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神经科学杂志。2008年7月16日；28(29): 7435–7444.
数字对象标识：10.1523/JNEUROSCI.0727-08.2008
预防性维修识别码：PMC6670388型
PMID：18632947

Nogo-A和髓鞘相关糖蛋白对少突胶质细胞成熟和髓鞘形成的不同调节

文森特·佩内，通讯作者1 桑德琳·朱莉，2 Franziska基督，1 勒达·迪莫，1和马丁·施瓦布1
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摘要

Nogo-A是一种最有效的寡突胶质细胞衍生抑制剂，用于损伤的成人中枢神经系统的轴突再生。然而，Nogo-A在发育和健康少突胶质细胞中的生理功能尚不清楚。在本研究中，我们研究了Nogo-A在发育中的视神经髓鞘形成中的作用。通过实时定量PCR，我们发现Nogo-A在分化少突胶质细胞中的表达比主要髓磷脂蛋白MBP（髓磷脂碱性蛋白）、PLP（蛋白脂质蛋白）/DM20和CNP（2′，3′-环核苷酸3′-磷酸二酯酶）的表达增加更快。Nogo-A缺乏小鼠的视神经和小脑分析−/−)出生后第一个月内，少突胶质细胞分化、髓鞘形成和轴突口径增长明显延迟。Nogo-A和MAG的联合缺失导致更严重的短暂性髓鞘减退。与MAG相反−/−老鼠，Nogo-A−/−突变体在髓鞘和Ranvier结节的结构中没有出现异常。Nogo-A和MAG的共同结合蛋白NgR1在MAG中表达上调−/−动物，而Lingo-1，一种辅受体的水平保持不变。总之，我们的结果表明Nogo-A和MAG在少突胶质细胞成熟中的作用不同体内，并表明Nogo-A也可能影响病理条件下的髓鞘再形成，如多发性硬化症。

关键词：Nogo-A、少突胶质细胞、髓鞘形成、OPC、视神经、小脑

介绍

在中枢神经系统中，髓鞘细胞是来源于心室区产生的少突胶质前体细胞（OPC）的少突细胞(Kessaris等人，2006年). 当少突胶质细胞分化并产生髓鞘片时，它们开始表达高水平的髓鞘碱性蛋白（MBP）和蛋白脂质蛋白（PLP），构成髓鞘蛋白的大部分内容。MBP或PLP敲除（KO）小鼠髓鞘结构稳定性的缺陷说明了这些蛋白在髓鞘形成中的中心作用(Popko等人，1987年;Griffiths等人，1998年). 相比之下，其他髓鞘蛋白在少突胶质细胞分化中的功能作用尚不清楚。

Nogo-A是一种高分子量跨膜蛋白，最初被鉴定为主要由少突胶质细胞表达的轴突生长的有效髓鞘相关抑制剂(Caroni和Schwab，1988年;Chen等人，2000年). 在受伤的脊髓中，使用针对Nogo-A或Nogo-A-基因缺失的中和抗体治疗可刺激长距离轴突生长并改善运动功能(施瓦布，2004年;Dimou等人，2006年). Nogo-A与包括Nogo66受体NgR1在内的多亚单位受体复合物结合(Fournier等人，2001年)，适配器分子Lingo-1(Mi等人，2004年)和效应器组件p75/Troy(邵等，2005). 神经元表面这种复合物的刺激导致细胞内小GTPase RhoA的激活，它介导肌动蛋白解聚，从而导致轴突的塌陷或回缩(Yamashita等人，2005年). MAG和少突胶质细胞髓鞘糖蛋白（OMgp）可以诱导相同的分子级联反应，它们在结构上与Nogo-A不同，但也与NgR–p75受体复合物结合(Wang等人，2002a).

与Nogo-A信号相关的分子，如MAG和Lingo-1，已被证明参与少突胶质细胞的发育。Lingo-1最近被证明是少突胶质细胞分化的负调节因子在体外和体内(Mi等人，2005年). MAG是一种细胞表面Ig超家族蛋白，存在于少突胶质细胞的轴突膜上，在那里它介导轴突-少突细胞粘附(Owens等人，1990年;欧文斯和邦格，1991年). 令人惊讶的是，本构MAG−/−小鼠的髓鞘形成仅有轻微延迟，髓鞘结构有轻微异常(Li等人，1994年;Montag等人，1994年). 这可能归因于补偿机制，例如Nogo-A，它与MAG一样可以绑定NgR复合体。在出生后的前2周，除少突胶质细胞外，在包括视网膜神经节细胞在内的许多神经元中检测到Nogo-A蛋白和mRNA水平(Huber等人，2002年;Wang等人，2002b). 这一时期对应于少突胶质细胞分化和髓鞘形成的开始。因此，Nogo-A的发育调节表达可能参与了轴珠接触和/或少突胶质细胞的成熟。

在本研究中，我们研究了缺失Nogo-A或MAG或双敲除（DOKOs）的敲除动物的少突胶质细胞分化和髓鞘形成。Nogo-A的消融导致少突胶质细胞分化和髓鞘生成严重但短暂的损害。然而，与MAG相比，Nogo-A的缺乏并没有改变髓磷脂或Ranvier淋巴结的结构。

材料和方法

动物：淘汰动物一代。

动物程序按照苏黎世州兽医局的指南进行。如前所述，Nogo-A基因外显子2和3的同源重组产生了Nogo-A-敲除小鼠(Simonen等人，2003年). MAG-null小鼠通过同源重组获得mag基因来自外显子5-8，包括编码信号序列的区域(Montag等人，1994年). 对于单敲除和双敲除小鼠，菌株背景值达到>99%C57BL/6。通过Nogo-A杂交获得双敲除突变体−/−和MAG−/−老鼠。使用以下Nogo-A引物序列，通过PCR对转基因菌株进行常规基因分型−/−表型：5′-AGT GAG TACCAGCT GCA C-3′，5′-CCT ACC CGG TAG AAT ATC GAT AAG C-3′、5′-TGC TTT GAA TTA TTC CAAGTA GTC C-3′；和用于MAG−/−表型：5′-TTG-GCG-GCG-AAT GGG-CTG-AC-3′，5′-GCA GGG-AAT-GGA-GAC CG-3′，5'-CAC CCT-GCC-GTT-TTG-GAT-AAT-3′。

定量实时PCR。

在出生后第0天（P0）到成年的不同年龄段，颈椎脱位后，在RNAlater溶液（Ambion）中快速解剖小脑、视神经或视网膜。将组织置于Eppendorf管中，在液氮中快速冷冻，并在−80°C下保存，直到提取RNA。RNeasy RNA分离试剂盒（QIAGEN）用于视网膜和小脑样本，而视神经RNA是用RNeasy-Micro试剂盒（QIAGEN。DNA酶处理消化残余基因组DNA。对于逆转录，通过寡核苷酸-dT和M-MLV逆转录酶（Promega）转化相同数量的总RNA。对于所有组织，用设计为跨越内含子序列或覆盖外显子-内含子边界的特异性引物扩增出对应于5 ng总RNA的cDNA。CNP特异引物（正向，5′-AGGAGAAGCTTGGAGCTGGTC；反向，3′-CGATCTCACCTCC），GAPDH（正向，5'-CAGCAATGCACCC；反向，3'-TGGACTGTGGTCATGAGCCC），LINGO1（正向，5-AAGTGGCCATCAGGT；反向，3-TGTAGCAGCCTCGACAGCA），MAG（正向，5-GATATCTCGCCACC；逆向，3'-ACTGACCTCCACTCCGTT），MBP（正向，5′-CACACGAGAACACCA；反向，3′-GGTGTCGGTCACAAA），NgR1/RTN4R（正向，5'-CTCGACCGAAGATGAAG；反向，3'-TGTTAGCACACAAGCACCACAGCACCAG），NogoA/RTN4●●●●。通过实时逆转录（RT）-PCR和聚合酶就绪混合物（LightCycler 480；SYBR Green I Master；Roche）和热循环器（LightCycler；Roche-Diagnostics）分析基因表达。通过分析每个扩增PCR产物的熔化曲线和在1.5%琼脂糖凝胶上显示PCR扩增产物，可以控制扩增的特异性。对于基因表达的相对定量，使用比较阈值周期（ΔΔ）将mRNA水平归一化为甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）计算机断层扫描)方法。对于校准，使用对照样品计算相对值，如图图例所示。每个反应一式三份。

免疫组织化学。

在不同年龄段（P0至成年），通过腹腔注射过量麻醉剂杀死小鼠。用PBS进行心内灌注后（0.1米)和4%多聚甲醛（PFA），快速解剖眼睛和大脑，并在4°C下用4%PFA固定48 h。组织在30%蔗糖中冷冻过夜，然后在OCT（最佳切割温度）复合物（Tissue-Tek；Sakura Finetek）中与2-甲基丁烷的液氮冷却浴一起冷冻。纵向脑切片（20μm）、视神经切片（10μm）和视网膜切片（12μm）用低温恒温器切割并收集在Superfrost Plus载玻片（Menzel-Glaser）上。对于免疫组织化学程序，在室温下用5%BSA、3%正常血清、0.3%Triton X-100在PBS中封闭组织切片1小时，以避免非特异性交叉反应。然后，将一级抗体应用于5%BSA、3%正常血清、0.3%Triton X-100的PBS中，在4°C下过夜。PBS洗涤后，在室温下用适当的二级抗体培养切片1小时，并用MOWIOL防褪色介质[10%MOWIOL 4–88（w/v）（Calbiochem）在100 m米Tris，pH 8.5，25%甘油（w/v）和0.1%DABCO（1,4-二氮杂二环[2.2.2]辛烷）]。主要抗体如下：兔抗Nogo-A[Laura；Rb173A(Oertle等人，2003年)]血清（1:200）、兔抗MBP（1:1000；Millipore生物科学研究试剂；AB980）、小鼠抗绿色荧光蛋白（GFP）（克隆3E6；Invitrogen）、兔抗大鼠L-MAG（1:500；瑞士巴塞尔制药中心巴塞尔大学医院N.Schaeren-Weiemers博士赠送）、兔防凝集素2（1:4000–1:10000；由C博士提供。Stiles，哈佛大学，马萨诸塞州波士顿），小鼠抗腺瘤性息肉病大肠杆菌（APC）（1:1000；克隆CC-1；钙生物化学），豚鼠抗NG2（1:500；由加利福尼亚州拉荷亚市伯纳姆医学研究所癌症研究中心W.Stallcup博士给出）。使用蔡司Axioskop 2 Plus显微镜（卡尔蔡司）分析免疫荧光标记，并使用CCD摄像机拍摄图像。

Paranodin/钠通道标记。

或者，对于视神经中的偏执蛋白/Caspr和钠通道双重染色，在动物断头后立即切下新鲜冷冻切片，并置于−80°C。在室温下解冻并干燥载玻片，在−20°C下在无水甲醇中固定20分钟，并用PBS清洗三次。如前所述，在室温下预培养30分钟至1小时。将小鼠抗泛钠通道（1:50–1:100；克隆K58/35；Sigma-Aldrich）和兔抗偏执狂蛋白（1:500；法国巴黎皮埃尔大学J.-A.Girault博士的礼物）涂在切片上，并在4°C下过夜。对于钠通道（NaCh）染色，在室温下添加马抗鼠生物素偶联抗体（1:100；载体）2小时，并使用与Alexa 488（1:400；Invitrogen）相连的链霉亲和素进行第三次孵育。用山羊抗兔抗体（1:1000；Invitrogen）检测偏执狂。通过共焦显微镜获得视神经交叉区（尾侧）的图像堆栈。在每只动物和不同组的切片体积为119.05×119.05 x 5μm的情况下，采集2到4组图像。在NIH软件中对合并的图片进行了偏执蛋白和NaCh簇的计算。

蛋白质印迹。

小鼠被颈部脱位杀死，视网膜、小脑或视神经被迅速切除并在液氮中快速冷冻。组织在−80°C下保存，直到提取到裂解缓冲液中（10 m米三重HCl，1%Nonide 40，150 m米氯化钠、0.1%十二烷基硫酸钠、1%脱氧胆酸盐、pH 7.4），含蛋白酶抑制剂（完整迷你型；罗氏诊断）。样品在冰上均匀化30分钟。在10000×克和4°C时，将上清液回收到新的Eppendorf管中，并保持在−80°C或−20°C。蛋白质（50–100μg）在4–12%聚丙烯酰胺凝胶上通过电泳分离，并转移至聚偏二氟乙烯Immobilon P膜。在0.2%TBST（0.1米Tris碱，0.2%吐温20，pH 7.4）在室温下培养1小时，与一级抗体在4°C下培养过夜，并在洗涤后与辣根过氧化物酶结合抗兔抗体（1:10000–1:25000；Pierce Biotechnology）培养。主要抗体为兔抗MBP（1:250–1:500；Millipore生物科学研究试剂）、兔抗NgR1（1:250-1:500；研发系统）、兔对抗Lingo-1（1:500；Abcam）和抗GAPDH（1:10000；Abcam）。通过在Stella检测器（Raytest）中暴露印迹，添加SuperSignal West Pico化学发光底物（Pierce）检测蛋白质条带。使用NIH软件进行密度分析，并将带强度归一化为GAPDH值。

电子显微镜。

在P15和P28，用含有2%PFA和2%戊二醛的溶液在Sorensen缓冲液（0.067米). 灌注后立即解剖视神经，并在4°C的相同固定剂混合物中固定3d。用剪刀将中视神经剪成两段，然后在2%四氧化锇（PB；0.1）中孵育3小时米)在室温下轻轻旋转搅拌。组织在乙醇梯度浴中脱水，浸泡在环氧丙烷中，并嵌入环氧树脂中。在60°C下聚合5天。切割厚度为0.7μm的半薄横截面以进行光学显微镜检查，而切割50 nm的超薄截面以进行电子显微镜分析。在4400或8800×时随机拍摄中枢和外周视神经的照片。

结果

Nogo-A在神经元和少突胶质细胞中受发育调节

我们分别通过定量RT-PCR（qRT-PCR）监测发育中的小鼠视神经和视网膜中胶质和神经元细胞中Nogo-A mRNA的表达变化(图1). 视觉系统是区分神经元和神经胶质Nogo-A的理想系统，因为在啮齿类动物中，视神经被剥夺了神经元细胞体，视网膜也不包含少突胶质细胞。P3后，视神经中Nogo-A mRNA的表达增加了5到10倍，比主要结构髓鞘蛋白MBP、PLP和2′，3′-环核苷酸3′-磷酸二酯酶（CNP）的表达增加2到3天(图1一个). 所有这些少突胶质细胞蛋白的mRNA表达在P15达到最大值。成人中只有Nogo-A mRNA保持在高水平，而MBP、PLP/DM20、CNP和MAG分别下降了～60、～72、～84和～85%。RT-PCR检测到的MBP mRNA升高与免疫组织化学检测到的嘴侧视神经MBP蛋白相关（数据未显示）。如前所述，MBP免疫染色随后沿头尾方向扩散(Foran和Peterson，1992年). 有趣的是，出生到成年期间，视神经中Nogo-A mRNA的增加（>400%）与视网膜中约50%的减少平行(图1B类). 通过免疫组织化学方法在P8视神经的许多推测少突胶质细胞中检测到Nogo-A(图1C类，E类，F类，H（H），箭头），而只有少数细胞与髓鞘蛋白L-MAG共存(图1D类，E类，星星）或CNP(图1G公司，H（H），星星）。免疫组织化学法检测Nogo-A蛋白证实了qRT-PCR结果，表明Nogo-A在发育过程中的表达先于其他少突胶质细胞标记物。此外，Nogo-A位于视网膜神经节细胞层和P1的视神经轴突中，而在成人中，Nogo-A信号仅限于视网膜最内层，在视神经少突胶质细胞游离部分无法检测到(图1我). Nogo-A上的控制染色−/−切片或通过省略与野生型（WT）切片上的一级抗体的孵育，未能提供信号（数据未显示）。然而，当少突胶质细胞在P10处分化时，Nogo-A在无髓轴突中共存，在分化过程中，PLP-GFP阳性的少突胶质胶质细胞在视神经中共存(图1J型)表明Nogo-A表达的神经-胶质细胞转换是渐进性的。正如预期的那样，MAG仅在少突胶质细胞胞体和突起中观察到(图1K（K）). 总之，这些结果表明，胶质细胞Nogo-A的上调在少突胶质细胞分化早期迅速发生，而神经元中Nogo-A的表达则逐渐下调。

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Nogo-A在发育过程中在少突胶质细胞和视网膜神经元中呈负调控。一个qRT-PCR检测视神经髓鞘相关蛋白mRNA的表达。Nogo-A mRNA的升高早于少突胶质细胞其他标记物的升高几天。B类在P3后，视神经少突胶质细胞中Nogo-A的转录物显著增加，但在少突胶质无细胞视网膜的神经节细胞层中出现平行下调。误差条表示SEM。C–F类P8视神经切片的单扫描共焦照片显示，Nogo-A存在于典型的少突胶质束间细胞行中。只有少数未成熟的Nogo-a阳性细胞也显示出L-MAG染色(D类)或用于CNP(G公司)如通过叠加两个标签所示(E类，H（H），星星）。大多数Nogo-A表达细胞尚未表达L-MAG或CNP染色（箭头）。我通过免疫组化，Nogo-A在视网膜神经节细胞层和视神经（ON）轴突P1处的信号非常强烈。在成人视网膜中，弱Nogo-A标记仅限于视网膜的最内层。J型单扫描共聚焦显微镜显示P15视神经中Nogo-A（红色）和PLP-GFP（绿色）的双重免疫染色。两种染色的叠加显示了Nogo-A在轴突束中的存在（小箭头），以及Nogo-A和PLP在分化的少突胶质细胞（黄色，大箭头）及其突起中的共表达。K（K）与Nogo-A不同，L-MAG（红色）和PLP-GFP（绿色）仅存在于视神经少突胶质细胞（黄色）中。ON，视神经。比例尺：C–H型，100微米；我，200微米；J型，K（K），50微米。

Nogo-A和/或MAG抑制不能阻止少突胶质前体细胞在视神经中的迁移

由于Nogo-A早期在视网膜神经节细胞轴突和少突胶质细胞中被检测到，我们推测Nogo-A可能影响OPC的迁移。在中枢神经系统中，视神经是观察OPC从视交叉向视神经头侵袭的首选位置(Small等人，1987年;Colello等人，1995年;Ueda等人，1999年;Sugimoto等人，2001年). 通过使用针对Olig2（一种在OPC细胞核中特异表达的bHLH（碱性螺旋-环-螺旋）转录因子）的抗体可视化OPC(Lu等人，2000年;Zhou等人，2000年). 在纵切面上，少量Olig2-阳性[Olig2-（+）]细胞在胚胎第17.5天（E17.5）从视交叉出现，然后以视交叉至视网膜的梯度侵入视神经(图2一个). 正如预期的那样，OPC没有渗透到视网膜，并且在P4时停止了在视神经头中的迁移。在P6之前，在NG2免疫染色的胶质前体中发现Olig2（数据未显示）。在P10处PLP-GFP染色或P15处APC抗原识别的分化少突胶质细胞中持续存在（数据未显示）。在不同年龄段，在WT、Nogo-A中评估每平方毫米视神经中olig2标记细胞的密度−/−、MAG−/−和DOKO动物(图2B类). 在WT中，Olig2-（+）细胞密度在P0和P6之间增加了四倍，并在P10达到峰值。然后，Olig2-（+）细胞密度在P15和P28处稳定下降。在单基因敲除小鼠中，Olig2-（+）细胞的增加和减少明显跟随WT。相反，DOKO中Olig2-（+）的细胞密度在P6后趋于稳定，但在P15和P28时达到WT水平(图1一个，​,22B类，插图）。定量地说，DOKO中标记细胞的减少在WT组值的P8和P10分别为～26%和～29%。

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Nogo-A和MAG缺失对视神经少突胶质前体细胞数量和迁移的影响。一个在E17.5和P28之间的少突胶质前体细胞和成熟少突胶质细胞中，用识别Olig2的抗体标记视神经纵切面（10μm厚）。Olig2染色的OPC细胞在E17.5从视交叉（OC）迁移并定植于视神经，直到后期的视神经头（ONH）。插图，WT和DOKO视神经吻侧区Olig2染色的对比检查显示，DOKO的细胞密度在P8低于WT，但在P15没有。B类、WT、Nogo-A视神经Olig2标记细胞密度的定量分析−/−、MAG−/−，以及P0和P28之间的DOKO小鼠。将细胞的平均密度（平均值±SEM）归一化为视神经表面。在每个时间点，对两到七只动物进行检查。比例尺：一个400微米；嵌入，100μm。

Nogo-A或MAG缺失导致中枢神经系统少突胶质细胞分化延迟

为了观察少突胶质细胞的分化，我们通过免疫组织化学、qRT-PCR和Western印迹分析跟踪了视神经和小脑中主要少突胶质细胞和髓鞘标志物MBP、PLP和CNP的表达(图3). 在Nogo-A的视神经中−/−或MAG−/−与WT动物相比，P8小鼠幼崽的MBP免疫染色严重降低，DOKO组的MBP染色更为显著，其中MBP染色仅限于视神经的最前端部分(图3一个). 与此一致，Nogo-A−/−和MAG−/−与WT小鼠相比，小脑颗粒细胞层MBP阳性轴突较少，P15白质染色减少。再次，在DOKO幼鼠中观察到更显著的减少，在颗粒细胞层（GCL）中仅显示少数MBP阳性纤维(图3B类). 令人惊讶的是，qRT-PCR分析显示Nogo-A−/−小鼠的MBP、PLP/DM20和CNP mRNA水平下降最为显著，而MAG−/−与WT组相比，动物在小脑和视神经P10处几乎没有差异。在DOKO动物中，髓鞘蛋白mRNA水平与MAG相似−/−小鼠的视神经，但相当于Nogo-A−/−小脑中的小鼠(图3C类，D类). Western blot分析显示Nogo-a小脑中的四种MBP亚型显著减少−/−、MAG−/−和P15处的DOKO小鼠(图3E类). 这些结果表明，Nogo-A的缺失损害了髓磷脂蛋白的合成，而MAG的缺失可能主要影响髓磷脂的沉积和形成或稳定性。在P35，MBP的量在所有四个组中都达到了可比较的水平，这表明少突胶质细胞的分化被延迟，而不是被Nogo-A或MAG的缺乏所阻止。

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Nogo-A和MAG缺乏小鼠的少突胶质细胞分化和髓鞘蛋白合成受损。一个，B类MBP免疫染色显示P8视神经纵切面少突胶质细胞分化(一个)P15小脑(B类). 突变的视神经和小脑MBP的强度明显弱于WT组织。MBP染色在信号仅限于视神经头（箭头）的DOKO组最低，在小脑颗粒细胞层（GCL）和白质中尤其低。C类，D类用qRT-PCR分析视神经和小脑P10处MBP、PLP和CNP的相对mRNA水平。每组至少分析三只动物，一式三份。对于每个髓鞘蛋白，使用GAPDH作为内部标准对mRNA水平进行标准化，并以WT值的百分比表示。髓鞘蛋白mRNA的最显著减少出现在Nogo-A中−/−组织。误差条表示SEM。E类Western blots显示，P15时所有三个KO小脑中MBP蛋白亚型均显著降低（50μg蛋白/车道）。在第35页，没有发现差异。比例尺：一个，B类，200微米。

Nogo-A视神经的发育−/−、MAG−/−和DOKO小鼠出现髓鞘减退

我们通过电子显微镜分析了视神经P15和P28的髓鞘形成(图4). 在P15，71±4%的WT轴突有髓鞘，而Nogo-A为28±2%−/−，MAG中为33±1%−/−，在DOKO小鼠中为21±2%(图4A–D，我)（平均值±SEM；N个= 3; *第页< 0.05, ***第页<0.001，方差分析）。在P28，所有组的有髓轴突密度均增加(图4E–H（E–H）)WT达到71±1%，Nogo-A达到63±4%−/−MAG中为63±2%−/−DOKO动物中为63±5%(图4我)（平均值±扫描电镜；N个= 3–4;第页>0.05，方差分析）。EM分析揭示的有髓轴突大而短暂的缺陷与上述少突胶质细胞分化缺陷一致。

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Nogo-A和MAG影响视神经轴突的髓鞘形成和生长。A–H在P15和P28，在KO视神经中段用电子显微镜检查轴突的髓鞘化。A–D，在P15，Nogo-A中检测到的有髓轴突少于WT神经−/−和MAG−/−视神经，在DOKO中更少。E–H（E–H），在P28，所有组的有髓轴突密度均增加。我，P15和P28有髓轴突百分比的定量(***第页< 0.001, *第页<0.05，方差分析；N个=3-4只动物/组）。在P15，每组测得的轴突数量在WT中为1178个轴突，在Nogo-A中为1873个轴突−/−MAG−/−中1737个轴突，DOKO中1543个轴突；第28页，WT中1549个轴突，Nogo-A中1869个轴轴突−/−，MAG中的1806个轴突−/−对DOKO中的1570个轴突进行了评估。J型在相同的样品中，测定了轴突管径的光谱。在P15，与WT小鼠相比，KO神经中的轴突直径分布转移到更小的轴突尺寸。K（K），Axon口径接近P28的WT值。误差条表示SEM。比例尺：A–H，3微米。

众所周知，髓鞘化可以控制正常动物轴突直径的生长(Colello等人，1994年;Cellerino等人，1997年). 为了确定轴突在我们的低髓鞘小鼠中是否也受到影响，我们在P15和P28评估了各组的轴突直径分布。在P15，三个KO组的轴突口径轮廓明显向较小的尺寸偏移(图4J型). 而WT轴突的平均直径为～0.80μm，Nogo-A的平均轴突直径为～0.61μm−/−和DOKO，MAG中为～0.67μm−/−小鼠，大小可达2.8μm。所有KO组在P15时的轴突口径与WT小鼠显著不同(*第页<0.05，方差分析）。在P28，KO和WT小鼠的轴突大小分布没有统计学差异(第页>0.05，方差分析）：Nogo-A的平均轴突直径为～0.7μm−/−DOKO为～0.75μm，MAG为～0.8μm−/−和WT视神经(图4K（K）). 有趣的是，与MAG的缺失相比，Nogo-A的缺失导致P15处轴突生长的减弱更强。

Nogo-A成熟的视神经−/−/MAG公司−/−双KO小鼠出现髓磷脂异常

在P28时，KO小鼠和WT动物的有髓轴突数量无法区分，但这并不意味着髓鞘结构正常形成。因此，我们分析了P28处KO和WT视神经的髓磷脂异常(图5). DOKO视神经显示不同类型的髓磷脂异常，如髓磷脂流出(图5B类，箭头），多个髓磷脂环(图5B类箭头所示），髓鞘未致密，轴突周围间隙细胞质缺乏或过多。这些异常的定量显示，DOKO的畸变明显多于WT视神经(图5D类) (*第页<0.05，方差分析）。有趣的是，Nogo-A的髓磷脂结构−/−轴突似乎与WT轴突没有区别，而MAG轴突−/−轴突表现出与DOKO轴突相似数量的异常(图5D类). 这表明，DOKO患者的髓鞘异常主要是由于MAG缺失所致。

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MAG中髓鞘结构出现异常−/−和DOKO，但不在Nogo-A−/−P28处的视神经。电子显微镜显示第28页WT和DOKO视神经中有髓轴突。A–C，与WT轴突相比(一个)，许多DOKO轴突(B类，C类)显示异常，如髓鞘流出(B类，箭头），多个髓鞘(B类，箭头），以及轴突周围的髓鞘压实缺陷(C类，箭头）。D类异常髓鞘轴突的定量包括盲目计数异常髓鞘外流、多髓鞘、髓鞘不紧密、轴突周围间隙细胞质缺乏或过剩。因此，WT中有692个轴突，Nogo-A中有532个轴轴突−/−，MAG中407个轴突−/−随机分析了3～4种不同视神经中DOKO的379个轴突。DOKO视神经异常率（37.9±5.6%）显著高于WT（17.5±3.7%）(*第页<0.05，方差分析）。然而，Nogo-A−/−（12.1±5.6%）和WT或MAG−/−（32.2±6.1%）和DOKO无统计学差异。这表明Nogo-A缺失不会影响髓磷脂结构，DOKO视神经异常升高主要归因于MAG缺失。误差条显示SEM。比例尺：一个，B类，2微米；C类，0.6微米。

Ranvier节点的形成

Ranvier淋巴结对有髓轴突的功能至关重要。它们的特点是电压门控钠通道密度很高，两侧被偏执片段中含有偏执蛋白/Caspr的带包围(Menegoz等人，1997年;Dupree等人，1999年). 美格−/−众所周知，小鼠在Ranvier淋巴结处的偏执蛋白和钠通道分布异常(Marcus等人，2002年). 当我们对P15 WT视神经切片进行偏执蛋白和钠通道染色时，典型的钠通道窄带两侧各有偏执蛋白阳性簇(图6一个). 偏执狂/钠通道三联体在Nogo-a中的外观和密度正常−/−视神经(图6B类). 相反，MAG−/−和DOKO小鼠表现出许多半结和单一偏执蛋白或钠通道簇(图6C类，D类). 节点、半节点和单一偏执狂的计数显示WT和Nogo-a的节点模式数量相似−/−并证实，在缺乏MAG的情况下，偏执蛋白和钠通道定位被破坏(图6E类) (**第页<0.01，方差分析）。DOKO神经介于WT/Nogo-A之间−/−和MAG−/−神经。这些结果表明，与MAG相比，Nogo-A在Ranvier节点的建立中不起核心作用。

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Nogo-A中Ranvier节点处偏执蛋白和钠通道的分布−/−、MAG−/−和DOKO视神经。A–D，在P15对视神经切片进行paranodin/Caspr（红色）和钠通道（NaCh；绿色）的双重染色。通过共焦显微镜，捕获并合并图像堆栈。一个WT视神经显示NaCh簇，两侧通常有两个妄想狂/Caspr标记的妄想狂。B类，在Nogo-A−/−神经，NaCh/偏执狂组织的模式与WT的模式无法区分。C类，D类相比之下，MAG−/−在较小程度上，DOKO小鼠通常表现出单独的偏执狂和NaCh簇。E类计算偏执型阳性成分在节点、半节点和单个偏执型中的分布。在MAG中−/−视神经，只有~11%的副结节完全组装(**第页<0.01，方差分析），而WT为～42%，Nogo-A为～47%−/−和～25%（DOKO）(*第页<0.05，方差分析）视神经。Paranodin/Caspr簇在MAG中更常见为单一偏执狂−/−（～65%）和DOKO（～52%）视神经，与WT（～38%）和Nogo-A相比−/−（～32%）动物。误差条表示SEM。比例尺：50 mm；16.7μm（插图）。

Nogo-A/MAG受体组分的发育时间进程和KO诱导的变化

最近的研究表明，Lingo-1是一种与Nogo-a和MAG结合蛋白NgR相关的膜蛋白，在神经元中(Lee等人，2007年)或胶质细胞(Mi等人，2005年)可对少突胶质细胞成熟起抑制作用。神经元与胶质Lingo-1在这一过程中的相对重要性尚不清楚。我们首先通过qRT-PCR观察了少突胶质细胞发育过程中Lingo-1在视神经、视网膜和小脑中的表达。P6后，WT视神经中的Lingo-1显著下调，这与少突胶质细胞分化开始的时间一致(图7一个). 视网膜中Lingo-1 mRNA的水平低于视神经，仅在P15后才下降。在小脑中，Lingo-1的表达在P10之前增加，在P15开始减少，在成人中表达较低(图7B类). 因此，与神经元（视网膜）相比，胶质细胞中Lingo-1的下调与少突胶质细胞成熟（视神经）的开始时间相一致。

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Lingo-1在WT和KO小鼠中的发育时间过程。一个用qRT-PCR方法评估无少突胶质细胞视网膜样品和无神经元细胞体、含少突胶质纤维细胞的视神经中Lingo-1 mRNA的时间进程。在视神经P6之后和视网膜P15之后，Lingo-1转录物的量下降。B类在小脑中，Lingo-1 mRNA在P10时达到峰值，然后下降到成人的低水平。在一个100%，视网膜水平P0；在里面B类，P10值。C类在P10，KO和WT小脑的Lingo-1 mRNA水平没有差异。所有qRT-PCR测量值均使用GAPDH作为内部参考标准进行归一化。误差条表示SEM。D类，通过蛋白质印迹分析，Lingo-1蛋白（100μg/泳道）的水平在两组之间是不可区分的。实验重复三次，每组三只动物。

然后，我们想确定Nogo-A和/或MAG的消除是否导致Lingo-1的补偿变化。qRT-PCR检测的Lingo-1 mRNA水平和Western blot检测的Lingo-1蛋白水平在Nogo-A组之间没有差异−/−、MAG−/−，或DOKO和WT小脑样本(图7C类，D类). 因此，Nogo-A和MAG缺乏动物少突胶质细胞成熟缺陷不太可能归因于Lingo-1。

NgR1是与Lingo-1相关的受体成分，MAG和Nogo66序列可以与之结合。在WT小脑中，NgR1mRNA水平从P6开始增加，在P15达到峰值，在成人中保持较高水平(图8一个). 在P10，突变体和野生型动物之间的NgR1 mRNA水平没有差异(图8B类). 然而，在P15和P35，蛋白质印迹分析显示MAG中的NgR1蛋白水平显著上调−/−和DOKO小脑，而Nogo-A−/−小鼠，NgR1与WT动物相比没有变化(图8C类). 密度定量显示MAG中的NgR1带−/−DOKO样品的强度是WT提取物的约1.7-2倍(图8D类). MAG中NgR1蛋白的特异性增加−/−DOKO组织表明，神经元中NgR1表达的调节是MAG依赖性和Nogo-A依赖性的。

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在无MAG但无Nogo-A的情况下，NgR1上调。一个，WT小鼠小脑中NgR1 mRNA水平的发展。B类、WT、Nogo-A之间P10 NgR1 mRNA水平的比较−/−、MAG−/−和DOKO。C类，Western blot显示MAG中NgR1蛋白上调−/−以及P15和P35小脑的DOKO样本（100μg蛋白质/车道）。Nogo-A没有变化−/−动物。D类NgR1条带的强度通过密度测定法进行量化，并归一化为GAPDH蛋白。突变体中NgR1的相对量以WT值的百分比表示（虚线）。每个条形图是用三种不同动物/组进行的三次重复实验的平均值（±SEM）。

Nogo-A和MAG可以绑定到NgR1(Fournier等人，2001年;刘等人，2002). 为了检查Nogo-A和MAG的缺失是否会导致其他分子的代偿性上调，我们观察了Nogo-AmRNA水平−/−、MAG−/−和DOKO小鼠。在Nogo-A−/−与WT水平相比，MAG表达降低了约23%(**第页<0.01，方差分析）。MAG在统计学上显著降低很可能是上述少突胶质细胞分化延迟的结果。此外，通过琼脂糖凝胶电泳分离MAG转录物表明，MAG的主要剪接版本从P6–P15视神经的L-MAG转换为成人视神经的S-MAG；对于WT和Nogo-a来说，这种切换是以类似的方式发生的−/−小鼠（未提供数据）。与Nogo-A的MAG降低相比−/−动物，在MAG中−/−小鼠Nogo-A的表达与WT对照组相同。这些测量结果表明，MAG或Nogo-A缺失不会诱导NgR1/Lingo-1的另一配体的补偿性上调，进一步说明Nogo-A和MAG在少突胶质细胞发育中发挥的不同功能。

讨论

我们的研究表明Nogo-A参与少突胶质细胞的发育体内Nogo-A在主要髓鞘蛋白MBP、PLP和CNP之前在视神经中表达。美格−/−Nogo-A公司−/−、和DOKO均在P15表现出少突胶质细胞分化延迟和严重的髓鞘形成不足。P28恢复视神经髓鞘减退。然而，MAG−/−和DOKO，但不是Nogo-A−/−动物的髓鞘结构和Ranvier淋巴结异常。MAG中Nogo受体亚单位NgR1上调−/−和DOKO，但不在Nogo-A−/−组织。

Nogo-A表达参与少突胶质细胞分化

Nogo-A在视神经中的表达比PLP和MBP等组成性髓鞘蛋白的表达要早，因此可能是少突胶质细胞分化和髓鞘形成的重要调节因子。与MAG相反，在OPC定植视神经之前，Nogo-A不仅由少突胶质细胞表达，还由视网膜神经节细胞轴突表达。因此，轴突和/或胶质Nogo-A可以通过轴突到少突胶质细胞或少突胶质与少突胶质之间的相互作用影响少突胶质的成熟。后一种机制得到了最近一项研究的支持，该研究表明，针对Nogo-a的中和抗体阻止了在缺乏神经元的情况下培养的少突胶质细胞的分化(Zhao等人，2007年). Nogo-A是否通过胶质细胞与胶质细胞的相互作用参与白质少突胶质细胞的空间分布和结构尚待研究。OPC在MAG中的迁移没有改变−/−或Nogo-A−/−视神经，尽管先前研究表明，当Nogo-A/B/C蛋白被切除时，大脑皮层中神经元前体的迁移受到影响(Mingorance-Le Meur等人，2007年).

Nogo-A和MAG缺失对髓鞘形成的损害不同

Nogo-A的髓磷脂形成明显延迟−/−和MAG−/−小鼠，在P15处的DOKO小鼠更是如此。轴突直径随之减小，可能是由于髓鞘缺损所致(Colello等人，1994年). 有趣的是，我们观察到MAG之间存在明显的结构差异−/−和Nogo-A−/−小鼠，尤其是MAG中出现的Ranvier淋巴结形成缺陷−/−但不在Nogo-A−/−老鼠。与MAG相比，DOKO中Nogo-A和MAG的联合缺失没有增加髓鞘结构或Ranvier结节的异常−/−并且MAG或Nogo-A缺失没有诱导其他蛋白质的相互上调。所有这些结果表明，这两种髓磷脂蛋白在髓磷脂形成中发挥着不同的功能。Nogo-A似乎主要参与少突胶质细胞的分化，而MAG似乎与髓磷脂结构的形成和轴胶质接触有关。

KO组织P15处观察到的髓鞘减退在P28处几乎完全消失。先前的研究表明，中枢神经系统具有强大的能力来补偿重要结构髓鞘蛋白的缺失或OPC在出生后第一周内部分消融：在缺乏主要髓鞘蛋白PLP的情况下，少突胶质细胞仍然在中枢神经系统中聚集致密的髓鞘(Klugmann等人，1997年). 如果少突胶质细胞在出生后第一周内被清除，新生成的少突胶质可以在第45天完全弥补髓鞘形成缺陷(科林等人，2004年). 鉴于中枢神经系统对髓鞘缺陷具有显著的代偿能力，在Nogo-a中发现正常比例的髓鞘轴突并不奇怪−/−，磁−/−和DOKO视神经。研究Nogo-A的这种代偿效应涉及哪些分子途径将很有意思−/−和MAG−/−动物。

MAG和Nogo-A激活不同的分子途径

MAG中髓鞘缺损的差异−/−和Nogo-A−/−动物们指出了不同的潜在分子机制。例如，Nogo-A中PLP、MBP和CNP的mRNA水平显著降低−/−P10处的小脑，但不在相应的MAG中−/−组织。令人惊讶的是，在同一年龄段，DOKO的髓磷脂蛋白转录物水平与MAG相似−/−老鼠。这表明，尽管没有Nogo-A，MAG缺失可能激活代偿机制，使髓鞘蛋白转录物达到正常水平。事实上，MAG中NgR1的上调可以观察到MAG去除的这种代偿性变化−/−和DOKO，但不在Nogo-A−/−这尤其令人惊讶，因为NgR1是MAG和Nogo-a的共同结合伙伴。此前有报道称，MAG消融导致N-CAM过度表达，这可以部分补偿MAG的粘附功能缺失(Montag等人，1994年). Nogo-A中的NgR1可能没有增加−/−小鼠因为Nogo-B上调(Simonen等人，2003年). Nogo-B还包含NgR1结合区Nogo66(Fournier等人，2001年;Simonen等人，2003年). 然而，这表明年轻Nogo-A中的髓磷脂表型−/−小鼠可能由NgR1依赖性信号通路引起。除了刺激NgR1的Nogo66片段外，Nogo-a中间部分的一个独特结构域已被证明通过与一种尚未表征的受体相互作用，强烈抑制细胞扩散和轴突生长(Oertle等人，2003年). MAG中NgR1的变化−/−小鼠提示NgR1可能是髓鞘形成中MAG功能所必需的。MAG触发的细胞内信号是酪氨酸激酶Fyn的磷酸化增加，从而驱动MBP表达(Umemori等人，1999年). 然而，MAG可以与轴突膜上的各种分子相互作用，如NgR1或NgR2、神经节苷脂和OMgp(Chen等人，2006年;劳伦等人，2007年). 下游细胞内介质可能涉及Rho家族的小GTPase，如RhoA、Cdc42和Rac(Thurnherr等人，2006年;Zhao等人，2007年). 有趣的是，NgR1相互作用的膜蛋白Lingo-1已被证明抑制少突胶质细胞分化(Mi等人，2005年). 本研究中观察到的NgR1/Lingo-1复合物如何以及是否作为Nogo-a和MAG介导的少突胶质细胞效应的关键受体，尚待详细分析。

Nogo-A在脱髓鞘疾病中的临床相关性

我们的研究结果表明，Nogo-A在少突胶质细胞分化中起着重要作用，这与髓磷脂修复相关[例如，在实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）、多发性硬化或中枢神经系统损伤后]。Nogo-A或针对Nogo-A的抗体的缺失被证明可以阻断或抑制EAE症状的出现，可能是通过减少局部炎症过程(Karnezis等人，2004年). 我们的结果表明，在设计治疗方案时，应考虑Nogo-A对少突胶质细胞分化的积极影响；Nogo-A中和可能在炎症过程的早期或CNS创伤后的轴突再生中起到有益的作用，但在后期对髓鞘修复过程可能起到负面作用。

脚注

这项工作得到了瑞士国家科学基金会31-63633.00号拨款的支持。我们感谢科尼·伊姆桑和奥利·温曼提供的技术援助。我们感谢提供抗体和组织的同事和实验室。

工具书类

  • Caroni P，Schwab ME。大鼠中枢髓磷脂的两种膜蛋白组分对神经突生长和成纤维细胞扩散具有抑制作用。细胞生物学杂志。1988;106:1281–1288. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Cellerino A、Carroll P、Thoenen H、Barde YA。在缺乏脑源性神经营养因子的小鼠中，视网膜神经节细胞轴突尺寸减小和髓鞘减退。分子细胞神经科学。1997;9:397–408.[公共医学][谷歌学者]
  • Chen MS、Huber AB、van der Haar ME、Frank M、Schnell L、Spillmann AA、Christ F、Schwab ME。Nogo-A是一种髓磷脂相关神经突起生长抑制剂和单克隆抗体IN-1的抗原。自然。2000年；403:434–439.[公共医学][谷歌学者]
  • Chen Y，Aulia S，Tang BL.髓磷脂相关糖蛋白介导的中枢神经系统病理生理信号。摩尔神经生物学。2006;34:81–91.[公共医学][谷歌学者]
  • Colello RJ，Pott U，Schwab ME。少突胶质细胞和髓鞘在发育中的大鼠视网膜功能丧失途径中对轴突成熟的作用。神经科学杂志。1994;14:2594–2605. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Colello RJ，Devey LR，Imperato E，Pott U。大鼠视神经少突胶质细胞分化的年代学：启动中枢神经髓鞘形成的信号步骤的证据。神经科学杂志。1995;15:7665–7672. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Collin L、Usiello A、Erbs E、Mathis C、Borrelli E。运动训练可补偿少突胶质细胞消融导致的小脑功能障碍。美国国家科学院院刊。2004;101:325–330. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Dimou L、Schnell L、Montani L、Duncan C、Simonen M、Schneider R、Liebscher T、Gullo M、Schwab ME。Nogo-A缺乏小鼠揭示了轴突再生的应变依赖性差异。神经科学杂志。2006;26:5591–5603. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Dupree JL、Girault JA、Popko B.轴突-胶质相互作用调节轴突偏执蛋白的定位。细胞生物学杂志。1999;147:1145–1152. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Foran DR，Peterson AC。MBP-Lac Z转基因揭示了小鼠中枢神经系统中的髓磷脂获取。神经科学杂志。1992;12：4890–4897。 [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Fournier AE，GrandPre T，Strittmatter SM。识别介导Nogo-66抑制轴突再生的受体。自然。2001;409:341–346.[公共医学][谷歌学者]
  • Griffiths I、Klugmann M、Anderson T、Yool D、Thomson C、Schwab MH、Schneider A、Zimmermann F、McCulloch M、Nadon N、Nave KA。缺乏髓磷脂主要蛋白脂质的小鼠轴索肿胀和变性。科学。1998;280:1610–1613.[公共医学][谷歌学者]
  • Huber AB，Weinmann O，Brösamle C，Oertle T，Schwab ME。发育中和成年大鼠以及中枢神经系统损伤后Nogo mRNA和蛋白的表达模式。神经科学杂志。2002年；22:3553–3567. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Karnezis T、Mandemakers W、McQualter JL、Zheng B、Ho PP、Jordan KA、Murray BM、Barres B、Tessier-Lavigne M、Bernard CC。神经突起生长抑制剂Nogo A参与自身免疫介导的脱髓鞘。自然神经科学。2004;7:736–744.[公共医学][谷歌学者]
  • Kessaris N、Fogarty M、Iannarelli P、Grist M、Wegner M、Richardson WD。前脑少突胶质细胞的竞争波和胚胎血统的出生后消除。自然神经科学。2006;9:173–179. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Klugmann M、Schwab MH、Pühlhofer A、Schneider A、Zimmermann F、Griffiths IR、Nave KA。在缺乏蛋白脂质蛋白的情况下组装中枢神经系统髓鞘。神经元。1997;18:59–70.[公共医学][谷歌学者]
  • Laurén J，Hu F，Chin J，Liao J，Airaksinen MS，Strittmatter SM。神经元Nogo-66受体家族成员髓磷脂配体复合物的表征。生物化学杂志。2007;282：5715–5725。 [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Lee X，Yang Z，Shao Z，Rosenberg SS，Levesque M，Pepinsky RB，Qiu M，Miller RH，Chan JR，Mi S.NGF调节轴突LINGO-1的表达，以抑制少突胶质细胞分化和髓鞘形成。神经科学杂志。2007;27:220–225. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Li C、Tropak MB、Gerlai R、Clapoff S、Abramow-Newerly W、Trapp B、Peterson A、Roder J.不含髓磷脂相关糖蛋白的髓鞘化。自然。1994;369:747–750.[公共医学][谷歌学者]
  • Liu BP，Fournier A，GrandPréT，Strittmatter SM。作为Nogo-66受体功能配体的髓磷脂相关糖蛋白。科学。2002年；297:1190–1193.[公共医学][谷歌学者]
  • Lu QR、Yuk D、Alberta JA、Zhu Z、Pawlitzky I、Chan J、McMahon AP、Stiles CD、Rowitch DH。哺乳动物中枢神经系统中编码bHLH蛋白的声波刺猬调节少突胶质细胞谱系基因。神经元。2000年；25:317–329.[公共医学][谷歌学者]
  • Marcus J、Dupree JL、Popko B.髓磷脂相关糖蛋白和髓磷脂半乳糖脂稳定发展轴-胶质相互作用。细胞生物学杂志。2002年；156:567–577. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Menegoz M、Gaspar P、Le Bert M、Galvez T、Burgaya F、Palfrey C、Ezan P、Arnos F、Girault JA。Paranodin，一种神经偏执膜糖蛋白。神经元。1997;19:319–331.[公共医学][谷歌学者]
  • Mi S、Lee X、Shao Z、Thill G、Ji B、Relton J、Levesque M、Allaire N、Perrin S、Sands B、Crowell T、Cate RL、McCoy JM、Pepinsky RB。LINGO-1是Nogo-66受体/p75信号复合物的组成部分。自然神经科学。2004;7:221–228.[公共医学][谷歌学者]
  • Mi S、Miller RH、Lee X、Scott ML、Shulag-Morskaya S、Shao Z、Chang J、Thill G、Levesque M、Zhang M、Hession C、Sah D、Trapp B、He Z、Jung V、McCoy JM、Pepinsky RB。LINGO-1通过少突胶质细胞负性调节髓鞘形成。自然神经科学。2005;8:745–751.[公共医学][谷歌学者]
  • Mingorance-Le Meur A、Zheng B、Soriano E、Del Rio JA。髓磷脂相关抑制剂Nogo-A参与早期皮质发育和神经元成熟。大脑皮层。2007;17:17.[公共医学][谷歌学者]
  • 蒙塔格·D、吉斯·KP、巴茨·U、马提尼·R、朗·Y、布吕特曼·H、卡尔蒂加桑·J、克什纳·DA、温特格斯特·ES、海军KA。缺乏髓磷脂相关糖蛋白的小鼠表现出髓磷脂的细微异常。神经元。1994;13：229–246。[公共医学][谷歌学者]
  • Oertle T、van der Haar ME、Bandtlow CE、Robeva A、Burfeind P、Buss A、Huber AB、Simonen M、Schnell L、Brösamle C、Kaupmann K、Vallon R、Schwab ME。Nogo-A通过三个离散区域抑制神经突起生长和细胞扩散。神经科学杂志。2003;23:5393–5406. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Owens GC，Bunge RP。感染表达髓磷脂相关糖蛋白反义RNA的重组逆转录病毒的雪旺细胞不形成髓磷脂。神经元。1991;7:565–575.[公共医学][谷歌学者]
  • Owens GC、Boyd CJ、Bunge RP、Salzer JL。重组髓鞘相关糖蛋白在原代雪旺细胞中的表达通过髓鞘化雪旺细胞促进轴突的初始投资。细胞生物学杂志。1990;111:1171–1182. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Popko B、Puckett C、Lai E、Shine HD、Readhead C、Takahashi N、Hunt SW、3rd、Sidman RL、Hood L.髓磷脂缺乏小鼠：髓磷脂碱性蛋白的表达和不同髓磷脂水平小鼠的产生。单元格。1987;48:713–721.[公共医学][谷歌学者]
  • Schwab ME。Nogo和轴突再生。神经生物电流。2004;14:118–124.[公共医学][谷歌学者]
  • Shao Z、Browning JL、Lee X、Scott ML、Shulga-Morskaya S、Allaire N、Thill G、Levesque M、Sah D、McCoy JM、Murray B、Jung V、Pepinsky RB、Mi S.TAJ/TROY，TNF受体孤儿家族成员，结合Nogo-66受体1并调节轴突再生。神经元。2005;45:353–359.[公共医学][谷歌学者]
  • Simonen M、Pedersen V、Weinmann O、Schnell L、Buss A、Ledermann B、Christ F、Sansig G、van der Putten H、Schwab ME。髓磷脂相关生长抑制因子Nogo-A的系统性缺失可改善脊髓损伤后的再生和塑性反应。神经元。2003;38:201–211.[公共医学][谷歌学者]
  • Small RK，Riddle P，Noble M。少突胶质细胞-2型星形胶质细胞祖细胞迁移到发育中的大鼠视神经的证据。自然。1987;328:155–157.[公共医学][谷歌学者]
  • Sugimoto Y、Taniguchi M、Yagi T、Akagi Y、Nojyo Y、Tamamaki N。通过发育中的视神经分泌线索指导胶质前体细胞迁移。发展。2001;128:3321–3330.[公共医学][谷歌学者]
  • Thurnherr T、Benninger Y、Wu X、Chrostek A、Krause SM、Nave KA、Franklin RJ、Brakebusch C、Suter U、Relvas JB。Cdc42和Rac1信号在中枢神经系统髓鞘的正确形成中都是必需的，并发挥协同作用。神经科学杂志。2006;26:10110–10119. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Ueda H，Levine JM，Miller RH，Trapp BD。大鼠视神经少突胶质细胞在缺乏可存活视网膜神经节细胞轴突的情况下发育。细胞生物学杂志。1999;146:1365–1374. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Umemori H、Kadowaki Y、Hirosawa K、Yoshida Y、Hironaka K、Okano H、Yamamoto T。通过Fyn酪氨酸激酶刺激髓鞘形成髓鞘碱性蛋白基因转录。神经科学杂志。1999;19:1393–1397. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Wang KC、Kim JA、Sivasankaran R、Segal R、He Z.P75作为Nogo、MAG和OMgp的共同受体与Nogo受体相互作用。自然。2002a年；420:74–78.[公共医学][谷歌学者]
  • Wang X，Chun SJ，Treloar H，Vartanian T，Greer CA，Strittmatter SM。Nogo-A和Nogo-66受体蛋白在轴突髓鞘和突触接触部位的定位。神经科学杂志。2002年b；22:5505–5515. [PMC免费文章][公共医学][谷歌学者]
  • Yamashita T、Fujitani M、Yamagishi S、Hata K、Mimura F。多种信号通过Nogo受体复合体调节轴突再生。摩尔神经生物学。2005;32:105–111.[公共医学][谷歌学者]
  • Zhao XH，Jin WL，Ju G.关于LINGO-1和Rho GTPases参与Nogo-A调节少突胶质前体细胞分化的体外研究。分子细胞神经科学。2007;36:260–269.[公共医学][谷歌学者]
  • 周清，王S，安德森·DJ。一个新的少突胶质细胞谱系特异性碱性螺旋-环-螺旋转录因子家族的鉴定。神经元。2000年；25:331–343.[公共医学][谷歌学者]
文章来自神经科学杂志由以下人员提供神经科学学会