Close relation of arterial ICC-like cells to the contractile phenotype of vascular smooth muscle cell

doi:10.1111/j.1582-4934.2007.00066.x

.2007年7月至8月；11（4）：764-75。

doi:10.1111/j.1582-4934.2007.0066.x。

动脉ICC样细胞与血管平滑肌细胞收缩表型的密切关系

弗拉迪米尔·普科夫斯克¹, 马克西姆·哈伦, 奥列克桑德·波夫斯特扬, 德米特里·五·戈迪恩科, 雷·F·莫斯, 托马斯·博尔顿

附属机构

PMID： 17760838
预防性维修识别码： PMC2121184型
内政部： 10.1111/j.1582-4934.2007.0066.x

动脉ICC样细胞与血管平滑肌细胞收缩表型的密切关系

弗拉迪米尔·普考夫斯克等。细胞与分子医学杂志. 2007年7月至8月.

.2007年7月至8月；11(4):764-75.

doi:10.1111/j.1582-4934.2007.0066.x。

作者

弗拉迪米尔·普考夫斯克¹, 马克西姆·哈伦, 奥列克桑德·波夫斯特扬, 德米特里·五·戈迪恩科, 雷·F·莫斯, 托马斯·博尔顿

附属

¹英国伦敦大学圣乔治分校基础医学部离子通道和细胞信号中心。v.pucovsky@qub.ac.uk

PMID： 17760838
预防性维修识别码： PMC2121184型
内政部： 10.1111/j.1582-4934.2007.0066.x

摘要

这项工作旨在建立与Cajal（ICC）间质细胞类似的细胞谱系，即动脉ICC-like（AIL）细胞，最近在阻力动脉中被描述，并研究其在动脉壁中的位置。使用豚鼠肠系膜动脉段和从中新鲜分离的单个AIL细胞。免疫染色细胞或节段的共聚焦成像和动脉节段的电子显微镜用于测试所选标记物的存在和细胞定位，并将AIL细胞定位在完整的动脉节段中。AIL细胞的神经标记物PGP9.5和内皮细胞标记物血管性血友病因子（vWF）均为阴性。它们对平滑肌α-肌动蛋白和平滑肌肌球蛋白重链（SM-MHC）呈阳性反应，但仅表达少量平滑肌细胞（SMC）标志物平滑肌蛋白和调节平滑肌收缩的关键酶肌球蛋白轻链激酶（MLCK）。在肌动蛋白聚合抑制剂latrunculin B存在下进行细胞分离，不会导致AIL细胞从细胞悬浮液中消失。AIL细胞和血管平滑肌细胞基底膜蛋白IV的荧光相似，AIL细胞层粘连蛋白的荧光高于血管平滑肌。此外，利用透射电镜在小阻力动脉的中膜中发现了具有薄突起的细胞。结果表明，AIL细胞是不成熟的或表型调制的血管平滑肌细胞，组成性地存在于阻力动脉中。

PubMed免责声明

数字

4
**（A）**使用常规程序隔离的AIL细胞的透射光图像。**（B）**在20μM latrunculin B存在下分离的三个AIL细胞的透射光图像。**（C）**每个细胞的平均丝状体数从9.9±1.0个/细胞减少，对照组（Ctrl）的n=25减少到6.4±0.5个/细胞，latrunculin B（Lat B）的n=39，P=0.0006，差异显著。Dulbecco改良Eagle's培养基（D-MEM）中的细胞分离也将其从14.3±1.8个/细胞（对照组n=10）降至3.8±0.4个/细胞，n=14，P=0.00002，差异显著。**（D）**丝状伪足的平均长度从对照组的14.4±0.8μm，n=99降至8.2±0.8µm，latrunculin B组的n=55，P=0.00003，差异显著；而从对照组16.0±0.7μm（n=143）降至D-MEM组的10.3±0.7¦Μm（n=53，P=0.003），差异显著。**（E）**通过共焦显微镜获得AIL细胞和两个VSMC的层粘连蛋白荧光图像。插图显示了透射光中的相同细胞。箭头指向一些丝状伪足。**（F）**与中相同**（E）**，但显示IV型胶原染色。**（G）**AIL细胞层粘连蛋白荧光为VSMC层粘连素荧光的131.9±9.6%（n=8个细胞对，P=0.013，差异显著），IV型胶原荧光为VSMCs层粘连肽荧光的113.3±12.1%（n=9个细胞对（P=0.305）。在这两种情况下，省略一级抗体几乎不会产生荧光（分别为n=13和n=12；未显示）。*要控制的统计显著差异。

1
PGP9.5和vWF的荧光染色。**（A）**通过共焦显微镜获得的VSMC和AIL细胞（箭头）的透射光（灰色阴影）和PGP9.5荧光（红色）的组合图像。AIL细胞和VSMC PGP9.5染色均为阳性（n=24个细胞）。**（B）**AIL细胞透射光（灰色阴影）和vWF荧光（绿色）的组合图像，仅显示弱非特异性染色（n=6）。插图：用BODIPY 558/568阴茎肽（黄色）染色的同一细胞显示存在其他微弱可见的丝状伪足，证实了AIL细胞的身份。**（C）**与中相同**（A）**，但使用了一段肠系膜动脉，显示存在神经纤维（阳性对照，n=5）。**（D）**肠系膜动脉段内皮层荧光图像，免疫染色检测vWF，用SYTO 40染色检测核酸。内皮细胞的细胞核可见蓝色。绿色显示vWF染色的颗粒状外观，因为其储存在内皮细胞的Weibel-Palade小体中（n=4）。插图：至于主面板，但省略了vWF的主要抗体。

2
SMA和SM-MHC的荧光染色。**（A）**一个AIL细胞和两个VSMC的透射光图像，以及**（B）**通过共焦显微镜获得的同一细胞中的SMA荧光图像。**（C）**AIL细胞的SMαA荧光为VSMC的55.5±10.2%（n=6对细胞，P=0.0074，差异显著）。省略初级抗体（n=9）平均产生原始荧光强度的1.8%（n=6；未显示）。**（D）**和**（E）**至于**（A）**和**（B）**，但显示SM-MHC染色。**（F）**AIL细胞SM-MHC荧光为VSMC的98.9±5.8%（n=7对细胞，P=0.852）。省略初级抗体（n=10）产生的平均荧光强度小于原始荧光强度的0.1%（n=7；未显示）。箭头指向AIL细胞的丝状体。在这两种情况下，除了中央被细胞核（箭头）占据外，在VSMC和AIL细胞的细胞质中都发现了荧光。*统计意义重大。

3
光滑蛋白和MLCK的荧光染色。**（A）**AIL细胞和VSMC的透射光图像**（B）**通过共焦显微镜获得的同一细胞的平滑蛋白荧光图像。**（C）**AIL细胞的平滑蛋白荧光为VSMC的21.4±8.7%（3只动物的10对细胞，P=0.00001，具有统计学意义）。省略初级抗体（五只动物的29个细胞）产生的平均荧光强度为原始荧光强度的2.6%（n=10；未显示）。**（D）**AIL细胞和VSMC的透射光图像与底部平面的BODIPY鬼臼蛋白荧光图像相结合（白色；以增强丝状足的可见度）。**（E）**至于**（B）**，但显示MLCK染色。**（F）**AIL细胞的MLCK荧光为VSMC的32.1±6.6%（n=9对细胞，P=0.00001，具有统计学意义）。省略初级抗体（n=7）产生的平均荧光强度为原始荧光强度的8.7%（n=9；未显示）。这两个标记的荧光定位于VSMC和AIL细胞的细胞质中，细胞核除外。箭头指向AIL细胞的丝状体。*统计意义重大。

5
完整肠系膜动脉中具有薄突起的细胞。肠系膜动脉斜切面的透射电子显微照片。中的矩形**（A）**和**（C）**用虚线划定的区域表示放大的区域**（B）**和**（D）**分别是。Adv–外膜，ec–内皮细胞，iel–内部弹性层，n–细胞核。箭头表示进程。在中胚层中可以看到具有薄突起的细胞。

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