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.1996年3月1日;271(9):4627-31.
doi:10.1074/jbc.271.94627。

蛋白激酶Calpha含有两个活化剂结合位点,以相反的亲和力结合佛波酯和二酰甘油

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蛋白激酶Calpha含有两个活化剂结合位点,以相反的亲和力结合佛波酯和二酰甘油

S J斯莱特等。 生物化学杂志. .
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摘要

基于与佛波酯活化蛋白激酶C(PKC)相比,二酰基甘油的酶性质存在显著差异,我们最近提出,这些化合物诱导的活化可能不是等效的(Slater,S.J.,Kelly,M.B.,Taddeo,F.J.,Rubin,E.,and Stubbs,C.D.(1994)J.Biol。化学。269, 17160-17165). 在本研究中,直接证据表明佛波酯和二酰甘油同时与PKCα结合。利用荧光佛波酯sapintoxin-D(SAPD)的新型结合分析,获得了高亲和力和低亲和力两个位点的证据。因此,SAPD的结合和激活剂量反应曲线都是双S型的,这也被观察到由常用的佛波酯4β-12-O-十四烷酰基佛波-13-乙酸酯(TPA)进行的剂量依赖性激活。TPA去除了高亲和力SAPD结合,也竞争低亲和力位点。与TPA相比,sn-1,2-二油酰基甘油(DAG)抑制SAPD的低亲和力结合,而与高亲和力位点的结合显著增强。再次与TPA和DAG对比,强效PKC激活剂bryostatin-I(B-I)抑制SAPD与其高亲和力位点的结合,而低亲和力结合不受影响。基于这些发现,提出了PKC激活模型,其中一个激活物与低亲和力位点的结合变构地促进第二个激活物和高亲和力位点结合,从而提高活性水平。总的来说,结果直接证明PKCalpha包含两个不同的结合位点,每个激活剂的亲和力不同,顺序分别为:DAG>佛波酯>B-I和B-I>佛波醇酯>DAG。

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