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图1

图1.来源:在先天性促性腺激素低促性腺功能减退患者中发现FGF17、IL17RD、DUSP6、SPRY4和FLRT3突变。

CHH患者FGF-网络相关基因港口突变
(A) FGF途径的简化示意图包括CHH个体中确定的突变频率。KAL1公司以及FLRT3(飞行3),FGF信号的编码增强子,以绿色显示;IL17路DUSP6型、和喷洒4,编码抑制剂,为红色;高铁6ST1编码HS-修饰酶,为蓝色;FGF8公司FGF17型,编码配体,为黄色;FGFR1号机组编码受体FGFR1的为灰色。
(B) 每个基因突变的nIHH和KS个体数量。

Hichem Miraoui等人,《人类遗传学杂志》。2013年5月2日;92(5):725-743.
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图5

图5来源:在先天性促性腺激素低促性腺功能减退症患者中发现FGF17、IL17RD、DUSP6、SPRY4和FLRT3突变。

FGF-网络相关基因参与CHH的寡基因结构
(A) CHH影响家系的寡基因遗传。先证者用箭头和“P”表示。可用的基因型显示在每个个体的下方。符号中的数字表示其他同级的数量。正方形描绘男性,圆形描绘女性。
(B) FGF网络相关基因和/或已知CHH突变的其他基因中具有单等位基因、双等位基因和寡基因突变的个体百分比。
(C) CHH患者和对照组中突变的等位基因数量。

Hichem Miraoui等人,《人类遗传学杂志》。2013年5月2日;92(5):725-743。
三。
图2

图2.来源:在先天性促性腺激素低促性腺功能减退患者中发现FGF17、IL17RD、DUSP6、SPRY4和FLRT3突变。

蛋白质-蛋白质相互作用的集成FGF信号网络和与人类生殖相关的基因表达数据
IBAS鉴定的与FGF8和FGFR1显著相互作用的蛋白质显示在该网络中。根据InWeb的高质量蛋白质相互作用数据,17个蛋白质由于与FGFR1-FGF8受体-配体对的相互作用模式,具有基因组范围内显著的IBAS评分。此外,在发育过程中,有五种蛋白质(FGF17、IL17RD、DUSP6、SPRY4和FLRT3)与FGF8和FGFR1同步表达。IL17RD和FGF17是InWeb中12507个蛋白质中得分最高的候选蛋白。

Hichem Miraoui等人,《人类遗传学杂志》。2013年5月2日;92(5):725-743.
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图4

图4.来源:在先天性促性腺激素低促性腺功能减退症患者中发现FGF17、IL17RD、DUSP6、SPRY4和FLRT3突变。

FGF17型CHH患者的突变
(A) 在转染FGFR1和FGF荧光素酶报告子的细胞中,增加WT FGF17的剂量会产生典型的乙状结肠剂量-反应曲线(蓝色),这被FGFR1c p.Leu342Ser改变所抵消。
(B) FGF17结构域示意图和确定蚀变位置。使用以下缩写:SP,信号肽。
(C) 在FGF8b-FGFR2c晶体结构(蛋白质数据库ID 2FDB)中观察到的FGF8b(橙色)与D2和FGFR2c的D2-D3连接体(绿色)之间的界面描述了FGF8bArg177(R177)与FGFR2cD2的Asp247(D247)之间的氢键,以及FGF8a与FGFRArg251(R251)之间的氢键。
(D) FGF8bβ-三叶核心的疏水内部说明了Ile108(I108)、Met151(M151)、Val65(V65)、Val67(V67)、Val99(V99)(Ile99,FGF17中的I99)、Leu86(L86)、Ile73(I73)和Phe129(F129)之间的疏水相互作用。
(E) FGF17结合的SPR分析重量(橙色)和FGF17p.Arg177他的(绿色)至FGFR1c外结构域。FGF17型重量和FGF17p.Arg177他的固定在CM5传感器芯片上,并传递不同浓度的FGFR1c胞外区。FGF17的完整剂量-反应曲线重量-FGFR1c和FGF17p.Arg177他的-生成FGFR1c结合。为了进行比较,显示了在每个配体上注射800 nM FGFR1c溶液后获得的传感器图的叠加。
(F) FGF荧光素酶报告分析表明,p.Arg177His(绿色)和p.Ile108Thr(红色)FGF17的改变损害了配体的生物活性。缩写如下:ns,不重要;a,p<0.05。
(G) FGFR1c p.Arg250Gln和FGF17 p.Ile108Thr功能丧失改变以相加方式起作用。荧光素酶活性绘制为三次独立实验的平均值±SEM(数据归一化为WT),并按中所述拟合剂量-反应曲线。使用以下缩写:a,p<0.05。
(H)17楼表达于Fgf8型-依赖的方式。Fgf17型E10.5 WT的WM-ISH(面板1和3)和Fgf8型纯合性低形态(Fgf8型−/−; 面板2和4)图中显示了胚胎。679nt地高辛标记17楼使用核糖探针。面板1和2显示胚胎头部的矢状图;比例尺代表500 mm。面板3和4显示胚胎头部的腹视图;比例尺代表250 mm。箭头的用法如下:实心箭头,中脑-中脑交界处;虚线箭头,连合板;箭头、内侧嗅板(GnRH神经元出现的地方)。

Hichem Miraoui等人,《人类遗传学杂志》。2013年5月2日;92(5):725-743.
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图3

图3来源:在先天性促性腺激素低促性腺功能减退症患者中发现FGF17、IL17RD、DUSP6、SPRY4和FLRT3突变。

IL17路CHH患者的突变
(A) IL17RD域结构示意图和蚀变位置。缩写如下:SP,信号肽;免疫球蛋白样;TM,跨膜;SEFIR、SEF/IL-17R结构域;*,纯合子。
(B) KS先证者家系中存在突变IL17路“F”表示系列号。每个家族的先证者用箭头和“P”表示。可用基因型在每个个体下方表示。符号中的数字表示其他同级的数量。正方形描绘男性,圆形描绘女性。
(C) WT和IL17RD改变的转录报告分析。用编码cDNA和WT的FGFR1c或改变的IL17RD与AP-1萤光素酶报告基因一起瞬时共转染HEK293细胞,然后用FGF8刺激。绘制的是在四胞胎中进行的五个独立实验的平均值±SEM;结果已经被标准化为EV处理的细胞(100%)。p.Lys131Thr、p.Pro306Ser和p.Ser468Leu改变的蛋白质在本试验中表现出功能丧失。p.Tyr379Cys和p.Pro577Gln改变的蛋白质也表现出抑制活性降低,这具有临界显著性(p=0.06)。p.Lys162Arg和p.Ala735Val与本试验中的WT相似。Δ326,一个缺失细胞内结构域(与FGFR1相互作用的结构域)的截短IL17RD作为阴性对照。缩写如下:a,p<0.05;b、 p=0.06;和ns,不显著。
(D) E10.5小鼠鼻部IL17RD免疫反应性(红色)和核标记物DAPI(蓝色)的宽视野荧光图像(矢状图)显示IL17RD定位于嗅板上皮(左侧)。比例尺代表100μm(左侧面板)和10μm(右侧面板)。白色框中的区域在右侧面板中被放大。缩写如下:MES,间充质;Opd,嗅板(背侧);Opv,嗅板(腹侧);c、 尾侧;d、 背侧;r、 嘴侧;v,腹侧;和Sef,类似于FGF(IL17RD的前身)的表达。
(E) E12.5小鼠腹侧前脑WT(左)和纯合子(左)IL17RD免疫反应(红色)和核标记物DAPI(蓝色)的宽视野荧光图像Fgf8型低形态(右)胚胎说明IL17RD在Fgf8型发育不全的胚胎。IL17RD免疫反应在WT胚胎(上插图)的中隔区和中脑-中脑交界处高,在嗅觉上皮几乎检测不到,在发育中的鼻区迁移的GnRH神经元(绿色)位于嗅觉上皮(下插图)。除插图外,所有图像的比例尺代表100μm,插图中比例尺表示50μm。缩写如下:cb,小脑;GE,神经节隆起;SA,间隔区;嗅上皮;和Sef,类似于FGF(IL17RD的前身)的表达。

Hichem Miraoui等人,《人类遗传学杂志》。2013年5月2日;92(5):725-743.

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