报告

细胞外小泡（EV）几乎由所有活细胞产生，现在被认为是细胞-细胞通信的重要系统。从免疫学到海洋生物学，生物和医学不同领域的电动汽车已经发布了大量数据。融合会议主办的人类传染病外显子会议于2020年3月5日至3月8日在巴哈马举行。会议重点讨论了电动汽车最重要的方面之一，即电动汽车在人类传染病中的作用。

此次会议吸引了来自美国、法国、德国、比利时、加拿大、葡萄牙、西班牙、瑞典和黎巴嫩等多个国家的电动汽车专家的关注。

与会者介绍了他们最近在4天内获得的数据，并就电动汽车在各种人类疾病中的作用进行了长期而富有成果的讨论。在一份简短的会议报告中，不可能描述所有重要贡献。以下是一些关键发现的介绍。有关更完整和全面的主题和发言者名单，请参阅会议日程。

会议联合主席在介绍性发言中Drs.（博士）。 Fatah Kashanchi（乔治梅森大学）和Leonid Margolis（美国国立卫生研究院）强调小型会议的重要作用，使科学家在会议期间和空闲时间都能进行密切互动。此类会议对于该领域的进展和制定其挑战至关重要。当前的挑战是区分大小、组成和生物成因不同的各种EV在人类传染病中的作用。

Clotilde Théry博士和她的同事居里研究所在巴黎，开发了多种技术，以按尺寸分离电动汽车并分析其组成。通过先进的统计分析，他们开发了一种无偏倚的蛋白质组分析方法，以识别人类T淋巴瘤细胞系释放的病毒或sEV亚型的新的特异性标记。交互式数据库定义了具有相似特征的蛋白质组，表明它们在同一类EV中释放。利用这项技术，作者鉴定了不同类别的EV，它们在HIV感染的情况下携带不同的表面蛋白。特别是，作者确定了病毒颗粒中包含的两种细胞衍生蛋白质和一种对感染修饰的非病毒sEV特异的蛋白质

EV在病毒感染尤其是HIV-1感染中的作用是其他几篇演讲的重点。电动汽车所载货物分子的重要性在主题演讲中得到了强调Yoel Sadovsky博士（匹兹堡大学）他专注于胎盘，胎盘在母婴沟通中起着关键作用。细胞外囊泡（EVs）调控性运输的发现为我们对局部和远处胎盘-母体-胎儿通讯的理解增加了一个新的维度。他和他的同事发现，构成母胎界面前线的人类胎盘滋养层细胞对多种病毒的感染具有抵抗力，尤其是HIV-1。通过转移含有C19MC miRNAs的EV，非滋养细胞可以部分获得这种耐药性。该小组目前的工作集中于非滋养细胞对滋养细胞外泌体的摄取机制，他们发现大胞饮作用和网格蛋白介导的内吞作用起着关键作用。新发现的途径构成了抵抗病毒病原体的防御机制，并可能在怀孕期间具有其他稳态功能。

Michael Bukrinsky博士（GWU医学和健康科学学院）提供的数据表明，含有Nef的细胞外囊泡（exNef）会损害未感染细胞的细胞胆固醇代谢。这可能是导致HIV相关共病发病机制的共同因素。他提出了exNef在降低ABCA1丰度、抑制胆固醇流出、上调脂筏、诱导炎症反应和影响神经髓鞘形成方面的作用的证据。他还讨论了治疗方法的潜在影响。

博士。 法塔赫·卡珊奇 （乔治梅森大学）讨论了来自6种RNA病毒（包括HIV-1、HTLV-1、裂谷热、寨卡病毒和埃博拉病毒等）的病毒EV如何对受体细胞造成损伤。EV包含病毒体部分，包括非编码RNA、病毒蛋白（来自早期区域）和包装所需的结构蛋白。这种去调节机制与自噬有关，并与EV释放交叉。他还讨论了EV在病毒释放之前首先从受感染的细胞释放出来的问题，这使得受感染的未受感染细胞能够承受随后的病毒感染。

影响HIV感染的EV不仅可能由宿主细胞产生，也可能由微生物群产生。这在一次演示中得到了证明博士。 罗杰斯·帕洛米诺来自Margolis博士的实验室（尼日/尼日）在他们的工作中，他们研究了阴道乳酸杆菌对HIV-1传播的保护作用。他们发现，这些细菌释放的EVs会改变病毒Env，从而抑制HIV-1在细胞系和体外使用的阴道组织中的传染性。Ramin Hakami博士 （乔治·梅森大学）利用两种模式生物讨论了宿主外泌体在感染过程中的作用；鼠疫耶尔森菌（Yp）和伪鼻疽伯克霍尔德菌（Bp）替代种泰国双歧杆菌（Bt）。他指出，Yp和Bp分别导致新出现的人类疾病鼠疫和类鼻疽，并且没有许可的疫苗或可用于这两种疾病的高效治疗药物。他的实验室发现，Yp或Bt感染细胞（指定为EXi）释放的外显子使幼稚受体细胞对感染具有强烈的抵抗力。在这两种情况下，EXi都会导致原始人类单核细胞分化为巨噬细胞，并引发特定促炎细胞因子的强烈释放，而当遇到细菌时，这些细胞因子又会导致细菌清除率增加。特定的宿主信号分子受到EXi的强烈调节，包括p38、Jak2和ALK，这表明EXi通过启动远处的幼稚单核细胞来启动免疫反应来保护宿主，从而提高对感染的抵抗力。

另一个有趣的演讲是关于小核糖核酸病毒，由Esther Nolte-t Hoen博士（乌得勒支大学）她介绍了EV中非包膜（裸）病毒包装的数据。她的团队研究的病毒属于小核糖核酸病毒科，该科包含许多人类和动物病原体。对于这些病毒，EV在分泌的病毒颗粒周围提供宿主衍生膜，可以改变病毒与宿主的相互作用。他们最近利用脑心肌炎病毒（EMCV）表明，病毒感染可诱导多种EV亚群的定时释放。这些EV亚群在生物生成途径、病毒粒子和宿主分子的包装以及传播感染的可能性方面存在差异。在她的演讲中，诺尔特·霍恩展示了一项后续研究的数据，其中讨论了病毒和宿主因子在EV介导的病毒释放中的作用。为此，他们使用高分辨率流式细胞术、western blot分析和终点滴定法对感染野生型和突变型病毒期间产生的EV进行了量化和表征。他们的数据支持分泌性自噬在EV封闭病毒颗粒释放中的作用，并暗示特定的病毒安全蛋白在这一过程中发挥作用。此外，EV与疱疹病毒感染有关玛丽亚·卡拉姆沃基博士来自堪萨斯大学医学中心她证明，单纯疱疹病毒1型（HSV-1）感染会影响受感染细胞释放EV的货物和功能，并通过激活抗病毒反应对HSV-1感染产生负面影响。该团队将四spanin CD63阳性的EV与运输（ESCRT）机械所需的内体分选复合物成分阳性的EVs分离。这些囊泡的功能特征表明，它们对HSV-1感染具有相反的作用，但显性作用似乎是负面的。总的来说，他们确定了EV的优势种群和HSV-1感染期间产生的其他亚种群，并有迹象表明它们的潜在功能。

电动汽车可视化方面的一项重大突破描述为纪尧姆·范·尼尔博士 （法国卫生与医学研究所）他们与DM Pegtel教授（UMC，阿姆斯特丹）团队中的Frederik Verweij一起开发了外泌体光学报告子（包括CD63 pHorion），可以使用活体显微镜检测外泌体分泌。他们将这种CD63-pHfluorin工具转移到斑马鱼模型上，利用活体显微镜、电子显微镜技术和蛋白质组体外分析相结合，生成一个合适的脊椎动物模型，以跟踪外泌体从生产地到最终目的地的变化。他们在保持紧凑脊椎动物模型系统的整体成像尺度的同时，在单囊泡尺度上研究了胞外体的生物发生、转移、捕获、摄取和命运。这项研究的结果支持了外源体在营养物质输送中的意外作用。这是第一个研究单个EV释放、转移和功能的模型，将体内成像与亚细胞“清除”机制相结合。有了这些新的活体方法，现在可以打开外泌体动态的“黑匣子”，并通过体内外泌物介导的活体追踪细胞间通讯。

还有一整节课专门讨论ZIKA病毒感染和EV。Schols博士小组的数据（来自 比利时鲁汶大学雷加医学研究所）由介绍安东尼奥斯·菲卡塔斯他们分离了ZIKV感染的人脑微血管内皮细胞衍生的EVs。Transwell阵列系统显示，这些EV能够穿过内皮细胞并进一步感染其他脑相关细胞（U87-胶质母细胞瘤）。他们确定了两种乳糖神经酰胺和一种磷脂酰丝氨酸，可以用作潜在的生物标记物。博士。 扬·芒奇的德国乌尔姆大学（德国）及其同事就EV在寨卡病毒性传播中的作用提供了有趣的数据。他们分析了精液对来自肛门生殖器区域的细胞和组织的ZIKV感染的影响。在精液存在的情况下，ZIKV和其他黄病毒的感染被有效抑制。他们表明，精液可以阻止ZIKV粘附到靶细胞上，而细胞外囊泡负责这种抗ZIKV活性。他们的发现表明，EV和病毒粒子在靶细胞表面与相同的附着因子竞争。因此，精液中的EV数量可能会超过阻止性病毒传播的寨卡病毒。

博士。 贾尼斯·穆勒讨论了人类唾液如何影响ZIKV感染性。他们发现，汇集唾液的生理浓度依赖于剂量，通过阻止病毒附着到靶细胞上，抑制了猴和人类细胞的ZIKV感染。唾液的抗ZIKV活性并没有被煮沸而消失，这表明抗病毒因子不是一种蛋白质。相反，他们发现唾液中纯化的细胞外小泡（EV）抑制了ZIKV感染。唾液EVs（saEVs）表达典型的EV标记物，并在唾液中天然存在的浓度下防止ZIKV附着和感染靶细胞。唾液的抗ZIKV活性保持不变，但抑制程度因供体而异。他们的发现提供了一个似是而非的解释，解释了为什么没有记录到ZIKV通过唾液传播，即通过深吻传播，并建立了一种新型的口腔先天免疫防御机制来对抗病毒病原体。

博士。 Gurudutt N.Pendyala公司重点介绍了最近关于母体免疫激活（MIA）的影响以及EV在ZIKA诱导的暴露后代神经发育缺陷中的潜在致病作用的研究。这些研究的初步数据表明，MIA后代从出生时就表现出较高的大脑炎症状态，随后导致突触发育受损。此外，炎症状态的增加也导致MIA后代脑源性细胞外囊泡（BDE）的大小增加。此外，对RNA测序数据的分析确定了不同的脑源性胞外囊泡miRNAs负责调节与脑发育相关的关键功能通路，这些通路在MIA后代中受影响更大。总的来说，这些研究表明，孕期母体对ZIKV感染的免疫反应在影响暴露后代的神经预后方面起着重要作用。

萨拉·约克介绍了David Meckes博士实验室的研究FSU医学院本研究的主要目的是评估EV如何被寨卡病毒感染所修饰，并研究EV生物发生蛋白中的tetraspanin在寨卡病毒侵染中的作用。在这里，人们发现寨卡病毒感染导致EV数量大幅增加，其大小和密度发生了变化，寨卡病毒修饰的EV能够感染对人类发病机制和传播至关重要的细胞类型。此外，在感染期间，内源性CD63被招募到病毒质体的核心，寨卡衣壳的存在和定位根据细胞CD63水平而改变。这些结果表明，富含EV的四spanin CD63调节感染后EV和寨卡病毒基因组和衣壳的释放，从而突出了寨卡病毒传播的潜在新机制，并证明了EV生物发生和转运蛋白在寨卡病毒感染调节中的作用。

Siddapa N.Byraredy博士来自内布拉斯加州大学医学中心在主题为“糖和胞外囊泡在调节寨卡病毒与宿主病毒相互作用中的作用”的演讲中，他分享了数据，表明寨卡病毒使用包膜（E）糖蛋白与宿主细胞受体相互作用以促进进入。他还对来自不同细胞的不同菌株的ZIKV E进行了分析，发现这些蛋白质被高度异质性的寡甘露糖、杂交和复合N-聚糖广泛修饰。此外，发现宿主细胞表面聚糖与ZIKV E的糖基特征密切相关。他还提供了证据，证明ZIKV影响从胎盘细胞分离的EV的数量，但不影响EV的大小。随后的miRNA分析揭示了差异表达，GO分析确定了代谢过程、细胞内信号转导、MAP信号、钙信号和趋化因子信号通路，共同表明关键脑发育功能发生了显著变化。

Rüdiger Gro博士对他们之前关于在体外有效抑制寨卡病毒和登革热病毒等黄病毒感染的精液EVs的工作进行了跟踪。他们现在已经使用切向流过滤和结合液尺寸排除色谱法（TFF/BE-SEC）从大量复杂来源液体中纯化了EV，以从精浆、唾液和阴道灌洗液中分离EV。纳米粒子跟踪分析和透射电子显微镜显示，从唾液和阴道灌洗中分离的EVs的平均直径为180-190 nm，而精浆衍生的EVs稍小（直径约140 nm）。此外，唾液衍生的EV含有高水平的CD14，这是一种LPS结合蛋白，具有口腔免疫功能，而从精液和阴道灌洗液中纯化的EV则无法检测到CD14。最后，从所有三种来源纯化的EV剂量依赖性地抑制体外寨卡病毒（MR766）和HIV-1（R5-tropic NL4-3）的感染，尽管唾液和阴道灌洗EV比精液EV更有效。这些发现可能进一步解释某些病毒在涉及体液的途径中传播（缺乏）的原因，并指导新的治疗策略。

还有一个专门讨论HIV相关神经认知障碍的会议，通常称为NeuroHIV。Shilpa Buch博士讨论了她关于HIV Tat和吗啡介导的血脑屏障损伤的一些最新发现。她讨论了突触脊髓炎损伤和胶质细胞功能受损是如何成为NeuroHIV的重要表型和相关因素的。在cART存在的情况下，接受治疗的患者的大脑中仍然存在Tat蛋白，这是HIV-1感染者（即类阿片）滥用药物的共同发病率。他们在这里显示的数据表明，星形胶质细胞暴露于HIV Tat导致EV货物中几个miRNAs的表达和释放增加，特别是富含脑的miR-7，海马神经元摄取后，通过下调神经原2（NLGN2）导致抑制性突触丢失-抑制性突触的已知关键调节器。吗啡暴露导致ADEV中miR-138的诱导和释放，而这些miR-138又被小胶质细胞吸收，通过与内胚体toll样受体TLR-7结合而导致小胶质细胞活化。总的来说，他们得出的结论是，HIV Tat和吗啡-ADEV一起可以导致神经元损伤、小胶质细胞活化受损和吞噬细胞增多，并导致脑周细胞迁移和血脑屏障破坏，从而增加NeuroHIV的神经炎症负担。

Sowmya Yelamanchili博士还讨论了甲基苯丙胺（Meth）在HIV-相关神经认知障碍（HAND）中的作用。甲基苯丙胺和相关的苯丙胺化合物是最常用的非法药物之一，它们是强有力的精神刺激剂。他们发现，HIV感染者和Meth处理的单核细胞衍生巨噬细胞（MDM）释放的EV增强了巨噬细胞中合胞体的形成和HIV发病机制。她的实验室从三组HIV感染的MDM中分离出EV，分别用Meth或cART或两者治疗，并用这些EV治疗细胞。使用免疫组织化学和共焦成像技术，他们发现Meth处理的MDM释放的EV增强了合胞体形成和多核细胞。Western blot分析显示，EV中释放了ICAM1，Meth增强了其释放。他们得出结论，接触Meth会增强合胞体的形成、HIV发病机制和HIV感染细胞的毒性。

胡国库博士显示了接触吗啡和HIV Tat的星形胶质细胞如何被神经元吸收，从而导致神经元损伤。他们还通过吗啡刺激的星形胶质细胞衍生EV中声波刺猬（SHH）蛋白的机制，确定了EV及其货物在药物耐受和成瘾发展中的作用。此外，含有SHH的吗啡-ADEV在体外和吗啡给药小鼠的星形胶质细胞中激活了SHH信号。重要的是，抑制EV释放或初级纤毛可阻止C57BL/6小鼠的吗啡耐受，结论是星形胶质细胞SHH通路激活的自分泌机制可能与吗啡耐受有关。

Susmta Sil博士共同研究星形胶质细胞衍生EVs在神经元损伤中的作用以及HIF-1α-lncRNA BACE-1AS轴在HIV-1相关神经认知障碍（HAND）中的作用。该实验室先前的研究已确定HIF-1α-lncRNA BACE-1AS轴在HIV1-Tat介导的星形胶质细胞中毒性淀粉样蛋白形式上调中的作用。由于HIF-1α是Tat介导淀粉样蛋白生成的上游调节因子，因此推测阻断HIF-1β可以减轻神经元损伤。评估神经元对Tat刺激星形胶质细胞衍生EVs（ADEVs）的摄取，以及突触损伤的程度。暴露于携带有毒淀粉样蛋白的Tat-ADEV的大鼠海马神经元显示树突棘和兴奋性突触蛋白PSD95减少，同时抑制性突触蛋白质Gephryn增加。此外，星形细胞HIF-1α的沉默不仅减少了ADEVs及其淀粉样物质的释放，而且改善了神经元损伤。因此，这些研究证明了毒性淀粉样物质在ADEV中的作用，ADEV可能导致神经元损伤和突触改变。

HIV-1相关药物成瘾的话题被进一步讨论Norman Haughey博士从约翰霍普金斯大学医学院尽管这种对药物成瘾易感性增强的确切机制尚不清楚，但有证据表明，慢性炎症与对成瘾的敏感性增加有关。然而，炎症可能导致成瘾行为的机制尚不清楚。在此，探讨了EVs在介导炎症和吗啡成瘾途径之间的串扰中的作用。用IL-1β刺激的原代大鼠星形胶质细胞释放EVs，EVs含有131个不同的miRNAs，其中10个增加，17个减少。对17个减少的miRNAs进行查询后发现，miR-106b、miR-218a和miR-328a定位于吗啡成瘾途径，生物信息学分析预测这三个miRNAs靶向吗啡成瘾者途径中的多个基因。其中两个miRNA靶点在与OPRM1-3′-UTR或KCNJ3-3'-UTR荧光素酶报告载体共转染的HEK293T细胞中得到验证，并模拟miR-218a和miR-328a，或干扰microRNA模拟物。在暴露于EVs剂量反应的皮层神经元中，发现与ADEV-CR相比，暴露于ADEV-IL-1β的细胞中OPRM1、KCNJ3、DRD1和GABBR2 mRNA和蛋白水平增加。这些发现表明，ADEV-CR携带的miRNAs长期抑制与成瘾相关的神经回路中关键蛋白的表达，并且ADEV-IL-1β中miRNA载体的修饰释放了这种慢性抑制，增强了对阿片类药物反应的神经回路的活性。

在另一个演示中，Eva Poveda博士强调了在没有HIV复制的情况下，识别持续免疫激活和炎症驱动因素的重要性，如EV和mtDNA（一种危险相关的分子模式DAMP）。本文提供了一项研究的数据，该研究旨在评估具有不同免疫学和病毒学状态的HIV感染患者以及未感染HIV的对照组的血浆中表达CD9的特定EV亚群的特征。结果表明，HIV感染患者中血小板衍生EV大量增加。此外，对线粒体和循环无细胞线粒体DNA的分析证实了EV中存在线粒体，并揭示了HIV感染患者中循环无细胞的线粒体DNA（ccf-mtDNA）水平较高，与EV总数相关。

苏珊娜·加布里尔森博士介绍了正在进行的利用树突状细胞来源的外泌体诱导抗原特异性免疫反应以治疗癌症的研究数据。这些研究的数据表明，外泌体需要携带整个蛋白质，而不仅仅是肽/MHC复合物，才能在体内诱导强烈的T细胞反应，此外，需要B细胞激活才能诱导T细胞对外泌物的强烈反应。在B16黑色素瘤模型中对异基因外体的测试表明，异基因外体能像同基因外体一样有效诱导免疫反应。此外，用CD1d配体α-半乳糖基神经酰胺装载外泌体，刺激NKT细胞产生干扰素-γ，进一步增强抗原特异性T和B细胞反应。这些结果突出了抗原提呈细胞的外泌体作为潜在癌症免疫治疗载体的潜力。

这次会议还有一个更为关键的活动，其中包括一个模拟演习，演示如何为NIH和其他拨款机构编写特定的Aim页面。本次会议向所有参与者开放，并创造了一个高度智慧的环境，分享与胞外囊泡和感染相关的赠款写作的相关想法。

我们很高兴欢迎来自Particle Metrix的Nazar Filonov，并感谢他作为银牌赞助商在会议上做出的贡献。

多亏了ASEMV（美国外显子和微泡学会）的史蒂夫·古尔德（Steve Gould）的慷慨捐助，我们也有机会向那些在会议上的发言和贡献突出的初级研究人员颁发3 x 250美元的简短演讲奖。恭喜你Monica Abou Harb（佛罗里达州立大学）,Rüdiger Groß（乌尔姆大学医学中心）和玛丽亚·卡拉姆沃基（喀纳斯大学医学中心）赢得这些奖项。

这次会议由Fusion组织，为期六个月。他们在向组织者和参与者传达相关信息方面做得很好，并在物流方面不懈努力。他们还慷慨资助学生和首席研究员的旅行以及注册包。在会议期间，我们的联络组织者（Amy Johnson女士）非常关注并设法将会议日程调整到会议当天。食宿和膳食的后勤都很好。会议地点棒极了，许多与会者不断称赞科学会场、包罗万象的酒店环境和美丽的巴哈马群岛。最后，随着新冠肺炎疫情的爆发，会议结束，融合组织者在与会者离开时对他们的需求进行了仔细关注。最后，我强烈建议与Fusion合作组织顶级科学会议，这与美国的Gordon会议不相上下。

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