跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https公司

网站是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2008年2月；149（2）：558-64。
doi:10.1210/en.2007-0805。 Epub 2007年11月1日。

心肌细胞t小管中的功能性维生素D受体（VDR）：VDR敲除心肌细胞的收缩性

丹尼尔·提什科夫（Daniel X Tishkoff） 1, 卡尔·A·尼伯林, 克里斯蒂娜·霍尔姆伯格, 洛雷达娜·丹杜, 罗伯特·U·辛普森
附属公司

心肌细胞t小管中的功能性维生素D受体（VDR）：VDR敲除心肌细胞的收缩性

丹尼尔·提什科夫（Daniel X Tishkoff）等。 内分泌学. 2008年2月.

摘要

我们之前已经证明，维生素D的活性形式1,25二羟维生素D3[1,25（OH）（2）D（3）]在心脏细胞中具有基因组和快速非基因组效应；然而，维生素D受体（VDR）在心脏中的亚细胞定位尚未研究。在这里，我们显示，在成年大鼠心肌细胞中，VDR主要定位于t小管。通过免疫荧光和蛋白质印迹分析，我们发现VDR与已知的t管蛋白密切相关。使用（3）H-标记的1,25（OH）（2）D（3）进行的放射性配体结合分析表明，从均质大鼠心室分离的t小管膜部分含有与经典VDR类似的1,25。我们首次表明，与野生型相比，从VDR基因敲除小鼠分离的心肌细胞显示出加快的收缩和舒张速率，1,25（OH）（2）D（3）直接影响野生型心肌细胞的收缩能力，但不影响敲除小鼠的心肌细胞。此外，我们观察到急性（5分钟）暴露于1,25（OH）（2）D（3）改变了松弛速率。定位于心脏t小管的受体的理想位置是对信号转导介质和离子通道产生直接影响。这一新发现对理解心脏细胞中的1,25（OH）（2）D（3）信号转导具有重要意义，并为VDR在心脏结构和功能中发挥作用提供了进一步的证据。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
成年大鼠心肌细胞的免疫荧光共聚焦显微镜。VDR（sc-13133；小鼠单克隆）的横向染色模式在×40处明显（A；图像放大C）。B中显示了单独的抗小鼠二级抗体。使用不同的抗VDR抗体（sc-1009；兔多克隆，D）和抗DHPR抗体（MA3-921；小鼠单克隆；E）进行双重标记显示出相似的染色模式，而合并（F）显示出共定位。针对VDR（sc-1009；兔子多克隆；G）和SERCA-2（sc-8094；山羊多克隆；H）的双重标记显示出类似的染色模式，而合并（I）显示出一些关联。使用抗T-cap抗体进行双重标记（sc-20171；兔多克隆；红色)和VDR（sc-1009，兔多克隆，绿色)在合并图像中显示不同的染色模式和不完全重叠（J）。第三种主要VDR抗体是一种针对VDR C末端（sc-1008）的兔多克隆抗体，如K所示。与sc-1008和VDR阻断肽（sc1008p）共同孵育的心肌细胞如L所示，证明了该抗体对VDR的特异性。
图2
图2
用抗VDR的小鼠单克隆抗体（sc-13133；A和B）或抗DHPR的小鼠单抗（E和F）孵育后，对WT（A和C）和VDR-KO（B和D）分离的小鼠心肌细胞进行免疫细胞化学。VDR染色在WT细胞（a）中呈条纹状，在KO细胞（B）中不存在。在VDR-WT（C）和VDR-KO（D）细胞中均可见与t小管定位相对应的DHPR染色。
图3
图3
分离均质大鼠心脏的Western blot（A）和三[H] 1,25（OH）2D类三t小管（40K）组分（B和C）的结合分析。Western blot（A）分析的组分包括全匀浆（WH）、0–7700 g（7K）、7700–40000 g（40K）、40000–110000 g（110K）和胞浆（CYT）。VDR存在于40K组分中，也富集于LTCC、DHPR、SERCA2和小凹蛋白-3（CAV-3；A）。这一部分很少显示线粒体标记COX IV或核标记Sp1（A）。总的、非特异性的和特异性结合三[H] 1,25（OH）2D类三以每分钟计数（CPM）表示的40K膜分数，见B三[H] 1,25（OH）2D类三与40K组分的结合显示了饱和和特定结合（C）。B类最大值，最大结合能力；K（K）d日，离解常数。
图4
图4
从6个月龄VDR-WT和VDR-KO小鼠（同窝）分离的心室肌细胞之间的基线收缩差异。每个样本每个心肌细胞采集十次抽搐（n=20）。静止肌节长度和峰值缩短不受影响；然而，VDR-KO心肌细胞中TTP和TTR25%-75%降低。与WT细胞（−dl/dt=25.48±1.258，+dl/dt=25.48±1.259）相比，KO细胞的收缩率（−dl/dt）和舒张率（+dl/dt）均显著增加，表明KO细胞具有超收缩性，P（P）< 0.05.
图5
图5
1,25（OH）的影响2D类三在VDR-WT和VDR-KO小鼠心室肌细胞上。VDR-WT和VDR-KO小鼠是6个月大的同窝小鼠。每个样本每个心肌细胞采集十次抽搐（n=20）。用1 n处理后米1,25（OH）2D类三WT细胞的TTP和TTR75%降低，收缩率不变（-dl/dtmax:33.56±1.375，对照组34.34±0.9398；P（P）=0.64），而松弛率显著增加（+dl/dtmax:25.48±1.258对照组，31.60±1.592治疗组；P（P）< 0.005). 1,25（OH）后无影响2D类三VDR-KO细胞的处理。交叉阴影条，基线；黑色条，已治疗。*，P（P）< 0.05.
图6
图6
1,25（OH）的作用2D类三（1个米)成年大鼠心肌细胞VDR密度和位置。用1n处理后0、30和60分钟，细胞被免疫荧光标记为VDR抗体（sc-1009）米1,25（OH）2D类三.显示VDR（异硫氰酸荧光素；绿色)相对于核染色的分布和强度（4′，6′-二氨基-2-苯基吲哚；蓝色)显示在每个免疫荧光图像下面。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

参考文献

    1. Simpson RU，Thomas GA，Arnold AJ 1985肌肉中1,25-二羟维生素D3受体和活性的鉴定。生物化学杂志260:8822–8891-公共医学
    1. Weishar RE，Kim SN，Saunders DE，Simpson RU 1990维生素D3与心血管功能的关系。三、 对物理和形态特性的影响。美国生理学杂志258:E134–E142-公共医学
    1. Green JJ，Robinson DA，Wilson GE，Simpson RU，Westfall MV 2006钙三醇通过蛋白激酶对心脏收缩性能的调节。分子细胞心脏学杂志41:350–359-公共医学
    1. Weishaar RE，Simpson RU 1987维生素D3与大鼠心血管功能。临床研究杂志79:1706–1712-项目管理委员会-公共医学
    1. Xiang W，Kong J，Chen S，Cao LP，Qiao G，Zheng W，Liu W，Li X，Gardner DG，Li YC 2005维生素D受体敲除小鼠的心脏肥大：系统和心脏肾素-血管紧张素系统的作用。美国生理内分泌代谢杂志288:E125–E132-公共医学

出版物类型