跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

点政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2012年6月29日；13(7):638-44.
doi:10.1038/embor.2012.74。

突变型p53相互作用组将nardilysin鉴定为p53R273H特异性结合伙伴，促进侵袭

辛西娅·R·科菲尔 1, 帕特里夏·A·J·穆勒, Hue Kian哦, 苏亚特·彭·尼奥, 凯莉·霍格, 赤方卓, 凯伦·沃斯登, 大卫·P·莱恩, 沃尔特·布莱克斯托克, 贾扬塔·古纳拉特内
附属公司

突变型p53相互作用组将nardilysin鉴定为促进侵袭的p53R273H特异性结合伴侣

辛西娅·科菲尔等。 EMBO代表. .

摘要

肿瘤细胞的侵袭性取决于细胞形状、极性和迁移的变化。突变型p53诱导小鼠肿瘤转移增强，过度表达p53R273H的人类细胞极性异常，侵袭性增加，表明突变型p5 3在致癌过程中的“功能增强”。我们假设p53R273H与控制极性、迁移或侵袭的突变型p53特异性结合伴侣相互作用。在这里，我们使用细胞培养中氨基酸的稳定同位素标记和定量质谱分析p53R273H相互作用组，并确定至少15个新的潜在突变p53特异性结合伙伴。p53R273H与其中一种蛋白-纳地赖氨酸（NRD1）的相互作用促进了对肝素结合表皮生长因子样生长因子的侵袭性反应，该生长因子依赖于p53R173H，但不需要Rab偶联蛋白或p63。因此，先进的蛋白质组学允许检测p53驱动的侵袭的新机制。

PubMed免责声明

利益冲突声明

提交人声明他们没有利益冲突。

数字

图1
图1
使用SILAC鉴定NRD1为p53R273H特异性相互作用体。(A类)在三重标记SILAC实验中，H1299 p53-null细胞在含有三种不同稳定同位素的培养基中生长，然后分别瞬时转染载体wt-p53或p53R273H cDNA。Western blot显示以GAPDH作为负荷控制的全细胞裂解物p53水平。(B类)wt-p53与p53R273H免疫沉淀中的差异蛋白质鉴定。根据免疫沉淀后相应的蛋白质折叠变化（SILAC比率）绘制总肽强度分布图。红色数据点表示SILAC比率非常显著(P（P）<1 × 10−11)，黄色(P（P）<0.0001），浅蓝色(P（P）<0.05），深蓝色代表1:1非特异性相互作用蛋白的主要群体(P（P）>0.05）。最右边的那些数据点代表那些优先与p53R273H相互作用的蛋白质，置信水平最高，而左边的那些蛋白质在wt-p53样本中增加。(C类)显示相对丰度与质量电荷比的代表性质谱(米/z)来自三标记免疫沉淀实验的NRD1 SILAC肽对。来自p53R273H（重标记培养基）的肽用红色表示，而来自wt-p53和载体控制的肽分别用紫色和蓝色圆圈表示。(D类)对瞬时转染的H1299细胞进行免疫沉淀和western blot分析后检测NRD1，仅使用载体（左车道）、wt-p53（中车道）或p53R273H（右车道）。下部面板显示与所示抗体孵育的全细胞裂解物。(电子)通过p53R273H特异性免疫沉淀和western blot分析从表达内源性突变p53蛋白或转染所示突变p53 cDNA的H1299的人类肿瘤细胞裂解液中检测NRD1。p53R273H表达的H1299细胞中p53分子量较高是由于存在FLAG和HIS标签。cDNA，互补DNA；GAPDH，甘油醛-3-磷酸脱氢酶；IB，免疫印迹；免疫沉淀；NRD1，nardilysin；SILAC，细胞培养中氨基酸的稳定同位素标记；五、 H1299对照；wt，野生型。
图2
图2
突变型p53和NRD1依赖性侵袭。(A类)用非靶向对照siRNA或NRD1 siRNA处理H1299对照（V）和稳定p53R273H表达细胞的Western blot。NRD1水平以GCN5作为负荷对照。(B类,C类)在三维侵袭研究中，p53阳性对照（ctr，蓝色）和p53R273H（红色）表达的H1299被评估为侵袭超过30 μm通过基质胶纤连蛋白基质向HB–EGF(B类)或EGF(C类)在有或无NRD1 siRNA的情况下。用对照siRNA转染的对照细胞的侵袭力设置为1。数值为三个独立实验的九个重复的平均值±标准偏差*P（P）=2.8E−4**P（P）=7.1E−5***P（P）=4.4E−3（学生的T型-测试）。(D类)用所示突变p53 cDNA或空载体（V）瞬时转染H1299细胞的Western blot。(电子和F类)相对（相对）侵入的评估与小组内相似B类朝向HB–EGF(电子)或EGF(F类)使用瞬时转染有所示突变p53 cDNA或空载体（设置为1）的H1299细胞。数值为三个独立实验的九个重复的平均值±标准偏差*P（P）=6.0E−3**P（P）=7.7E−4***P（P）=7.1E−3****P（P）=8.7E−4（学生的T型-测试）。cDNA，互补DNA；HB–EGF、肝素结合表皮生长因子样生长因子；NRD1，nardilysin；siRNA，短干扰RNA。
图3
图3
内源性突变p53和NRD1侵袭。(A类)用指示的siRNA处理U251细胞的Western blot。NRD1和p53水平以β-肌动蛋白作为负荷对照。(B类)在三维侵袭研究中，使用指示的siRNA处理U251，并如图2B所示评估侵袭。用对照（ctr）siRNA1处理的U251细胞的侵袭率设置为1。数值为三个独立实验的九个重复的平均值±标准偏差*P（P）=2.3E−5**P（P）=2.7E−8***P（P）=1.0E−8****P（P）=3.6E−8（学生的T型-测试）。(C类)用指示的siRNA处理MDA MB231细胞的Western blot。NRD1和p53的水平以β-actin作为负荷对照。(D类)对于三维侵袭研究，MDA MB231用指示的siRNA处理，并评估其侵袭程度是否超过30 μm通过Matrigel-fibronectin基质朝向FBS。侵入细胞的百分比超过30 μm通过矩阵表示。数值为三个独立实验的九个重复的平均值±标准偏差*P（P）=2.1E−4（学生的T型-测试）。(电子)用指示的siRNA处理MDA MB231，并通过共焦显微照片评估其侵袭程度是否超过30 μm通过Matrigel-fibronectin基质朝向HB–EGF、HB–EGF+FBS、FBS单独或无引诱剂。红色虚线表示30 微米。胎牛血清；HB–EGF、肝素结合-表皮生长因子样生长因子；NRD1，nardilysin；siRNA，短干扰RNA。
图4
图4
p63和Rab偶联蛋白（RCP）依赖和独立侵袭。(A类)用非靶向控制siRNA（设置为1）或p63 siRNA处理的H1299 p53完整细胞，通过定量逆转录-PCR分析确定p63 mRNA的相对量。数值为三个独立实验的平均值±标准误差*P（P）=1.2E−6（学生的T型-测试）。(B类)对于三维侵袭研究，使用非靶向控制（ctr）siRNA（设置为1）或p63 siRNA（如图2B所示）处理H1299 p53完整细胞，并评估其作为化学引诱剂对HB–EGF的侵袭情况。数值为三个独立实验的九个重复的平均值±标准偏差*P（P）=5.0E−4（学生的T型-测试）。(C类)用非靶向对照siRNA或RCP siRNA处理H1299对照（V）和稳定p53R273H表达细胞的Western blot。RCP水平以β-actin作为负荷对照。(D类)对于三维侵袭研究，在存在或不存在RCP siRNA的情况下，评估p53无效对照（蓝色）和表达p53R273H（红色）的H1299对HB–EGF的侵袭，如图2B所示。数值为三个独立实验的九个重复的平均值±s.e.m*P（P）=1.3E−3（学生的T型-测试）。HB–EGF、肝素结合-表皮生长因子样生长因子；siRNA，短干扰RNA。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

  • 突变型p53和p62/SQSTM1之间的交叉对话通过促进细胞粘附蛋白的降解来增加癌细胞的迁移。
    Mukherjee S、Maddalena M、LüY、Martinez S、Nataraj NB、Noronha A、Sinha S、Teng K、Cohen-Kaplan V、Ziv T、Arandkar S、Hassin O、Chatterjee R、Pirona AC、Shreberk-Shaked M、Gershoni A、Aylon Y、Elazar Z、Yarden Y、Schramek D、Oren M。 Mukherjee S等人。 美国国家科学院院刊2022年4月26日；119（17）：e2119644119。doi:10.1073/pnas.2119644119。Epub 2022年4月19日。 美国国家科学院院刊，2022年。 PMID：35439056 免费PMC文章。
  • 突变型p53通过促进整合素循环来驱动侵袭。
    穆勒PA、卡斯维尔PT、多伊尔B、伊瓦尼基议员、Tan EH、Karim S、Lukashchuk N、Gillespie DA、Ludwig RL、Gosselin P、Cromer A、Brugge JS、Sansom OJ、Norman JC、Vousden KH。 Muller PA等人。 单元格。2009年12月24日；139(7):1327-41. doi:10.1016/j.cell.2009.11.026。 单元格。2009 PMID：20064378
  • 突变型p53上调α-1抗胰蛋白酶的表达并促进肺癌的侵袭。
    Shakya R、Tarulli GA、Sheng L、Lokman NA、Ricciardelli C、Pishas KI、Selinger CI、Kohonen Corish MRJ、Cooper WA、Turner AG、Neilsen PM、Callen DF。 Shakya R等人。 致癌物。2017年8月；36(31):4469-4480. doi:10.1038/onc.2017.66。Epub 2017年4月3日。 致癌物。2017 PMID：28368395
  • p53及其突变体在肿瘤细胞迁移和侵袭中的作用。
    宾夕法尼亚州穆勒（Muller PA）、沃斯登（Vousden KH）、诺曼（Norman JC）。 Muller PA等人。 细胞生物学杂志。2011年1月24日；192(2):209-18. doi:10.1083/jcb.201009059。 细胞生物学杂志。2011 PMID：21263025 免费PMC文章。 审查。
  • 控制细胞迁移：p53的肿瘤抑制功能？
    Roger L、Gadea G、Roux P。 罗杰·L等人。 生物细胞。2006年3月；98（3）:141-52。doi:10.1042/BC20050058。 生物细胞。2006 PMID：16480340 审查。
查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Olivier M、Eeles R、Hollstein M、Khan MA、Harris CC、Hainaut P（2002）IARC TP53数据库：新的在线突变分析和用户建议。Hum变种19:607–614-公共医学
    1. Petitjean A、Mathe E、Kato S、Ishioka C、Tavtigian SV、Hainaut P、Olivier M（2007），突变型p53功能特性对TP53突变模式和肿瘤表型的影响：IARC TP53数据库最新发展的教训。人类变种28:622–629-公共医学
    1. Oren M，Rotter V（2010）突变型p53在癌症中的功能丧失。冷泉Harb Perspect Biol 2:a001107。-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Brosh R，Rotter V（2009）《当突变体获得新能力：来自突变体p53领域的消息》。Nat Rev Cancer杂志9:701–713-公共医学
    1. Lang GA等人（2004年），Li-Fraumen综合征小鼠模型中p53热点突变的功能增强。手机119:861–872-公共医学

出版物类型

赠款和资金