h，然后用10 ng/ml IFN-γ处理16 h，然后进行Western blot分析(C类、代表性形象；D类定量分析）和定量RT-PCR分析(E类). *,第页< 0.05; **,第页< 0.01.F类，IRF3磷酸化对galectin-9的表达至关重要。将pcDNA3（载体）、pcDNA3-IRF3（WT）或pcDNA3/IRF3S386A（S386A）质粒转染HUVEC 48 h，然后进行IRF3磷酸化和galectin-9表达的Western blot分析。所示数据为代表性或平均值±标准误差(误差线)三个独立实验的结果。
图6。
图6。
IFN-γ增强HDAC3-p85α-IRF3复合物的形成。 A类HDAC3过度表达诱导IRF3核移位。HUVEC感染10 m.o.i.Ad-HDAC3病毒48 h，然后进行细胞分数测定。将Ad-null病毒作为对照。C.E公司，胞液提取物；N.电子，核提取物。B类，HDAC3敲除消融IFN-γ诱导的IRF3核移位。HUVEC感染NTsh或HD3sh 72 h，然后用10 ng/ml IFN-γ处理4 h，然后进行细胞分数测定。包括抗tubin和组蛋白H4抗体，以鉴定胞浆和核组分。C类，IFN-γ诱导HDAC3-p85α-IRF3复合物的形成。HUVEC在10 m.o.i感染Ad-FLAG-HDAC3病毒，48 h后用10 ng/ml IFN-γ处理4 h，然后用抗FLAG抗体进行免疫沉淀分析。输入50μg裂解物。D类，IFN-γ增强内源性HDAC3与p85α-IRF3的关联。用10 ng/ml IFN-γ处理HUVEC 4 h，然后用抗HDAC3抗体进行免疫沉淀分析。E类，HDAC3活性对于HDAC3-p85α-IRF3复合物的形成是不必要的。用10 ng/ml IFN-γ处理HUVEC，在有或无阿司匹丁的情况下处理4小时，然后用抗IRF3抗体进行免疫沉淀。二甲基亚砜作为载体对照。
图7。
图7。
干扰素-γ介导的galectin-9在HUVEC中表达的示意图。在HUVEC中，HDAC3参与IRF3和PI3K的p85α亚单位的组成性表达。在IFN-γ治疗下，HDAC3、PI3K和IRF3形成复合物，导致IRF3在丝氨酸386处磷酸化，进而激活galectin-9表达。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

参考文献

    1. Leffler H.、Carlsson S.、Hedlund M.、Qian Y.、Poirier F.（2004）《糖业杂志》。期刊19，433–440-公共医学
    1. Norling L.V.、Perretti M.、Cooper D.（2009）《内分泌杂志》。201, 169–184-公共医学
    1. Yang R.Y.，Rabinovich G.A.，Liu F.T.（2008）《分子医学专家评论》10，e17。-公共医学
    1. Asakura H.、Kashio Y.、Nakamura K.、Seki M.、Dai S.、Shirato Y.，Abedin M.J.、Yoshida N.、Nishi N.、Imaizumi T.、Saita N.、Toyama Y.、Takashima H.、Nakamora T.、Ohkawa M.、Hirashima M.（2002）《免疫学杂志》。169, 5912–5918-公共医学
    1. Matsumoto R.、Matsumota H.、Seki M.、Hata M.、Asano Y.、Kanegasaki S.、Stevens R.L.、Hirashima M.（1998）《生物学杂志》。化学。273, 16976–16984-公共医学

出版物类型