Simplified method to perform CLARITY imaging

doi:10.1186/1750-1326-9-19

.2014年5月26日9:19。

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清晰成像的简化方法

叶卡捷琳娜·波古兹卡娅, 德米特里·阿塔莫诺夫, 阿纳斯塔西亚·博尔沙科娃, 奥尔加·弗拉索娃, 伊利亚·贝兹普鲁兹凡尼¹

附属公司

PMID： 24885504
预防性维修识别码：项目经理4049387
内政部： 10.1186/1750-1326-9-19

清晰成像的简化方法

叶卡捷琳娜·波古兹卡娅等。摩尔神经变性剂. 2014.

.2014年5月26日9:19。

doi:10.1186/1750-1326-9-19。

作者

叶卡捷琳娜·波古兹卡娅, 德米特里·阿塔莫诺夫, 阿纳斯塔西亚·博尔沙科娃, 奥尔加·弗拉索娃, 伊利亚·贝兹普鲁兹凡尼¹

附属

¹俄罗斯圣彼得堡国立理工大学医学物理系，圣彼得堡195251。ilya.bezprozvanny@utsouthwestern.edu。

PMID： 24885504
预防性维修识别码：下午049387
内政部： 10.1186/1750-1326-9-19

摘要

背景：成像方法被广泛用于了解大脑和其他生物物体的结构。然而，由于组织的光散射，光显微镜对样品的穿透受到限制。最近开发了许多方法来解决这个问题。在一种方法（SeeDB）中，描述了用于澄清脑部样本以进行成像的简单程序。然而，这种方法与免疫染色方法不兼容，因为SeeDB预处理组织对抗体不具有渗透性。另一种用于清除脑组织的技术（CLARITY）针对免疫化学进行了优化，但该方法在技术上比SeeDB要求更高。

结果：在这里，我们报告了脑样本成像的优化方案（CLARITY2）。我们简化并缩短了原始协议。水凝胶固定后，我们将脑组织切割成1-1.5 mm厚的冠状切片。与原始方案相比，这一额外步骤使我们能够加快并简化清除、染色和成像步骤。我们在M Thy1-GFP系小鼠大脑成像实验和抗突触后蛋白PSD-95和纹状体特异性蛋白DARPP32抗体免疫染色实验中验证了改进方案。

结论：对原始CLARITY协议进行了优化和简化。修改后的CLARITY2协议的应用可能对从事神经生物学和发育生物学的广泛科学家有用。

PubMed免责声明

数字

图1
**简化了清晰度清除程序。（A）**被动清除术前（底部）和后（顶部）的水凝胶包埋冠状切片。**（B）**显微镜盖玻璃上的冠状切片，用于成像。**（C）**纹状体区域的共焦图像与DARPP32（绿色）和PSD-95（红色）抗体共同染色。**（D）**用PSD-95抗体染色的海马区共焦图像（红色）。面板上的比例尺为150微米C-D类.

图2
**M系Thy1-GFP小鼠海马神经元的共焦图像。（A）**海马神经结构，20倍物镜。比例尺为300微米。**（B）**单个GFP阳性神经元的三维重建，60倍物镜。

图3
**M Thy1-GFP系小鼠纹状体和海马神经元的共焦图像。（A、B）**显示GFP阳性神经元（绿色）和PSD95染色（红色）的三维重建。使用20x物镜。面板上显示了不同的大脑区域**（A）**和**（B）**面板上的比例尺为100微米A类和B类.

图4
**来自M Thy1-GFP系小鼠的海马神经元的双光子成像。**三维神经元图像重建的单帧（附加文件1）。使用20x物镜。比例尺为150微米。

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