Recombinant expression and purification of the 2,5-diketocamphane 1,2-monooxygenase from the camphor metabolizing Pseudomonas putida strain NCIMB 10007

doi:10.1186/2191-0855-1-13

.2011年6月23日；1（1）:13。

doi:10.1186/2191-0855-1-13。

樟脑代谢恶臭假单胞菌NCIMB10007株2,5-二酮樟脑1,2-单加氧酶的重组表达及纯化

玛丽亚·卡多¹, Stefan Saß, 马伦·施密特, Uwe T Bornscheuer公司

附属公司

PMID： 21906366
预防性维修识别码：下午3222318
内政部： 10.1186/2191-0855-1-13

樟脑代谢恶臭假单胞菌NCIMB10007株2,5-二酮樟脑1,2-单加氧酶的重组表达及纯化

玛丽亚·卡多等。 AMB快递. 2011.

.2011年6月23日；1(1):13.

doi:10.1186/2191-0855-1-13。

作者

玛丽亚·卡多¹, Stefan Saß, 玛伦·施密特, Uwe T Bornscheuer公司

附属

¹格列夫斯瓦尔德大学生物化学研究所生物技术和酶催化系，Felix-Hausdorff-Str，4，D-17487 Greifswald，Germany。uwe.bornscheuer@uni-greifswald.de。

PMID： 21906366
预防性维修识别码： PMC3222318型
内政部： 10.1186/2191-0855-1-13

摘要

报道了三种不同的Baeyer-Villiger单加氧酶（BVMO）参与恶臭假单胞菌NCIMB10007对樟脑的代谢。在（+）-樟脑降解过程中，形成2,5-二酮樟脑作为2,5-二酮樟脑1,2-单加氧酶的底物。这种酶编码在CAM质粒上，依赖于辅因子FMN和NADH，因此属于II型BVMO。我们在大肠杆菌中克隆并重组表达了2,5-二酮环戊烷1,2-单加氧酶（2,5-DKCMO）的氧化亚基，然后进行基于His-标记的亲和纯化。然后研究了代表不同BVMO底物类别的一系列化合物，但只有双环酮被2,5-DKCMO用作粗细胞提取物或纯化后转化。有趣的是，（-）-樟脑也被氧化了，但转化率比（+）-樟醇低约3倍。此外，在没有NADH脱氢酶亚单位的情况下，观察到纯化的2,5-DKCMO的活性。

PubMed免责声明

数字

图1
**樟脑降解*恶臭假单胞菌*NCIMB 10007：**在第一步中，樟脑（1）被P450羟基化_凸轮-单加氧酶（Unger等人，1986年），然后被5-外醇脱氢酶氧化（Koga等人，1989年），生成相应的二酮樟脑（3）。（+）-1被2,5-二氯氨烷1,2-单加氧酶（a）降解，而（-）-1需要3,6-二酮环丙烷1,6-单加氧酶（b）。生成的两种内酯都不稳定，并导致2-氧基-Δ3-4,5,5-三甲基环戊烯基乙酸自发形成，进一步转化为辅酶a衍生物（4），它再次是第三个涉及的BVMO（2-氧基–Δ3-4,1,5-三甲基环戊烯酸单加氧酶，通常被指定为MO2）的底物（Ougham等人，1983年）.

图2
**CAM-plasmid操作员：**CamA：putidaredoxin还原酶（M12546.1）；CamB:putidaredoxin（J05406.1）；CamC:细胞色素P-450cam（M12546.1）；CamD:5-外醇脱氢酶（M13471.1）；CamP:1,2-二酮环丙烷-2,5-单加氧酶（AY450285.1）；CamQ：内酯水解酶（AY450285）；CamR：调节蛋白。本研究通过基因游走PCR鉴定了推测的3-酮酸-CoA转移酶A和B。

图3
**用于表达来自*恶臭杆菌*NCIMB 10007受T7启动子控制*大肠杆菌*BL21型**使用限制性内切酶的位点引入2,5-DKCMO基因*Nde公司*我和*Xho公司*我赞成克隆。

图4
**2,5-DKCMO的SDS-PAGE分析：车道1：标记：150、130、100、70、55、35、25、15 kDa；第二道：粗提物（总蛋白41μg）；通道3：纯化蛋白（22μg）**.

图5
**用于2,5-DCMO-催化Baeyer-Villiger氧化的基质**.6-8表示单环酮，9-11个取代芳香酮，12个用作脂肪族酮的示例，13-16个用作双环酮。

请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

异酶二酮环丙烷单加氧酶恶臭假单胞菌ATCC 17453-60年后的历史与神秘。
威利茨A。威利茨A。微生物。2021年12月15日；9(12):2593. doi:10.3390/微生物9122593。微生物。2021 PMID：34946195 免费PMC文章。审查。
樟脑途径还原：恶臭假单胞菌ATCC 17453的2,5-和3,6-二酮樟脑单加氧酶的功能性重组表达及其同源的黄素还原酶催化Baeyer-Villiger反应。
岩崎H、格罗斯S、贝杰隆H、利施H、莫利K、长谷川Y、刘伯爵。 Iwaki H等人。应用环境微生物。2013年5月；79(10):3282-93. doi:10.1128/AEM.03958-12。Epub 2013年3月22日。应用环境微生物。2013 PMID：23524667 免费PMC文章。
通过对两个缺失基因的鉴定、它们在大肠杆菌中的功能表达和生化特性分析，完成了恶臭假单胞菌NCIMB 10007樟脑代谢相关的BVMO系列。
Kadow M、Loschinski K、Sass S、Schmidt M、Bornscheuer UT。 Kadow M等人。应用微生物生物技术。2012年10月；96(2):419-29. doi:10.1007/s00253-011-3859-1。应用微生物生物技术。2012 PMID：22286514
来自樟脑生长的恶臭假单胞菌ATCC 17453的二酮camphane对映异构体特异性“Baeyer-Villiger”单加氧酶。
Jones KH、Smith RT、Trudgill PW。 Jones KH等人。微生物杂志。1993年4月；139(4):797-805. doi:10.1099/00221287-139-4-797。微生物杂志。1993 PMID：8515237
来自鸡胚CAM质粒的特征化Flavin依赖性双组分单加氧酶恶臭假单胞菌ATCC 17453（NCIMB 10007）：酮内酯酶的别称。
威利茨A。威利茨A。微生物。2018年12月20日；7（1）：1。doi:10.3390/微生物7010001。微生物。2018 PMID：30577535 免费PMC文章。审查。

查看所有类似文章

引用人

氧气在微生物生物氧化中的作用：挑战生物化学，以一种长期被误解的酶的简短历史为例。
威利茨A。威利茨A。微生物。2024年2月15日；12(2):389. doi:10.3390/微生物12020389。微生物。2024 PMID：38399793 免费PMC文章。审查。
一种冷活性黄素依赖性单加氧酶斯瓦尔巴简氏杆菌解锁低温下Baeyer-Villiger单加氧酶的应用。
Chánique AM、Polidori N、Sovic L、Kracher D、Assil Companioni L、Galuska P、Parra LP、Gruber K、Kourist R。 Chánique AM等人。 ACS目录。2023年2月27日；13(6):3549-3562. doi:10.1021/acscatal.2c05160。eCollection 2023年3月17日。 ACS目录。2023 PMID：36970468 免费PMC文章。
亚麻酸还原酶和FMN依赖的双组分单加氧酶进行亲核Baeyer-Villiger生物氧化的物种间氧化还原偶联。
威利茨A。威利茨A。微生物。2022年12月27日；11(1):71. doi:10.3390/微生物11010071。微生物。2022 PMID：36677363 免费PMC文章。
通过2,5-DKCMO模块探索温度对Baeyer-Villiger生物氧化的对映选择性的影响：SLM方法。
Röllig R、Paul CE、Duquesne K、Kara S、Alphand V。 Röllig R等人。化学生物化学。2022年8月3日；23（15）：e202200293。doi:10.1002/cc.202200293。Epub 2022年6月16日。化学生物化学。2022 PMID：35648642 免费PMC文章。
异酶二酮环丙烷单加氧酶恶臭假单胞菌ATCC 17453-60年后的历史与神秘。
威利茨A。威利茨A。微生物。2021年12月15日；9(12):2593. doi:10.3390/微生物9122593。微生物。2021 PMID：34946195 免费PMC文章。审查。

查看所有“被引用”文章

工具书类

1. Bradshaw WH、Conrad HE、Corey EJ、Gunsalus IC。（+）-樟脑的微生物降解。《美国化学学会杂志》，1959年；4492:5507–5507.
1. Chakrabarty AM。假单胞菌中的质粒。《遗传学年鉴》。1976;10:7–30. doi:10.1146/annurev.ge.10.120176.000255。-内政部-公共医学
1. Chung CT，Niemela SL，Miller RH。活性大肠杆菌的一步制备-细菌细胞在同一溶液中的转化和储存。美国国家科学院院刊1989；86:2172–2175. doi:10.1073/pnas.86.7.2172。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学
1. Conrad HE、DuBus R、Namvedt M、Gunsalus IC。混合功能氧化II：樟脑内酯化酶的分离和性质。生物化学杂志。1965a年；240:495–503.-公共医学
1. Conrad HE、Lieb K、Gunsalus IC。混合功能氧化III：樟脑酮内酯化中的电子传递复合物。生物化学杂志。1965b年；240:4029–4037.-公共医学

LinkOut-更多资源

全文源
其他文献来源
- 镜片-专利引文
分子生物学数据库
- 生物周期

[1] Bradshaw WH、Conrad HE、Corey EJ、Gunsalus IC。（+）-樟脑的微生物降解。《美国化学学会杂志》，1959年；4492:5507–5507.

[2] Bradshaw WH、Conrad HE、Corey EJ、Gunsalus IC。（+）-樟脑的微生物降解。《美国化学学会杂志》，1959年；4492:5507–5507.

[3] Chakrabarty AM。假单胞菌中的质粒。《遗传学年鉴》。1976;10:7–30. doi:10.1146/annurev.ge.10.120176.000255。-内政部-公共医学

[4] Chakrabarty AM。假单胞菌中的质粒。《遗传学年鉴》。1976;10:7–30. doi:10.1146/annurev.ge.10.120176.000255。-内政部-公共医学

[5] Chung CT，Niemela SL，Miller RH。活性大肠杆菌的一步制备-细菌细胞在同一溶液中的转化和储存。美国国家科学院院刊1989；86:2172–2175. doi:10.1073/pnas.86.7.2172。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学

[6] Chung CT，Niemela SL，Miller RH。活性大肠杆菌的一步制备-细菌细胞在同一溶液中的转化和储存。美国国家科学院院刊1989；86:2172–2175. doi:10.1073/pnas.86.7.2172。-内政部-项目管理咨询公司-公共医学

[7] Conrad HE、DuBus R、Namvedt M、Gunsalus IC。混合功能氧化II：樟脑内酯化酶的分离和性质。生物化学杂志。1965a年；240:495–503.-公共医学

[8] Conrad HE、DuBus R、Namvedt M、Gunsalus IC。混合功能氧化II：樟脑内酯化酶的分离和性质。生物化学杂志。1965a年；240:495–503.-公共医学

[9] Conrad HE、Lieb K、Gunsalus IC。混合功能氧化III：樟脑酮内酯化中的电子传递复合物。生物化学杂志。1965b年；240:4029–4037.-公共医学

[10] Conrad HE、Lieb K、Gunsalus IC。混合功能氧化III：樟脑酮内酯化中的电子传递复合物。生物化学杂志。1965b年；240:4029–4037.-公共医学

将引文保存到文件

电子邮件引文

添加到集合

添加到我的书目

您保存的搜索

为外部引文管理软件创建文件

您的RSS源

樟脑代谢恶臭假单胞菌NCIMB10007株2,5-二酮樟脑1,2-单加氧酶的重组表达及纯化

附属

樟脑代谢恶臭假单胞菌NCIMB10007株2,5-二酮樟脑1,2-单加氧酶的重组表达及纯化

作者

附属

摘要

数字

类似文章

引用人

工具书类

LinkOut-更多资源

全文源

其他文献来源

分子生物学数据库

摘要

数字

类似文章

引用人

工具书类

相关信息

LinkOut-更多资源

全文源

其他文献来源

分子生物学数据库