跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2007年12月31日；179(7):1399-412.
doi:10.1083/jcb.200705051。

视网膜母细胞瘤抑癌蛋白依赖性组蛋白H3赖氨酸27甲基化与不可逆细胞周期退出相关

亚历山大·布莱斯 1, 克里斯·范·奥夫伦, 拉斐尔·玛格伦, 迭戈·阿科斯塔·阿尔瓦尔, 布赖恩·大卫·戴拉赫特（Brian David Dynlacht）
附属公司

视网膜母细胞瘤抑癌蛋白依赖性组蛋白H3赖氨酸27甲基化与不可逆细胞周期退出相关

亚历山大·布莱斯等。 J细胞生物学. .

摘要

视网膜母细胞瘤抑癌蛋白（pRb）参与有丝分裂的退出，促进成肌细胞的阻滞和肌源性分化。然而，尚不清楚分化肌肉中如何维持永久性细胞周期退出。通过RNA干扰、表达谱分析和染色质免疫沉淀，我们表明pRb对细胞周期退出和成肌细胞分化至关重要，也是维持肌管中这种阻滞所必需的。值得注意的是，我们还揭示了pRb相关蛋白p107和p130的功能，它们是G2/M期检查点的执行者，可以阻止pRb丢失的细胞进入有丝分裂。我们进一步证明，pRb通过维持组蛋白H3赖氨酸27（H3K27）在细胞周期基因上的三甲基化，部分影响永久性细胞周期退出。H3K27三甲基化以pRb-独立但多梳依赖的方式沉默其他基因，包括细胞周期蛋白D1。因此，我们的数据区分了两种不同的基于染色质的调控机制，这两种机制导致了终末分化。

PubMed免责声明

数字

图1。
图1。
pRb缺失导致终末分化肌肉细胞的细胞周期重新进入。（A） 用siRNA双链体转染C2C12肌管48小时后RT-PCR检测袖珍蛋白mRNA表达。（B） 每个口袋蛋白的Western blot检测表明在典型实验中达到的敲除程度。（C） 用针对不同口袋蛋白组合的非特异性siRNA双链或双链转染后，免疫荧光检测分化C2C12肌管中BrdU掺入（绿色）和MHC表达（红色）。（D） 表示C2C12肌管与至少一个BrdU的比例的直方图+用指示的siRNA转染细胞核后。误差条表示三个独立实验的SD。（E） 用非特异性siRNA双链或双链靶向pRb转染后，免疫荧光检测初级肌管中BrdU掺入（红色）和MHC表达（绿色）。棒材，100μm。
图2。
图2。
pRb的缺失导致细胞周期控制基因的去表达。（A） 抑制C2C12肌管口袋蛋白表达48小时后RT-PCR检测口袋蛋白、细胞周期和肌肉功能基因表达。（B） 散点图表示pRb敲除后C2C12肌管中基因表达的变化，作为正常肌源性分化过程中基因表达变化的函数。每个点代表使用一个微阵列探针进行的一次测量。MT，未转染的肌管；GM，未转染生长中的成肌细胞；NS，转染非特异性siRNA双链的肌管；pRb，转染pRb特异性双链的肌管。所有数据点代表三个独立实验的组合。（C） 在C2C12肌管中进行的ChIP-on-ChIP微阵列实验中，散点图表示pRb敲除后肌管中基因表达的变化，作为E2F4结合程度的函数。结合率作为E2F4与其靶基因结合强度的间接测量；使用了对应于双重富集的截止值。
图3。
图3。
肌源性分化过程中细胞周期基因启动子的H3K27三甲基化。（A） 使用识别H3K27Me2/3、H3K9Me3和H3Ac的抗体对C2C12成肌细胞或肌管的染色质进行qChIP。散点图显示了每种状态下输入DNA免疫沉淀的比例。用H3Ac抗体获得的值除以10，以与其他两个数据集拟合在同一绘图上。结果表示至少三个独立实验的平均值。（B） 直方图表示来自A的H3K27Me3信号霍克萨5和Mef2c公司基因作为特异性对照。误差条表示三个独立实验的SD。（C） 使用组蛋白H3、H3K27Me2或H3K17Me3抗体或兔IgG对C2C12成肌细胞和肌管进行ChIP检测。（D） 在分化诱导后的不同时间对细胞进行ChIP测定。96小时Mt样本代表纯肌管，而标记为96小时和更早时间点的样本代表肌管与储备细胞分离前的混合细胞群。（E） 在原代成肌细胞和匹配的肌管中进行H3K27Me2/3的定量ChIP分析。显示了四次ChIP分析的平均值和标准误差。肌管中H3K27Me2/3信号与成肌细胞中信号的比率在每个基因名称下方以红色表示。星号表示肌管中的H3K27Me2/3信号显著高于成肌细胞；P<0.03乘以t吨测试。双星号表示肌管中的H3K27Me2/3信号显著低于成肌细胞；P<0.001乘以t吨测试。
图4。
图4。
H3K27的三甲基化对有丝分裂刺激不敏感，并且在可逆的有丝分裂原饥饿诱导的静止期不会发生。（A） RT-PCR检测C2C12成肌细胞和肌管或高血清浓度处理24小时的肌管（Mt+GM）中的基因表达。（B） 对A中分析的细胞样本进行ChIP分析。输入对照相当于每次免疫沉淀使用量的0.4%。这个霍克萨5该基因被证明是抗H3K9Me3抗体免疫沉淀效率的控制因素。（C） 在非同步生长期间或在无血清培养基中饥饿3d后收获MEF。提取RNA并通过RT-PCR评估细胞周期基因表达。（D） 对与C中所示细胞平行处理和处理的交联细胞进行ChIP分析。
图5。
图5。
细胞周期基因启动子处H3K27的pRb依赖性三甲基化。（A） 直方图显示了转染有非特异性对照或pRb沉默siRNA的C2C12肌管中H3K27Me2/3的水平。ChIP信号强度报告为转染了非特异性siRNA的细胞中获得的信号的一部分。（B和C）直方图描述了H3K17Me2/3（B）和H3Ac（C）如a所示，转染以p130或pRb为靶点的siRNA或非特异性对照siRNA的C2C12肌管中的水平。误差条表示三个独立实验的SD。（D） 使用针对Suz12、Ezh2和Bmi-1的抗体在C2C12成肌细胞和肌管中进行ChIP分析。的两个区域霍克斯10检测基因以评估PRC结合。给出了两个独立实验的结果。
图6。
图6。
详细描述分化肌肉中pRb功能的模型。详见正文。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Ait-Si-Ali，S.、V.Guasconi、L.Fritsch、H.Yahi、R.Sekhri、I.Naguibneva、P.Robin、F.Cabon、A.Polesskaya和A.Harel-Bellan。2004.一种Suv39h依赖性机制，用于在分化细胞而非循环细胞中沉默S期基因。EMBO期刊23:605–615。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Baba，Y.、M.Nakano、Y.Yamada、I.Saito和Y.Kanegae。2005.在哺乳动物细胞中无细胞毒性的表达Cre重组酶的重组腺病毒的实际有效剂量范围。微生物。免疫学。49:559–570.-公共医学
    1. Bader，D.、T.Masaki和D.A.Fischman。1982年。鸡体内和体外肌肉发生过程中肌球蛋白重链的免疫化学分析。《细胞生物学杂志》。95:763–770.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Balciunite、E.、A.Spektor、N.H.Lents、H.Cam、H.Te Riele、A.Scime、M.A.Rudnicki、R.Young和B.D.Dynlacht。口袋蛋白复合物被招募到静止和增殖细胞的不同靶点。分子细胞。生物学25:8166–8178。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Benevolenskaya，E.V.、H.L.Murray、P.Branton、R.A.Young和W.G.Kaelin Jr.2005年。pRB与PHD蛋白RBP2的结合促进细胞分化。分子细胞。18:623–635.-公共医学

出版物类型

MeSH术语