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比较研究
.2008年6月；83(3-4):179-89.
doi:10.1080/10520290802451085。

免疫组织化学在评估异种肿瘤移植物新生血管形成中的作用

D王 1, C R斯托卡德, L哈金斯, P批, C萨利赫, K元, D布赫斯鲍姆, 哈希姆, M Zayzafoon先生, R W哈代, O哈米德, W格栅, G P西格尔
附属公司
比较研究

免疫组织化学评价异种肿瘤移植血管新生

D王等。 生物技术组织化学. 2008年6月.

摘要

众所周知，血管生成或新生血管在导致转移的肿瘤进展中起着重要作用。CD31或因子VIII相关抗原（F VIII RAg）免疫组织化学被广泛用于实验研究中，以量化植入转化人类细胞系的免疫损伤动物模型中的肿瘤新生血管。然而，量化可能会受到用于测量血管化的方法的变化的影响，包括抗体选择、抗原回收（AR）预处理和评估技术。为了进一步检验这一点，我们使用抗CD31和F VIII RAg免疫组织化学染色研究了五种不同的人类肿瘤异种移植物和一种小鼠同基因肿瘤之间的微血管密度（MVD）和微血管染色强度。还评估了不同的AR方法。使用0.5 M Tris（pH 10）缓冲液可最大限度地回收CD31，而使用0.05%胃蛋白酶处理组织切片可最大限度回收F VIII RAg。对于每个优化的检索条件，anti-CD31突出显示的小血管优于F VIII RAg。此外，CD31的MVD显著高于F VIII RAg修饰血管（p<0.001）。在研究血管生成时，抗体和AR方法的选择对免疫组化结果有显著影响。在比较使用不同技术和试剂的文献研究时，也必须谨慎。

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数字

图1
图1
不同AR方法在鳞癌异种移植连续切片上CD31免疫组化的比较。A） 0.05%胃蛋白酶处理组。B） 0.01 M柠檬酸（pH 6）处理段。C） 0.5 M Tris缓冲液（pH 10）处理段。所有面板200 X。
图2
图2
不同AR方法异种移植物CD31染色切片的微血管密度。A） 无需治疗。B） 0.1%胰蛋白酶。C） 0.05%胃蛋白酶。D） 0.01 M甘氨酸（pH 3）。E） 0.01 M柠檬酸钠缓冲液（pH 6）。F） 0.05 M硼酸盐缓冲液（pH 8）。G） 0.01 M Tris-EDTA缓冲液（pH 9）。H） AR10溶液（pH 10）。一） 0.01 M Tris/0.05%吐温20（pH 10）。J） 0.5 M Tris（pH 10）。Asterisk表明，使用0.5M Tris（pH 10）观察到的CD31微绒毛发育显著大于使用其他AR方法获得的CD31微绒毛发育（p<0.01）。
图3
图3
不同AR方法在结肠癌异种移植物序列切片上对因子VIII IHC的比较。A） 0.05%胃蛋白酶处理组。B） 0.01 M硫酸（pH 6）处理段。C） 0.5 M Tris缓冲液（pH 10）处理段。所有数字200 X。
图4
图4
使用不同AR方法对异种移植物的F VIII RAg染色切片的微血管密度进行研究。A） 没有治疗。B） 0.1%胰蛋白酶。C=0.05%胃蛋白酶。D） 0.01M甘氨酸（pH 3）。E） 0.01 M柠檬酸钠缓冲液（pH 6）。F） 0.05 M硼酸盐缓冲液（pH 8）。G） 0.01 M Tris-EDTA缓冲液（pH 9）。H） AR10溶液（pH 10）。一） 0.01 M Tris/0.05%吐温20（pH 10）。J） 0.5 M Tris（pH 10）。星号表示胃蛋白酶消化后观察到的F VIII RAg微血管发育明显大于使用其他AR方法获得的结果（p<0.01）。
图5
图5
使用优化的AR方法比较抗CD31和抗F VIII RAg染色。MDA-MB-231乳腺癌异种移植（A和B）和同基因乳腺癌（C和D）的连续切片。切片用0.5 M Tris缓冲液（pH 10）处理，然后进行CD31免疫组化（A和C）。切片用0.05%胃蛋白酶处理，然后用F VIII RAg免疫组织化学（B和D）处理。与抗F VIII RAg染色相比，抗CD31产生更好的微血管染色。A和B:200 X；C和D 100 X。
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参考文献

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