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.2007年9月28日;282(39):29022-29031.
doi:10.1074/jbc。M703506200。 Epub 2007年7月25日。

ClC-3氯离子通过N-末端二亮氨酸簇与氯氰菊酯的相互作用通过质膜转运蛋白质

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ClC-3氯离子通过N-末端二亮氨酸簇与氯氰菊酯的相互作用通过质膜转运蛋白质

赵志芳等。 生物化学杂志. .
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摘要

ClC-3是一种普遍表达的氯离子转运蛋白,存在于突触小泡和内体/溶酶体室中。它主要是细胞内的,但也在质膜上观察到。本研究的目的是确定ClC-3向细胞内转运的途径和调控。在稳定状态下,约94%的转染ClC-3位于细胞内,只有6%位于质膜上。[(35)S]蛋氨酸和生物素化脉冲标记表明,约25%新合成的ClC-3通过质膜。我们使用免疫荧光显微镜和生物素化分析来评估ClC-3的贩运。质膜ClC-3被迅速内吞(t((1/2))约9分钟);一部分进入再循环池,在内化后返回细胞表面,其余部分进入更远端的细胞内隔间。ClC-3在质膜上与氯氰菊酯相关。协同免疫沉淀和谷胱甘肽S-转移酶下拉分析表明,ClC-3的N末端与氯氰菊酯结合。细胞溶质N末端(氨基酸13-19)内的二亮氨酸酸性簇被丙氨酸取代,导致分子内吞减少,表面表达增加。通过联合免疫沉淀和谷胱甘肽S-转移酶下拉试验评估,该替代物还消除了与网格蛋白的相互作用。我们得出结论,ClC-3主要是一种细胞内转运蛋白,它暂时插入质膜,在那里被迅速内吞。ClC-3的内化依赖于N-末端二亮氨酸簇和氯氰菊酯之间的相互作用。

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