跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https公司

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2013年10月1日；73(19):6068-79.
doi:10.1158/0008-5472.CAN-13-0882。 Epub 2013年8月1日。

ERG是前列腺癌Wnt/LEF1信号的关键调节因子

吴龙涛 1, 乔纳森·赵, 金正恩（Jung Kim）, 红剑金, 王存余, 余金丹（Jindan Yu）
附属公司

ERG是前列腺癌Wnt/LEF1信号的关键调节因子

吴龙涛等。 癌症研究. .

摘要

染色体易位将雄激素应答的TMPRSS2启动子与ETS家族转录因子ERG并列，导致约50%前列腺癌ERG异常上调。迄今为止的研究表明，ERG在诱导前列腺癌致癌特性中具有重要作用。然而，其作用的分子机制尚不完全清楚。这里，我们报告ERG通过多种机制激活Wnt/LEF1信号级联。ERG与各种Wnt基因的启动子结合，直接增加配体表达。因此，ERG过度表达增加了细胞中活性β-catenin水平，并增强了TCF/LEF1荧光素酶报告活性，WNT-3A抑制剂IWP-2可部分阻断该活性。最重要的是，我们的数据将LEF1定义为ERG的直接靶点，并且LEF1抑制完全消除了ERG诱导的Wnt信号传导和靶基因表达。此外，功能分析表明，Wnt/LEF1激活现象与ERG在诱导细胞生长、上皮-间充质转化和细胞侵袭方面的激活现象相似，而阻断Wnt信号则减弱了这些作用。同时，LEF1的表达在ERG-high人类前列腺癌中显著上调。总之，本研究提供了前列腺癌中Wnt信号激活的重要机制，并将LEF1指定为ERG诱导肿瘤发生的关键介质。Wnt/LEF1通路可能为融合阳性前列腺癌患者的治疗提供新的靶点。

PubMed免责声明

利益冲突声明

潜在利益冲突的披露:

未披露潜在利益冲突

数字

图1
图1。ERG调节前列腺癌Wnt通路基因
A类Wnt途径基因启动子周围ERG结合位点的热图。如前所述，在VCaP细胞中进行ERG和AR ChIP-Seq（22）。热图显示Wnt途径基因转录起始位点周围的ChIP-Seq读取强度。基因按ChIP-Seq峰的高度排序。B类.典型Wnt通路基因启动子附近的ERG占有率。ERG ChIP-Seq在VCaP细胞中进行，如A类染色体位置显示在顶部，基因结构显示在底部。黑色箭头表示转录起始位置和方向。C类ERG直接结合Wnt配体基因启动子。在VCaP细胞中进行ERG和IgGChIP。使用基因特异性引物进行ChIP-qPCR。PSA和TMPRSS2是ERG的已知靶基因。误差条表示三次实验，平均值±平均值标准误差（SEM）。D类ERG敲除后Wnt配体表达减少。VCaP细胞感染ERG shRNA慢病毒，并选择稳定敲除的克隆。使用qRT-PCR分析基因表达，并将其归一化为GAPDH。E类蛋白质印迹证实ERG被siRNA敲低。用siRNA双链靶向对照萤光素酶或ERG基因转染VCaP细胞。F类Wnt通路基因丰富，可在ERG敲除后下调。VCaP控制（siCtrl）和ERG敲除（siERG）细胞D类表达芯片分析。GESA用于确定siCtrl和siERG细胞之间Wnt通路基因的表达是否存在显著差异。
图2
图2。ERG直接诱导Wnt配体基因表达
A类异位ERG与各种Wnt配体基因的启动子结合。用表达lacZ对照或ERG基因的腺病毒感染LNCaP细胞，然后使用抗ERG抗体通过ChIP进行分析。使用启动子特异性引物进行ChIP-qPCR。误差条表示三次试验，平均值±SEM。B–C类异位ERG诱导Wnt配体基因表达。在LNCaP中进行QRT-PCR(B类)或22Rv1(C类)细胞感染表达lacZ或ERG的腺病毒。先前显示，ERG抑制PSA和TMPRSS2，ERG诱导PLAT和PLAU。D类异位ERG增加WNT3A蛋白。对感染lacZ或ERG表达腺病毒的LNCaP细胞进行Western blot。AR是一种控制基因，先前已被ERG抑制（22）。GAPDH是装载控制。E类.ERG诱导Wnt信号。用WNT3A条件培养基（CM）处理22Rv1前列腺癌细胞和/或转染ERG，以及SuperTOPFlash荧光素酶报告子构建物和对照Renilla表达质粒。转染后48小时检测荧光素酶活性，并根据Renilla内部对照值进行标准化。误差条表示三次试验，平均值±SEM。F类ERG敲除抑制Wnt信号。用WNT3A CM和/或ERG敲除处理VCaP细胞。对细胞进行SuperTOPFlash荧光素酶活性分析。G公司ERG诱导的Wnt信号可以被Wnt抑制剂IWP-2部分阻断。HEK293T细胞按中所述进行处理E类在存在或不存在WNT抑制剂IWP-2的情况下，分析荧光素酶活性。
图3
图3。ERG增加活性β-连环蛋白前列腺癌
A类ERG过度表达可增加活性β-catenin。用ERG或β-catenin质粒转染HEK293T细胞。western blot分析测定总β-连环蛋白和活性β-连环素水平。B类ERG敲除降低活性β-catenin水平。用小RNA慢病毒对VCaP细胞进行ERG敲除以产生稳定的细胞。用活性β-catenin抗体进行western印迹分析细胞。C类ERG过度表达诱导AKT和GSK-3β磷酸化。免疫印迹法分析稳定表达对照或ERG基因的前列腺细胞系。D–E型ERG和β-catenin协同诱导Wnt信号传导。HEK293吨(D类)或22Rv1(E类)用ERG和/或β-catenin以及SuperTOPFlash荧光素酶报告基因构建体和对照Renilla表达质粒转染细胞。转染后48小时检测荧光素酶活性，并根据Renilla内部对照值进行标准化。误差条表示三次试验，平均值±SEM。F类.AXIN2受ERG上调。前列腺细胞系（包括BPH1、RWPE和22Rv1）感染ERG表达结构，并选择稳定的过度表达。采用QRT-PCR检测转录水平。G公司.AXIN2在ERG敲除后下调。在VCaP细胞中使用shRNA慢病毒产生稳定的ERG敲除，然后进行菌落选择。
图4
图4。ERG直接调节LEF1的表达和功能
A类.ERG在LEF1基因启动子附近的占有率。如图1B所示，在VCaP细胞中进行ERG ChIP-Seq。B类异位ERG与LEF1启动子结合。用ERG腺病毒感染LNCaP细胞4个剂量以上，并用抗ERG抗体进行ChIP分析。使用LEF1启动子引物进行ChIP-qPCR。误差条表示三次试验，平均值±SEM。C类ERG过度表达后LEF1表达上调。LNCaP细胞是感染细胞ERG腺病毒，如B类AR之前被ERG抑制，GAPDH是一种负荷控制。D类ERG过表达诱导LEF1蛋白。前列腺癌细胞株感染对照组和ERG腺病毒48小时，然后进行western blotting分析。E类ERG敲除降低LEF1蛋白水平。用shRNA慢病毒对VCaP细胞进行ERG敲除。选择稳定的克隆并用western blotting分析细胞。F类.dnLEF1取消ERG诱导的SuperTOPFlash活动。22Rv1前列腺癌细胞转染ERG、β-catenin和dnLEF1以及荧光素酶报告体。在转染后48小时对细胞进行萤光素酶测定。G公司ERG诱导的基因在LEF1敲除后显著下调。对ERG过表达稳定的LNCaP细胞进行siRNA介导的靶向敲除控制或LEF1基因。使用微阵列分析这些对照（siCtrl）或LEF1（siLEF1）敲除细胞的全局基因表达。ERG诱导的基因来源于微阵列数据，该数据描述了ERG过表达控制或稳定的LNCaP细胞。GSEA用于确定ERG诱导的基因在siCtrl和siLEF1 LNCaP细胞之间是否存在显著差异和一致表达。
图5
图5。WNT/LEF1信号通路介导ERG的致癌特性
A类IWP-2部分阻断ERG诱导的细胞生长。用Wnt抑制剂IWP-2处理稳定对照和表达ERG的LNCaP细胞。在治疗后0、24、48和72小时，使用WST-1分析监测细胞生长。B类LEF1基因敲除可消除ERG诱导的细胞生长。用对照和LEF1靶向siRNA转染稳定对照和ERG表达的LNCaP细胞。转染后0、24、48和72 h，对细胞进行WST-1生长试验。C–D类ERG和β-catenin诱导前列腺癌细胞侵袭。使用Boyden Chamber分析法对稳定过度表达对照、ERG或β-catenin基因的LNCaP细胞进行细胞侵袭分析。对侵入基底膜的细胞进行染色，显示出一个具有代表性的区域(C类). 用560nm吸光度比色法定量入侵细胞的数量(D类).E–F.dnLEF1可消除ERG诱导的细胞侵袭。如上所述，对稳定过度表达对照、LEF1、ERG、ERG和dnLEF1的DU145细胞进行细胞侵袭分析。
图6
图6。ERG和LEF1诱导EMT并在前列腺癌中失调
A类ERG过度表达诱导前列腺上皮细胞EMT。显示了稳定对照和ERG表达的DU145细胞的相控显微镜图像。ERG表达细胞失去了细胞间的接触，呈纺锤状。B类ERG和LEF1降低上皮标记的表达。对ERG和LEF1过度表达的对照细胞和DU145细胞进行E-cadherin和Claudin-1的QRT-PCR分析。C类ERG和LEF1抑制上皮标记的表达。western blot分析稳定对照、ERG表达和LEF1表达的DU145细胞。D类ERG-和ERG+前列腺癌标本的分类。根据ERG基因的表达水平，将472例原发性前列腺癌组织分为ERG-组和ERG+组（52）。E类LEF1在ERG+前列腺癌中显著上调。箱线图分析显示ERG和LEF1在ERG-和ERG+前列腺癌标本中的表达水平。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Rubin MA，Maher CA，Chinnaiyan AM。前列腺癌常见基因重排。临床肿瘤学杂志。2011;29:3659–68.-项目管理委员会-公共医学
    1. Tomlins SA、Rhodes DR、Perner S、Dhanasekaran SM、Mehra R、Sun XW等。前列腺癌中TMPRSS2和ETS转录因子基因的反复融合。科学。2005;310:644–8.-公共医学
    1. Carver BS、Tran J、Chen Z、Carracedo-Perez A、Alimonti A、Nardella C等。ETS重排与前列腺癌发病。自然。2009;457:E1。讨论E2–3。-项目管理委员会-公共医学
    1. Lin C，Yang L，Tanasa B，Hutt K，Ju BG，Ohgi K，等。核受体诱导的染色体邻近性和DNA断裂是癌症特异性易位的基础。单元格。2009;139:1069–83.-项目管理委员会-公共医学
    1. Haffner MC、Aryee MJ、Toubaji A、Esopi DM、Albadine R、Gurel B等。雄激素诱导的TOP2B介导的双链断裂和前列腺癌基因重排。自然遗传学。2010;42:668–75.-项目管理委员会-公共医学

出版物类型

MeSH术语