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.2009年4月15日;46(8):1042-8.
doi:10.1016/j.freeradbiomed.2008.12024。 Epub 2009年1月15日。

线粒体Lon蛋白酶是一种人类应激蛋白

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线粒体Lon蛋白酶是一种人类应激蛋白

珍妮·恩戈等。 自由基生物医学. .

摘要

通过蛋白水解有针对性地去除受损蛋白质对细胞生存至关重要。我们之前已经证明,Lon蛋白酶选择性降解氧化的线粒体蛋白质,从而阻止其聚集和交联。我们现在证明Lon蛋白酶是一种应激反应蛋白,由多种应激源诱导,包括热休克、血清饥饿和氧化应激。Lon诱导,通过低水平应激预处理,可保护机体免受氧化蛋白损伤、线粒体功能降低和过氧化氢中毒引起的细胞增殖丧失。用Lon siRNA阻断Lon诱导也可以阻断这种诱导保护。我们认为Lon是一种广义的应激保护酶,其下降可能导致蛋白质损伤水平的增加和线粒体功能障碍,这在衰老和与年龄相关的疾病中观察到。

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数字

图1
图1。过氧化氢处理诱导Lon
A类用0、100、200或400μM H处理的RD细胞的Lon蛋白分析2O(运行)21小时,然后在H后离开恢复长达25小时2O(运行)2治疗。”无H2O2“代表用载体而不是过氧化氢孵育的样品。用抗Lon抗体或抗porin抗体作为线粒体负荷控制来检测印迹。条形图表示根据孔蛋白标准化的数据。B类,通过qRT-PCR对在A中检查的相同样品进行mRNA分析。用Lon和GAPDH引物扩增样品,并对照GAPDH对Lon mRNA水平的计算进行标准化,作为内部负载对照。在面板A和B中,显示的所有数据点均为三次独立测定的平均值±标准误差。
图2
图2。Lon是由热应激和血清饥饿引起的
A类Lon和mtHSP-70对经45°C热休克处理1小时,然后在37°C中恢复3-24小时的RD细胞进行western分析。B类Western分析RD细胞在无血清培养基中培养,然后在含有血清的完整培养基中恢复3-24小时。样品用抗Lon抗体或抗孔蛋白抗体作为线粒体负荷控制。A和B中的条形图表示相对于通道蛋白标准化的Lon水平,所示的所有数据点均为三次独立测定的平均值±标准误差。
图3
图3。预处理细胞能更好地防止氧化损伤
RD细胞的Western分析。细胞与A类,控制非沉默siRNA或B类,Lon siRNA。三天后,用0-800μM H预处理这些样品2O(运行)21小时,然后在无H的介质中再恢复3小时2O(运行)2.“无挑战”样本表示与siRNA孵育的细胞,但不与H孵育2O(运行)2B中的印迹过度暴露,显示沉默的Lon带。在用2mM过氧化氢预处理4小时后,对相同的细胞进行1小时的激发,然后分析羰基含量C类控制非沉默siRNA,或D类用2,4-二硝基苯肼处理细胞提取物以衍生蛋白质羰基,然后使用2,4-二硝基苯肼多克隆抗体进行Western blot分析,检测氧化修饰蛋白质。E、 F类定量A-D的免疫细胞,显示的所有数据点均为三次独立测定的平均值±标准误差。
图4
图4。预处理细胞表现出更高的细胞活力
收集图3实验中的细胞,再培养3天,以确定存活数和存活率。简而言之,细胞与对照或Lon siRNA孵育,然后与H孵育2O(运行)2预处理(指示浓度)并用2mM过氧化氢激发1小时。”“无挑战”样本是用siRNA处理但没有用过氧化氢处理的细胞。A类,通过直接细胞计数确定过氧化氢处理后存活的细胞数。B类,用MTT测定法表示细胞活力和线粒体活性的细胞的相对荧光。在面板A和B中,显示的所有数据点均为四次独立测定的平均值±标准误差。

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引用人

参考文献

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