跳到主要内容
访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
美国国家科学院院刊。2017年8月8日；114(32): 8596–8601.
2017年7月24日在线发布。 数字对象标识：10.1073/pnas.1708037114
预防性维修识别码：第559048页
PMID：28739899

激活素信号在线粒体功能障碍相关肥胖模型中介导肌脂肪通讯

魏松，a、，b条 爱德华·奥乌苏·阿萨赫（Edward Owusu-Ansah），a、，c、，d日 胡彦辉，一 程道军，a、，e（电子） 倪晓春，一 乔纳森·齐林，一和诺伯特·佩里蒙a、，b、，1
作者信息 版权和许可信息 PMC免责声明

关联数据

补充资料

重要性

在脊椎动物和无脊椎动物中，一个器官的线粒体扰动相关失调已被证明会非自主地影响其他器官的功能。使用果蝇属作为一个遗传模型生物，我们描述了跨器官线粒体同步失调的特征，并发现由肌肉复合物I断裂引起的线粒体扰动远程损害了线粒体功能和脂肪体内的脂质动员，从而导致肥胖。我们进一步确认，TGF-β配体Actβ（通过肌肉线粒体扰动自主增加）介导肌肉-脂肪体通信和同步线粒体失调。

关键词：线粒体同步性、激活素-β、复合物I扰动、NF-κB/Relish、脂质代谢

摘要

线粒体功能障碍与肥胖和代谢紊乱有关。然而，单个组织中的线粒体扰动是否会影响另一个远端组织的线粒体功能和代谢状态，目前尚不清楚。我们分析了肌线粒体功能障碍在果蝇属令人惊讶的是，通过复合物I扰动而受损的肌肉线粒体功能会导致脂肪体（飞行脂肪组织）中的线粒体同时功能障碍，并随后累积甘油三酯，这是肥胖的主要特征。在肌肉线粒体功能障碍的背景下，RNA-sequencing（RNA-seq）分析表明TGF-β信号通路的靶基因在脂肪体内被诱导。值得注意的是，肌肉中TGF-β家族配体Activin-β（Actβ）的表达在NF-κB/Relish（Rel）信号转导下显著增加，以响应线粒体扰动，线粒体扰动肌肉中Actβ表达的降低挽救了脂肪体线粒体功能障碍和肥胖表型。因此，肌肉线粒体活性的扰动通过调节激活素信号，非自主地调节脂肪体内的线粒体功能。

多细胞生物中的各个器官除了发挥各自的作用外，还必须与其他器官进行沟通，以维持系统内稳态。特别是中枢神经系统（CNS）通过激素信号整合有关外周代谢过程状态的信息，并指导能量稳态和进食行为(1). 此外，外周器官中的代谢变化会影响其他外周器官的生理学(2，三). 骨骼肌系统新近被认为发挥内分泌相关作用，在运动后产生肌细胞因子，以靶向其他代谢器官（肝脏、脂肪组织、胰腺、肠道和骨骼），并调节系统能量稳态(4)。

线粒体是整合多种生理信号的半自主细胞器。越来越多的证据表明，一个器官的线粒体改变通过激素信号导致远端器官的生物过程异常(5，6). 运动可以诱导线粒体活动并改善肌肉性能，除此之外，线粒体扰动相关的肌肉损伤也足以通过产生肌因子来调节其他器官的功能并改变系统结果。例如，在哺乳动物中，由于骨骼肌自噬功能的破坏而导致的线粒体功能障碍导致肌肉FGF21的产生增加，从而触发白色脂肪组织的褐变并增加脂质动员(7). 此外，在果蝇，成人肌肉中轻度线粒体损伤通过增加肌肉ImpL2生成和远程抑制脂肪体和大脑中的胰岛素信号来延缓衰老(8). 尽管有这些例子，肌肉线粒体功能障碍相关器官通讯的分子机制仍基本未知。对这种器官间通讯网络的描述可以加深我们对系统性疾病的理解，例如衰老和肥胖。

在本研究中，我们对果蝇属并证明这会触发脂肪体内同时发生的非自主性线粒体功能障碍。为了描述受影响的信号通路，我们使用RNA-sequencing（RNA-seq）分析了脂肪体中的转录组变化，这导致我们将TGF-β信号牵涉到肌肉-脂肪体通信中。最后，我们表明，线粒体功能障碍的肌肉中，TGF-β配体Actβ的生成增加，肌肉源性Actβ通过Babo触发TGF-。总之，我们的结果确定Actβ是一种线粒体相关激素，参与肌肉和脂肪体的“线粒体同步性”调节。

结果

肌肉线粒体摄动导致线粒体功能障碍和脂肪体内脂质积聚。

为了研究肌肉线粒体功能的扰动是否影响其他器官的功能，我们使用RNAi干扰线粒体复合体I NADH：泛醌氧化还原酶的活性，泛醌氧化酶是电子传递链（ETC）的电子入口点，特别是在幼虫肌肉中。复杂I分量的RNAi扰动ND-75/NDUFS1在肌肉中使用dMef2-Gal4型驱动程序导致ND-75型mRNA水平dMef2>ND-75-i幼虫肌肉增加～80%（相对于对照组白色[w个]RNAi控制，dMef2>w-i)，而ND-75型脂肪体内的mRNA水平没有改变(图1一个). 我们之前报道过ND-75型击倒不会影响整体肌肉完整性，尽管它会导致幼体肌肉变小(8). 然而，复杂I扰动通过ND-75型击倒dMef2>ND-75-i与对照组中观察到的结构良好、致密的线粒体相比，肌肉显著破坏了嵌入肌纤维的线粒体的完整性dMef2>w-i幼虫肌肉(图1B，箭头）。注意线粒体质量dmef2>ND-75-i肌肉以补偿的方式抬高(图S1一个). 与线粒体解体一致，dMef2>ND-75-i幼虫肌肉与ADP诱导的O2分离线粒体的消耗和肌肉组织ATP的生成(图1C类和天). 此外，幼虫肌肉收缩显著减少(图S1天)。

保存图片、插图等的外部文件。对象名为pnas.1708037114fig01.jpg

肌肉线粒体复合体I的扰动导致线粒体功能障碍和脂肪体内的脂质积聚。(一个)相对ND-75型肌肉和脂肪体中的mRNA水平dMef2>w-i(dMef2-Gal4/UAS-w-i型)和dMef2>ND-75-i(dMef2-Gal4/UAS-ND-75-i型)幼虫(n个＝每次重复3、10个合并的组织）。(B)幼虫肌肉（嵌入肌纤维）或脂肪体线粒体形态的代表性电子显微镜图像。箭头表示单个线粒体(C类和天)O（运行）2ADP处理后线粒体的消耗率(C类，n个=3,20个组织/重复）和ATP水平(天，n个=每次复制3，5个混合组织）。(E类和F类)指示短链脂质组成变化的脂质分析(E类)和其他脂质(F类)包括幼虫脂肪体中的甘油三酯（TG）、二甘油脂（DG）、溶血磷脂酰胆碱（LPC）、溶血磷脂酰乙醇胺（LPE）、溶溶磷脂酰肌醇（LPI）、磷脂酰胆碱和溶血磷脂基乙醇胺（PE）。(G公司和H（H）)幼虫脂肪体细胞内中性脂质体染色(G公司)幼虫组织中的TG水平(H、 n个=每重复3，5个混合组织）。(我)三龄幼虫的TG水平(n个=每重复3，5个混合幼虫）。数据以平均值±SEM表示*P（P）< 0.05.

保存图片、插图等的外部文件。对象名为pnas.1708037114sfig01.jpg

肌肉复合体I的扰动会远程降低脂肪体内的线粒体活性。(一个)幼虫肌肉（绿色，ATP5A；蓝色，DAPI）线粒体形态的典型共焦图像，由ATP5A免疫染色显示。(B和C类)ADP诱导的线粒体O2消费率(B，n个=3,60个组织/组）和ATP水平(C、 n个=每重复3，5个混合组织）。(D–G型)身体收缩率(D、 n个=10），食物摄入率(E、 n个=每次重复3，5只混合幼虫），全身TG水平(F、 n个=每重复3，5只混合幼虫），脂肪体中性脂质染色(G公司)在指示的三龄幼虫中。基因型：dMef2>ND-49-i:dMef2-Gal4/UAS-ND-49-i.dMef2>ND-42-i:dMetf2-Gal4/UAS-ND-22-i。数据以平均值±SEM表示*P（P）< 0.05.

除了肌肉线粒体异常外，我们意外地观察到dMef2>ND-75-i幼虫(图1B)，尽管第75页脂肪体内的信使核糖核酸水平保持不变(图1一个). ADP诱导的线粒体O2脂肪体的消耗和ATP生成dMef2>ND-75-i幼虫数量显著减少(图1C类和天)表明脂肪体内线粒体活性降低。因为线粒体活性与脂质动员高度相关，脂质动员主要通过物种间脂肪组织中的脂质β氧化实现(9，10)，我们测试了脂肪体中的线粒体功能障碍是否会损害脂质稳态dMef2>ND-75-i幼虫。因此，我们进行了定量脂质分析，以评估dMef2>ND-75-i幼虫。有趣的是，与对照组相比dMef2>ND-75-i脂肪体显著增加(图1E类和数据集S1). 其他脂质种类，包括TG（甘油三酯）和DG（二甘油脂）也在dMef2>ND-75-i脂肪体(图1F类和数据集S1). 与这些观察结果一致的是，标记细胞内中性脂质的体染色显示dMef2>ND-75-i幼虫(图1G公司). 生化分析也证实了TG在dMef2>ND-75-i与对照组相比，脂肪体和整个动物(图1H（H）和我). 脂肪储存增加可能是由喂食过程中肌肉相关的变化引起的。然而，我们能够排除这种可能性，因为dMef2>ND-75-i幼虫吃得更少(图S1C类)，预计活动的变化会减少脂质储存。综上所述，我们的数据表明，肌肉复合物I断裂引起的线粒体扰动会远程损害脂肪体中的线粒体活性，并导致脂质积聚。

除ND-75外，我们还测试了针对其他复杂I组分的RNAi试剂的作用。正如ND-75所观察到的ND-49型/NDUFS2型或ND-42/NDUFA10标准在肌肉中，肌肉和脂肪体中的线粒体活性也降低，导致脂肪体脂质积聚(图S1B–G公司)。

为了检测脂肪体内的线粒体功能障碍，我们使用RNAi干扰ETC（电子传递链）或脂质β氧化过程的成分。令人惊讶的是，ETC复合组分的扰动显著耗尽了整个动物的脂质储存量(图S2)可能是由于脂肪体完整性的破坏。然而，与脂质β-氧化有关的成分的敲除显著增加了脂肪体中TG的储存量(图S2)，与对于肌肉中的复数I扰动所获得的结果一致。因此，我们的研究结果表明，肌肉线粒体扰动通过调节脂质β-氧化，远程抑制脂肪体内的线粒体活性和脂质动员。

保存图片、插图等的外部文件。对象名为pnas.1708037114sfig02.jpg

脂肪体内脂质代谢的线粒体差异调节。指示三龄幼虫的TG水平。UAS-RNAi线路交叉至CG-Gal4公司子代在25℃下生长至三龄(n个=每重复3，5个混合幼虫）。数据以平均值±SEM表示*P（P）< 0.05.

肌肉线粒体扰动对脂肪体内TGF-β信号的调节。

我们已经证明肌肉源性ImpL2能够抑制成年苍蝇的全身胰岛素信号(8)这表明ImpL2也可能在幼虫的肌肉-脂肪体通信中发挥作用。然而，ImpL2（影响2）击倒ND-75–幼虫肌肉缺陷(dMef2>ND-75-i+ImpL2-i)不足以缓解复杂I扰动引起的TG积累(图S3一个)这表明肌肉对脂肪的调节存在其他机制。为了探索潜在的机制，我们分析了dMef2>ND-75-i幼虫通过RNA-seq。经过统计分析，1592个基因（占转录组的13%）发生了显著变化（变化倍数>1.5），具有很高的置信度；其中，1080个上调，512个下调(图2一个和数据集S2). 对差异表达基因集的基因本体论（GO）术语富集分析表明，参与氨基酸、脂质、碳水化合物和能量代谢的基因优先受到影响(图2B和数据集S3). 有趣的是，GO类别中“脂质分解代谢过程”的大多数差异表达基因显著下调，而“脂肪酸代谢过程”、“脂质生物合成过程”和“乙酰-CoA代谢过程”中的大多数基因上调(图2B). 此外，半数以上编码线粒体蛋白的基因，包括复合物I、II、III、IV、V、TCA和β-氧化的成分，在dMef2>ND-75-i幼虫脂肪体(图2C类和天). 总之，这些结果表明线粒体功能障碍在dMef2>ND-75-i幼虫脂肪体不是由线粒体基因的整体下调引起的。

保存图片、插图等的外部文件。对象名为pnas.1708037114fig02.jpg

转录组分析表明，肌肉线粒体扰动增强了脂肪体内TGF-β信号传导。(一个)基因表达变化dMef2>ND-75-i幼虫脂肪体，与dMef2>w-i。(B)基因集富集分析表明，参与代谢过程的基因在上调和/或下调的基因中显著富集（颜色表示富集P（P）值）。(C类)线粒体复合物组分编码基因的表达变化（颜色表示对数2比率dMef2>ND75-i与dMef2>w-i。线表示潜在的蛋白质相互作用）。(天)β-氧化过程调节因子编码基因的表达变化（热图显示对数2基因表达的折叠变化）。(E类)激素/配体诱导的肌肉-脂肪体通信示意图。肌肉分泌激素或配体以靶向脂肪体，并影响下游基因表达的信号传导。(F类)热图显示了TGF-β信号通路目标基因在幼虫脂肪体中的表达变化。(G公司)三龄幼虫脂肪体细胞中p-MAD的典型共焦图像（红色，p-MAD；蓝色，DAPI）。(H（H）)幼虫脂肪体中p-dSMAD2的蛋白质印迹。

保存图片、插图等的外部文件。对象名为pnas.1708037114sfig03.jpg

TGF-β配体的肌肉表达。(一个)具有指定基因型的三龄幼虫的TG水平。无人机系统RNAi线交叉到UAS-ND-75-i，管-Gal80；dMef2-Gal4型子代在29℃下生长至3龄(n个=每重复3，5个混合幼虫）。(B)指示幼虫肌肉中TGF-β配体的相对mRNA水平(n个＝每次复制3、10块汇集的幼虫肌肉）。数据以平均值±SEM表示*P（P）< 0.05.

激素/配体诱导的信号传导对器官间通讯至关重要。接下来，我们试图描述肌肉线粒体扰动远程损害脂肪体功能的机制。我们假设线粒体损伤的肌肉产生配体来调节脂肪体内的生物过程(图2E类). 由于配体典型地触发调节转录因子依赖性基因表达的细胞内信号通路，因此监测目标基因表达应有助于识别所涉及的信号通路(图2E类). 引人注目的是，大多数TGF-β信号通路的靶基因(11–13)在dMef2>ND-75-i幼虫脂肪体(图2F类)表明TGF-β信号转导显著增强。与此适应症一致，免疫染色和免疫印迹显示TGF-β信号的两个主要读数p-Mad和p-dSmad2在dMef2>ND-75-i幼虫脂肪体(图2G公司和H（H）). 我们之前发现，中肠诱导的脂肪体内TGF-β信号传导的激活会导致代谢失调(14). 基于这一观点，我们推测TGF-β信号的非自主激活也参与肌脂肪体通信。

肌肉线粒体扰动通过产生Actβ远程影响脂肪体功能中的线粒体功能。

为了测试脂肪体中增强的TGF-β信号是否是对肌肉产生的TGF--β家族配体的反应，我们进行了定量PCR（qPCR）分析，以检测TGF-果蝇属复杂I扰动肌肉中的TGF-β配体。TGF-β配体编码基因共有7个果蝇属基因组：TGF-β/Activin亚群的四个成员，即法案β,混日子(道夫),特立独行的(小牛)、和肌胶质蛋白(肌)和TGF-β/BMP亚组的三名成员，即十足瘫痪(dpp（数据处理程序）),玻璃底船(gbb标准)、和螺丝钉(scw公司) (15). 这些基因编码的配体与由I型和II型受体组成的受体复合体结合。我们发现，尽管大多数配体编码基因的水平未受影响，但法案β和道夫在复杂的I扰动肌肉中显著增加(图3一个和图S3B). 请注意scw公司未纳入分析，因为它在幼虫或成虫中不表达。接下来，我们通过对每种配体进行RNAi敲除来测试配体在肌肉-脂肪体通信中的假定作用dMef2>ND-75-i肌肉。令人惊讶的是，只有法案β基因敲除显著减轻了动物体内TG的积累(图3B和C类)这是一个与肌肉线粒体扰动相关的事件。

保存图片、插图等的外部文件。对象名为pnas.1708037114fig03.jpg

Actβ介导肌肉和脂肪体之间线粒体功能障碍的非自主调节。(一个)三龄幼虫肌肉中TGF-β家族配体的相对mRNA水平(n个=3，每个重复10个混合组织）。请注意scw公司在幼虫或成虫中不表达。(B)三龄幼虫全身TG水平。无人机系统RNAi线交叉到UAS-ND-75-i，管-Gal80；dMef2-Gal4型子代在29℃下生长至3龄(n个=每重复3，5个混合幼虫）。(C–F类)肌肉法案βmRNA水平(C、 n个=3，每重复10个混合组织），ADP诱导的线粒体O2消费率(D、 左侧，n个=3，每个重复20个混合组织）和ATP水平(D、 右侧，n个=每重复3，5个混合组织），中性脂质染色(E类)脂肪体内的TG水平(F、 n个=每重复3，5个混合组织）dMef2>ND-75-i+β-i作用三龄幼虫。基因型如B. (G公司)线粒体O2消费率(左侧，n个=每重复3，20个混合脂肪体）和TG水平(赖特，n个=每重复3，5个混合脂肪体）Mhc>控制(Mhc-Gal4公司/+)和Mhc>法案β (UAS法案β/+; Mhc-Gal4公司/+)三龄幼虫。(H（H）)脂肪体TG水平(一、 n个=3，每次复制5个合并的脂肪体）dMef2>Con公司(dMef2-Gal4型/+)和dMef2>动作β (UAS法案β/+; dMef2-Gal4型/+)三龄幼虫。数据以平均值±SEM表示*P（P）< 0.05.

接下来，我们询问是否删除法案复合I扰动肌肉中的β可以缓解肌肉或脂肪体中的线粒体功能障碍。有趣的是，ADP诱导的O2分离线粒体的消耗率dMef2>ND-75-i+动作β-我幼虫的脂肪体，而不是肌肉，通过法案β基因敲除，与dMef2>ND-75-i+w-i(图3天，左侧)。dMef2>ND-75-i+动作β-我幼虫在脂肪体中也表现出较高的ATP生成量，但肌肉中没有(图3天，赖特). 我们还检查了脂质代谢，发现中性脂滴积聚较少，TG储存较少dMef2>ND-75-i+动作β-我脂肪体与dMef2>ND-75-i+w-i(图3E类和F类). 总之，我们的结果表明，TGF-β配体Actβ的产生是复杂I扰动肌肉远程引起线粒体功能障碍和脂肪体内脂质失衡所必需的。

我们进一步研究了野生型肌肉中Actβ表达的增加是否足以损害脂肪体内的线粒体功能和脂质稳态。我们通过使用Mhc-Gal4公司在幼虫后期诱导外源表达的驱动因素。与我们的预期一致，在幼虫肌肉中强制表达Actβ显著降低了ADP诱导的O2分离线粒体的消耗率和脂肪体内脂质储存的增加(图3G公司). 通过使用dMef2-Gal4型(图3H（H）). 综上所述，我们的获得和失去功能的结果表明，在线粒体复合物I扰动的背景下，Actβ对肌肉-脂肪体通信至关重要。

ROS/NF-κB级联自主调节线粒体扰动肌肉中Actβ的表达。

接下来，我们分析了线粒体扰动肌肉中如何诱导Actβ。线粒体复合物I的扰动已被证明能显著增加细胞内活性氧（ROS）信号分子的产生，并激活各种下游激酶/转录因子信号通路(16–18). 我们还表明，幼虫肌肉中的复合物I扰动触发活性氧的产生并激活转录因子，如FoxO、JNK和NF-κB/Rel(8). 因此，我们假设线粒体扰动可能导致法案通过ROS的产生在幼虫肌肉中表达β，并测试了降低复杂I扰动肌肉中ROS水平的作用(8). 引人注目的是，ROS抑制酶PHGPx的过度表达(8)显著下调幼虫肌肉中Actβ水平和脂肪体中TG的储存(图4一个)表明线粒体应激肌肉通过ROS生成诱导Actβ表达。

保存图片、插图等的外部文件。对象名为pnas.1708037114fig04.jpg

ROS/NF-κB信号调节法案β在复杂I扰动肌肉中的表达。(一个)肌肉法案βmRNA水平(左侧，n个=每重复3，10个混合组织）和脂肪体TG水平(赖特，n个=每重复3，5个混合组织）。控制或无人机线交叉到UAS-ND-75-i，管-Gal80；dMef2-Gal4型子代在29℃下生长至3龄。(B)肌肉法案βmRNA水平Mhc>富士康(UAS-foxo/+；Mhc-Gal4公司/+)和六氯环己烷>庚烷(Mhc-Gal4/UAS-hep-CA)幼虫(n个=3，每个重复10个混合组织）。(C类)Relish记者表情的代表性图片(深度-GFP)在幼虫肌肉细胞中。(天)肌肉法案βmRNA水平(左侧，n个=每重复3，10个混合组织）和脂肪体TG水平(赖特，n个=每重复3，5个混合组织）Mhc>版本68(UAS-Rel-68/+；Mhc-Gal4公司/+)三龄幼虫。数据以平均值±SEM表示*P（P）< 0.05.

已知有几种信号通路作用于ROS的下游，包括FoxO、JNK和NF-κB/Rel(8). 为了探索这些因子中哪些有助于Actβ诱导，我们在野生型幼虫肌肉中过度表达了相关激酶或转录因子。有趣的是，尽管富士康或庚-CA，Hep的活性形式，未能影响Actβ的表达(图4B)，过度表达68版Rel的活性形式，在野生型肌肉中显著提高Actβ的表达，并远程增加脂肪体内TG的储存水平(图4天)表明NF-κB/Rel信号传导促进Actβ的产生。我们还通过使用Dipt-GFP报告子证实了复杂I扰动肌肉中NF-κB/Rel信号的激活(14，19) (图4C类). 此外，我们通过敲除抑制NF-κB/Rel信号传导相对在复杂I扰动肌肉中的表达，发现两块肌肉法案β诱导和脂肪体TG积累至少部分缓解(图4一个). 总的来说，这些结果强烈表明，复合物I干扰自主激活ROS诱导的NF-κB信号级联，诱导幼虫肌肉中Actβ的表达。

TGF-β/Activin信号在进化上是保守的。例如，激活素A是果蝇属Actβ是脂代谢和线粒体活性的重要调节因子(14，20). 为了询问功能保护是否延伸到哺乳动物中ROS诱导的激活素产生，我们用鱼藤酮（一种成熟的复合物I抑制剂）治疗C2C12成肌细胞(21)CellROX（一种专门检测活性氧的染料）表明，这导致活性氧迅速而强劲地升高(图S4一个). 此外，鱼藤酮还诱导英赫巴，一种编码激活素a亚单位的基因，但不是英赫布，在成肌细胞中增加约两倍(图S4B，左侧). 在分化的C2C12肌管中也获得了类似的结果(图S4B，赖特). 因为细胞内活性氧已被广泛证明可以激活肌肉细胞中的NF-κB信号(16)，我们想知道NF-κB信号是否是鱼藤酮诱导的英赫巴为了解决这个问题，我们通过添加一种天然NF-κB抑制剂Withaferin A来阻断NFκB信号传导(22)，在鱼藤酮治疗C2C12成肌细胞之前，观察到英赫巴成肌细胞被废除(图S4B，左侧). 因此，我们的数据表明，复合物I扰动以保守的方式自主诱导哺乳动物肌肉细胞中激活素mRNA的表达。

保存图片、插图等的外部文件。对象名为pnas.1708037114sfig04.jpg

线粒体复合体I扰动诱导英赫巴κB活性在C2C12肌肉细胞中的表达。(一个)具有或不具有100nM鱼藤酮处理1小时的C2C12成肌细胞中ROS水平的代表性图像(B和C类)相对mRNA水平英赫巴和英赫布在C2C12成肌细胞中(B)和肌管(C类)在100 nM罗替酮治疗1 h之前，是否用100 nM威瑟芬A刺激3 h(n个= 3). 数据以平均值±SEM表示*P（P）< 0.05.

TGF-βI型受体狒狒调节脂肪体内的线粒体功能和脂质平衡。

在果蝇，TGF-β配体与两种II型受体Punt和Withful thinking以及三种不同的I型受体之一结合，激活不同的下游信号事件(15). 例如，TGF-β/Activin配体Actβ和Daw以I型受体狒狒（Babo）为靶点，激活下游转录因子dSmad2，而TGF-(15). 为了测试Actβ相关Babo信号是否能自主调节脂肪体内的脂质代谢，我们敲除了脂肪体巴布mRNA水平CG-Gal4公司驱动程序。击倒巴布强劲增强ADP诱导的O2分离线粒体的消耗率和ATP的产生CG>babo-i脂肪体(图5一个和B). 相反，Babo信号通过脂肪体过度表达激活巴布-加利福尼亚州Babo的主动形式，或dSmad2型，ATP生成显著减少(图5B). 这些数据表明，与肌肉Actβ的产生一致，脂肪体内的Babo信号自主调节线粒体功能。最后，我们检查了脂肪体内的脂质代谢。通过击倒降低Babo信号巴布或放显著降低脂肪体中脂滴质量和TG储存量，而Babo信号通过过度表达而激活加利福尼亚州巴布或dSmad2型脂肪体中脂滴质量和TG储存量增加(图5C类和天). 总之，我们的结果表明，脂肪体中的Babo信号能够自主调节线粒体功能和脂质代谢。

保存图片、插图等的外部文件。对象名为pnas.1708037114fig05.jpg

Babo信号调节脂肪体内的线粒体活性。线粒体O2消费率(n个=3，每个重复20个混合脂肪体）(一个)，ATP水平(n个=每次复制3-5个合并脂肪体）(B)中性脂质染色(C类)和TG水平(天) (n个=脂肪体中每重复3，5个混合脂肪体重心>w-i(无人机-w-i/+，CG-Gal4公司/+),CG>babo-i(UAS-babo-i公司/+，CG-Gal4公司/+),CG>put-i(UAS-put-i/+，CG-Gal4公司/+),CG>babo-CA公司(CG-Gal4/UAS-babo-CA公司)，或重心>dSmad2(CG-Gal4/UAS-dSmad2公司)三龄幼虫。(E类)线粒体同步性调节中的肌-脂肪-体通讯。复杂的I扰动幼虫肌肉通过ROS/NF-κB级联增加Actβ的产生。肌肉源性Actβ进一步触发脂肪体内的Babo信号传导，降低线粒体活性，增加TG储存。数据以平均值±SEM表示*P（P）< 0.05.

讨论

线粒体是细胞能量供应所必需的半自主细胞器，已被证明以自主和非自主的方式整合代谢信号并调节系统生理学，包括衰老和能量稳态(5，6，8). 使用果蝇属作为一个模型，我们证明，通过复合物I扰动特别是肌肉中的线粒体功能受损，会远程损害另一代谢组织（脂肪体）的线粒体功能，并导致肥胖表型。使用RNA-seq和基因验证，我们进一步发现，复杂的I扰动肌肉产生TGF-β配体Actβ，然后靶向脂肪体，影响该组织中的线粒体功能和脂质动员。我们的研究结果表明在不同的器官或组织中同步调节线粒体活性的可能性。

有证据支持哺乳动物的“线粒体同步性”观点。例如，运动后肌肉分泌一些肌细胞因子，以增强脂肪组织中的线粒体活性(5，23). 肌肉线粒体活性受损是否与其他组织线粒体功能同时降低有关，目前尚不清楚。在这里，我们将Actβ描述为线粒体功能障碍模型中参与线粒体同步性的肌细胞因子。

除了作为中枢或外周神经中表达的神经肽外(24，25)，Actβ还作为一种来源于肠内分泌细胞的内分泌肽，通过Babo受体靶向脂肪体(14). Actβ在野生型肌肉中低水平表达(14); 然而，当复合物I在肌肉细胞中受到扰动时，我们观察到Actβ表达的显著诱导，这表明线粒体损伤可以启动肌肉中Actβ的表达，从而调节脂肪体功能。研究表明，Actβ/Babo信号传导可增强幼虫脂肪体对Akh的反应(14). 与这一发现一致，我们的RNA-seq数据显示AkhR公司脂肪体中的表达水平增加了大约两倍dMef2>ND-75幼虫(数据集S2)这是一种与幼虫肌肉中Actβ生成增加相关的事件。Akh已被证明可以调节脂肪体内的脂质动员(26). 因此，我们观察到Actβ/Babo信号导致脂质积聚，这表明Actβ/Babo信号可能损害线粒体相关的脂质动员，以克服Akh的脂溶作用。为了支持这一观点，哺乳动物有证据表明激活素/TGF-β通过多种机制损害线粒体功能和脂质稳态(27)。

除Actβ外，另一种激活素配体Daw还以Babo/dSmad2为靶点，可能通过调节dILP2分泌来调节全身碳水化合物代谢和衰老过程(28，29). 虽然Daw在肌肉中表达，但我们不认为Daw参与肌肉和脂肪体之间的线粒体同步性，因为复杂I扰动肌肉中Daw的敲除无法恢复正常的TG储存水平。然而，Daw在肌肉以外的其他组织中表达，我们不能排除Daw作为第二激素激活脂肪体内Babo信号的可能性。

我们的研究结果还发现，在苍蝇和小鼠肌肉细胞中，复合物I的破坏增加了ROS的生成，激活了NF-κB/Rel并诱导了Activin/Actβ的表达。先前的观察进一步支持了这些发现，NF-κB活性需要上调英巴/激活素在人类成肌细胞中(30)。英赫巴编码aβ-亚单位（β一个)二硫键二聚抑制素/激活素，包括抑制素A（αβ一个)，激活素A（β一个β一个)和激活素AB（β一个βB). 抑制素通过受体结合竞争适度抑制激活素信号(31). 与相对不太了解的激活素AB相比，激活素A已被公认为脂质稳态和线粒体活性的代谢调节器。重要的是，与瘦人相比，肥胖患者中促进人类脂肪祖细胞增殖的激活素A水平显著升高(32，33). 基因破坏英赫巴，通过替换英赫巴使用的Inhb公司，导致小鼠脂肪组织中激活素A的生成显著减少，线粒体功能增强，导致脂质损失(20). 因为Actβ/Activin在苍蝇和哺乳动物的代谢调节中都表现出保守的特征(14，34)中线粒体ROS-Rel-Actβ轴的特征果蝇属这将有助于进一步研究哺乳动物动物模型中肌肉和脂肪组织之间的非自主线粒体调节。

实验程序

果蝇属菌株和细胞培养。

RNAi和过表达的苍蝇种群来自转基因RNAi项目（TRiP）、日本国家遗传研究所（NIG）和布卢明顿种群中心。请参见SI实验程序了解更多详细信息。

线粒体O2消耗和ATP测量。

使用组织线粒体分离试剂盒（Abcam；ab110168）、细胞外耗氧试剂盒（Abcam，ab197242）和ATP测定试剂盒（Thermo Fisher，A22066）。请参见SI实验程序了解更多详细信息。

定量脂质分析和甘油三酯测量。

从三龄幼虫脂肪体中提取脂质，并将其提交给贝斯以色列女执事医疗中心（BIDMC）质谱设备进行分光光度分析(网址：www.bidmmasspec.org). 按照说明进行TG测量(35，36). 请参见SI实验程序了解更多详细信息。

RNA-seq转录组分析、生物信息学分析和qPCR。

使用TriZol试剂提取幼虫脂肪体的总RNA，并用于哥伦比亚基因组中心的RNA-seq分析(37). RNA-seq数据保存在基因表达总览（GEO，GSE100214标准). qPCR显示的基因表达标准化为内部对照RpL32型(果蝇属)或肌动蛋白-β (法案b，鼠标）。请参见SI实验程序了解更多详细信息。

统计分析。

数据以平均值±SEM表示。学生的t吨试验用于比较两组。EASE得分(38)用于评估基因富集。P（P）<0.05被认为具有统计学意义。

SI实验程序

果蝇属菌株和细胞培养。

本研究使用了生长在25°C正常食物中的晚三龄幼虫（游荡前12小时），并在雄性和雌性混合物中进行密度控制。RNAi线路对抗w个（JF01545），ND-75型（JF02791），ND-49型（HM05059），ND-42型（HMS05104），行动β（JF03276），道夫（HMS01110），dpp（数据处理程序）（JF02455），gbb公司（hms 01243），小牛（HMS01125），肌（JF01587），相对（HMS00070），巴布（JF01953），放（HMS01944），cyt-c1（HMS01057），COX5A公司（JF02700），塞浦路斯（HMS00815），ATP同步器β（JF02892），黑色（blw）（JF02896），CG12262号（HMS00434），硫代酶（HMS01017），以及百万吨级α（HMS00660）来自哈佛医学院的TRiP(https://fgr.hms.harvard.edu/fly-in-vivo-rnai)、和ImpL2（影响2）（15009R-3）从日本国家遗传研究所获得(https://shigen.nig.ac.jp/fly/nigfly/)。UAS法案β,UAS-PHGPx公司，UAS-foxo公司，UAS-hep-CA、和UAS-babo-CA公司已被描述(1，2)和UAS-Rel-68型（BLM 55778）从布卢明顿库存中心获得。CG-Gal4公司，dMef2-Gal4型，Mhc-Gal4，w型1118，Dpt绿色荧光蛋白、和Tub Gal导管80UAS-ND-75-RNAi；dMef2-Gal4型已被描述(1，2). 敲除TGF-β家族配体或转录因子ND-75型-肌肉不足，无人机系统RNAi线交叉到Tub-Gal80，UAS-ND-75-RNAi；dMef2-Gal4型在18°C下保持24小时，以使Gal4失活。子代在29°C下生长，直到第三龄（游荡前12小时）。因为Mhc-Gal4公司在二龄幼虫期后表达，在大多数过表达实验中使用，以避免潜在的发育问题。

小鼠成肌细胞C2C12购自美国型培养物收藏中心。将C2C12成肌细胞（<15代）在含有10%FBS和抗生素的DMEM中培养，并在含有2%马血清和抗生素（Thermo Fisher Scientific）的DMEMs中分化为肌管，在37°C和5%CO中培养5 d2.

荧光染色、显微镜和西方印迹。

在PBS中解剖三龄幼虫脂肪体或肌肉，并在含有4%甲醛的PBS中固定15分钟。固定后，用含有0.2%Triton X-100的PBS清洗组织，并在4°C的一级抗体中培养过夜。使用二级抗体和DAPI（1:1000，Invitrogen）在室温下培养组织1小时。组织被清洗并安装在Vectashield（Vector）中。兔抗人p-SMAD3（1:1000，Epitomics，1880-1）抗体用于检测果蝇属使用p-MAD和小鼠抗ATP5A抗体（1:1000，Mitosciences，MS507）检测线粒体。Bodipy 493/503（1μg/mL，Invitrogen）在室温下用于中性脂质染色30分钟。用100 nM鱼藤酮（Sigma，R8875）处理C2C12成肌细胞1小时，并用CellROX绿色试剂（1:1000，Thermo Fisher，10444元)30分钟检测ROS生成。在蔡司Axioskop 2motplus立式上进行荧光显微镜检查，并使用徕卡TCS SP2 AOBS系统获得共焦图像。用缓冲液（50 mM Tris●HCl[pH7.5]，5 mM EDTA，10 mM Na）均质10个幼虫脂肪体和肌肉4P（P）2O（运行）7，100 mM氟化钠，1 mM苯甲基磺酰氟，1 mM-钠三VO（旁白）4、10μg/mL抑肽酶、10μg/mL亮氨酸肽、1%诺奈特P-40）。用指示的抗体对蛋白提取物进行免疫印迹：用于检测p-dSmad2的兔抗p-SMAD2（S465/467，1:1000，Cell Signaling，3108）和鼠抗Tubulin（1:5000，Sigma）。

线粒体O2消费。

按照制造商的方案，使用组织线粒体分离试剂盒（Abcam，ab110168）从20个三龄幼虫脂肪体或肌肉中分离线粒体。为了避免对分离的线粒体造成物理损伤，用一次性颗粒杵轻轻均质幼虫组织（Thermo Fisher，12-141-364）。将新分离的线粒体重新悬浮在分离缓冲液中（线粒体浓度>1 mg/mL），并立即用于下一次测量。线粒体O2使用细胞外耗氧试剂（Abcam，ab197242）在96孔板中测量有或没有ADP的消耗率。

ATP测量。

将来自三龄幼虫的五块肌肉或脂肪体均匀放置在100μL提取缓冲液（6 M氯化胍，100 mM盐酸三钠，pH 8.0，4 mM EDTA）中，立即在70°C下加热5 min，然后在18400×克在4°C下持续10分钟，以去除角质层和细胞碎片。根据制造商的协议，使用ATP测定试剂盒（Thermo Fisher，A22066）测量ATP水平，并进一步将其归一化为使用Bradford试剂（Sigma）测量的蛋白质水平。

定量脂质分析。

新鲜分离出五个三龄幼虫脂肪体，一式三份，在200μL PBS中均质。使用五毫升匀浆，使用Bradford试剂（Sigma）测量每个样品的蛋白质含量。为了进行脂质分析，剩余匀浆中的脂质按照BIDMC质谱设备的标准方案提取(www.bidmcmassspec.org)并使用SpeedVac完全浓缩至干燥。在BIDMC质谱仪设施中进行分光光度测定，并将样品中的脂质浓度标准化为测得的蛋白质含量。

甘油三酯测量。

将5个3龄幼虫脂肪体或5个3岁幼虫在含有0.2%Triton X的500μL PBS中均质，在70°C下加热5 min，然后在18400×克用10微升上清液通过血清TG测定试剂盒（Sigma，TR0100-1KT）测定TG。使用Bradford试剂（Sigma）测量蛋白质含量。TG储存量标准化为蛋白质量。

RNA-seq转录组分析。

三龄幼虫的十个脂肪体dMef2>ND-75-i对照组收集在冰上。使用TriZol试剂提取总RNA，而使用安捷伦生物分析仪评估RNA完整性（RIN>6.6）。按照标准协议，使用Illumina Hi-seq试剂盒构建测序文库，并在哥伦比亚基因组中心生成100-bp的单端读取。序列读取映射回果蝇属基因组（flybase基因组注释版本r5.51）使用Tophat。利用唯一映射的读取，我们通过使用袖扣[每千基百万片段（FPKM）值]和HTSeq（每个基因的读取计数）量化基因表达水平。接下来，我们对读取计数进行数据规范化，并使用Bioconductor包“DESeq”应用负二项式统计框架量化实验数据和对照数据之间的差异表达。通过FDR调整鉴定差异表达基因P（P）使用Bioconductor包获得的值问值0.1。

生物信息学分析。

如果重复之间持续观察到2倍或更多的变化，则选择差异表达基因。对于变化小于2倍但大于1.5倍的基因，只有那些经过调整的P（P）值为0.01或更高。根据折叠变化和P（P）值。至少有双重变化和调整的基因P（P）值≥0.05为高置信度。利用DAVID生物信息学资源对所有差异表达基因（上调和下调）进行GO富集分析(网址：https://david.ncifcrf.gov)，然后使用FPKM的热图表示直观地显示选定代谢项。为了获得特定信号通路的目标基因列表，我们收集了已发表或可用的微阵列或下一代测序数据集，这些数据集包括配体处理、成分功能的获得或丧失以及转录因子的ChIP分析（ChIP-seq或DroID[网址：www.droidb.org]). 我们将至少两个数据集之间的重叠基因设置为信号通路的“中度自信”靶基因。然后我们搜索通过qPCR、免疫染色、化学结合、报告分析或遗传相互作用验证的基因，并将其设置为“高置信”靶基因。在本研究中，我们只显示了TGF-β信号传导的“高置信”靶基因。

RT-qPCR。

使用TRIzol（Invitrogen）从10个三龄幼虫脂肪体或肌肉或处理过的C2C12细胞中分离出RNA，并使用iScript cDNA合成试剂盒（Bio-Rad）转录cDNA。然后在CFX96实时系统/C1000热循环（Bio-Rad）上使用iQ SYBR Green Supermix进行qPCR。基因表达标准化为内部对照RpL32型(果蝇属)或肌动蛋白-β (Actb公司，鼠标）。使用的qPCR引物如下：

果蝇属:

  • RpL32-F:GCTAAGCTCTCCAAATG公司
  • RpL32-R:GTTCGATCGTAACCGATGT
  • 行为β-F:ACGGCAATTTTGACAAAGC
  • 行为β-R:TTGGTATTCGTCCACCA
  • daw-F:ATCCTTCGTCCGCATTAAG公司
  • daw-R:CGGTTCCAGGTTTCAGC公司
  • dpp-F:GACCAGCAGCATTAGCAAA公司
  • dpp-R:AACTGTCGGTTCGCGTCAC
  • gbb-F:CATCGACGAGAGCGACATCA公司
  • gbb-R：标签TGTCGTTGGGCACGTT
  • mav-F：AGCATTACACAAAACGGATTCA公司
  • mav-R：CTGTTCGCCACGTAGGT
  • 肌肉-F:ATTCTCCAACAACGATAGTCCG
  • myo-R：CCCCGGTTTTACTTTTCA

鼠标：

  • Inhba-F:GTAAAGTGGGGGGAACGGG
  • Inhba-R：CCTGACTCGGCAAAGGTGAT公司
  • Inhbb-F:GGAAGGTACGGGTCAAGGTG公司
  • Inhbb-R：ATGGGAAAGGTATGCCAGCC公司
  • 行为-F:CGGTTCCGATGCCCTGAGGCTCTT
  • 行动-R:CGTCACACTTCATGATGGAATTGA

统计分析。

数据以平均值±SEM表示。学生的t吨测试用于两组之间的比较。EASE评分用于评估基因富集情况。P（P）<0.05被认为具有统计学意义。

补充材料

补充文件

单击此处查看。（150K，xlsx）

补充文件

单击此处查看。（111K，xlsx）

补充文件

单击此处查看。（29K，xlsx）

致谢

我们感谢Young Kwon、Richelle Sopko、Charles Xu、Stephanie Mohr和Ilia Droujinine博士对手稿的评论；Rich Binari博士协助苍蝇实验；迈克尔·奥康纳博士为试剂、转基因飞行路线和有益的讨论；和Richard W.Padgett博士分享TGF-β信号靶基因的微阵列数据。这项工作得到了NIH拨款5P01CA120964和5R01DK088718以及美国糖尿病协会拨款1-16-PDF-108的支持。N.P.是霍华德·休斯医学研究所的研究员。

脚注

作者声明没有利益冲突。

数据存储：本文报告的数据已存储在基因表达综合数据库（GEO）中，https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo网站（加入编号。GSE100214标准)。

本文包含在线支持信息，网址为www.pnas.org/lookup/supl/doi:10.1073/pnas.1708037114/-/DC补充.

工具书类

1Lenard NR，Berthoud HR。食物摄入和体力活动的中枢和外周调节：途径和基因。肥胖（银泉）2008;16：S11–S22。 [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
2Demontis F、Piccirillo R、Goldberg AL、Perrimon N。骨骼肌对系统老化和寿命的影响。老化细胞。2013;12:943–949. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
三。Droujinine IA，Perrimon N.生理学中的器官间通讯途径：聚焦果蝇。年度版次Genet。2016;50:539–570. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
4Schnyder S，Handschin C.骨骼肌作为内分泌器官：PGC-1α、肌细胞因子和运动。骨头。2015;80:115–125. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
5Boström P等人。一种PGC1-α依赖性肌细胞因子，可驱动白色脂肪的棕色脂肪样发育和产热。自然。2012;481:463–468. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
6Durieux J，Wolff S，Dillin A.电子传输链介导寿命的细胞非自主性。单元格。2011;144:79–91. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
7Kim KH等。自噬缺陷通过诱导Fgf21作为有丝分裂因子，防止肥胖和胰岛素抵抗。自然医学。2013;19:83–92.[公共医学][谷歌学者]
8Owusu Ansah E，Song W，Perrimon N。肌肉有丝分裂刺激通过系统性抑制胰岛素信号来促进寿命。单元格。2013;155:699–712. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
9Vamecq J等。线粒体功能障碍和脂质稳态。当前药物代谢。2012;13:1388–1400.[公共医学][谷歌学者]
10Kishita Y，Tsuda M，Aigaki T.线粒体三功能蛋白（MTP）缺乏果蝇模型中脂肪酸氧化受损。生物化学与生物物理研究委员会。2012;419:344–349.[公共医学][谷歌学者]
11Yang M，Nelson D，Funakoshi Y，Padgett RW。果蝇大脑中TGFbeta信号的全基因组微阵列分析。BMC开发生物。2004;4:14. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
12Hamaratoglu F、de Lachapelle AM、Pyrowolakis G、Bergmann S、Affolter M.Dpp信号活动要求五角体与生长中的果蝇翅膀想象盘的组织大小成比例。《公共科学图书馆·生物》。2011;9：e1001182。 [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
13Gibbens YY、Warren JT、Gilbert LI、O'Connor MB。果蝇变态的神经内分泌调节需要TGFbeta/Activin信号。发展。2011;138:2693–2703. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
14Song W，等。中肠源性激活素调节脂肪体中的类胰高血糖素作用和血糖控制。单元格元数据。2017;25:386–399. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
15Gesualdi SC、Haerry TE。果蝇激活素/转化生长因子β家族成员的不同信号传导。Fly（奥斯汀）2007;1:212–221.[公共医学][谷歌学者]
16Dodd SL、Gagnon BJ、Senf SM、Hain BA、Judge AR.Ros在肌肉废用期间介导NF-kappaB和Foxo的激活。肌肉神经。2010;41:110–113. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
17Santabárbara-Ruiz P等人。ROS诱导的JNK和p38信号是果蝇再生过程中非成对细胞因子激活所必需的。公共科学图书馆-遗传学。2015;11：e1005595。 [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
18墨菲议员。线粒体如何产生活性氧物种。生物化学杂志。2009;417:1–13. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
19Vodovar N等。一种昆虫病原假单胞菌类口腔感染果蝇后的宿主防御。美国国家科学院程序。2005;102:11414–11419. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
20Li L等。激活素信号：对身体成分和线粒体能量代谢的影响。内分泌学。2009;150:3521–3529. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
21Li N，等。线粒体复合物I抑制剂鱼藤酮通过增强线粒体活性氧生成诱导细胞凋亡。生物化学杂志。2003;278:8516–8525.[公共医学][谷歌学者]
22Maitra R、Porter MA、Huang S、Gilmour BP。囊性纤维化炎症细胞模型中天然产物威沙芬A对NFkappaB的抑制作用。燃烧杂志（伦敦）2009;6:15. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
23Kim KH等。急性运动诱导小鼠和健康人的FGF21表达。公共科学图书馆一号。2013;8：e63517。 [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
24Ting CY等。果蝇视觉系统中r7轴突的平铺是通过激活素信号转导到细胞核和相互排斥来介导的。神经元。2007;56:793–806. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
25Kim MJ，O'Connor MB。顺行激活素信号调节果蝇神经肌肉接头的突触后膜电位和GluRIIA/B丰度。公共科学图书馆一号。2014;9：e107443。 [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
26Grönke S等人。果蝇体内脂肪储存和动员的双重脂肪分解控制。《公共科学图书馆·生物》。2007;5：e137。 [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
27Casalena G、Daehn I、Bottinger E.肾脏疾病中的转化生长因子-β、生物能量学和线粒体。塞米恩·内弗罗。2012;32:295–303. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
28Bai H，Kang P，Hernandez AM，Tatar M.胰岛素/dFOXO靶向的激活素信号调节果蝇的衰老和肌肉蛋白质平衡。公共科学图书馆-遗传学。2013;9：e1003941。 [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
29Ghosh AC，O'Connor MB。系统激活素信号独立调节果蝇体内的糖稳态、细胞代谢和pH平衡。美国国家科学院程序。2014;111:5729–5734. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
30Trendelenburg AU，Meyer A，Jacobi C，Feige JN，Glass DJ。TAK-1/p38/nNFkappaB信号通过增加激活素A水平抑制成肌细胞分化。骨骼肌。2012;2:3. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
31Massague J，Gomis RR。TGFbeta信号的逻辑。FEBS信函。2006年；580:2811–2820.[公共医学][谷歌学者]
32Dani C.脂肪生成和肥胖中的激活素。国际J Obes（伦敦） 2013;37:163–166.[公共医学][谷歌学者]
33Zaragosi LE等。激活素a在人类脂肪祖细胞的增殖和分化中起着关键作用。糖尿病。2010;59:2513–2521. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
34Ueland T等，激活素A与2型糖尿病的心血管疾病。糖尿病血管疾病研究。2012;9:234–237.[公共医学][谷歌学者]
35Song W等。SH2B对昆虫和哺乳动物的生长、代谢和寿命的调节。单元格元数据。2010;11:427–437. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
36Song W，Veenstra JA，Perrimon N.通过速激肽控制果蝇的脂质代谢。单元格报告。2014;9:40–47. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
37Kwon Y等。分泌型胰岛素/IGF拮抗剂ImpL2的局部表达诱导的系统器官消耗。开发单元。2015;33:36–46. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
38Hosack DA、Dennis G，Jr、Sherman BT、Lane HC、Lempicki RA。识别易感基因列表中的生物主题。基因组生物学。2003;4：R70。 [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
文章来自美国国家科学院院刊由以下人员提供美国国家科学院