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.2012年4月；142（4）：918-927.e6。
doi:10.1053/j.gastro.2011.12.017。 Epub 2011年12月16日。

肝窦内皮细胞分化在大鼠肝纤维化进展和消退中的作用

谢冠华 1, 王向东, 王磊, 王林（Lin Wang）, 罗斯科·D·阿特金森, 加里·卡内尔, 威廉·加德, 劳里·德利夫（Laurie D Deleve）
附属机构

肝窦内皮细胞分化在大鼠肝纤维化进展和消退中的作用

谢冠华等。 胃肠病学. 2012年4月.

摘要

背景和目标：以肝窦内皮细胞（LSEC）分化丧失为特征的毛细血管化先于肝纤维化的发生。我们研究了LSEC分化的恢复是否会使激活的肝星状细胞（HSC）的串扰正常化，从而促进HSC的平静和纤维化的消退。

方法：用抑制剂和/或激动剂培养大鼠LSEC，并通过扫描电子显微镜检查筛板中的窗孔。用硫代乙酰胺诱导大鼠肝硬化，然后给药BAY60-2770，一种可溶性鸟苷酸环化酶（sGC）激活剂。天狼星红染色评价纤维化；免疫印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白的表达。

结果：维持LSEC分化需要血管内皮生长因子-A刺激一氧化氮依赖信号（通过sGC和环鸟苷单磷酸）和一氧化氮非依赖信号。在硫代乙酰胺诱导的肝硬化大鼠中，BAY 60-2770可加速毛细血管化的完全逆转（恢复LSEC的分化），而不会直接影响HSC的激活或纤维化。在没有进一步暴露于BAY 60-2770的情况下，LSEC分化的恢复导致HSC的静止和纤维化的消退。尽管继续使用硫代乙酰胺，但BAY 60-2770激活sGC可阻止肝硬化的进展。

结论：LSEC分化状态在HSC激活和纤维化过程中起着关键作用。

PubMed免责声明

利益冲突声明

披露：没有一位作者与这份手稿中的作品存在经济利益冲突。

数字

图1
图1。VEGF需要维持LSEC表型在体外和体内
(A类)LSEC与（左面板）和（右面板）VEGF培养2天的典型SEM显示筛板中的窗孔缺失在体外在缺乏VEGF的情况下。比例尺，5μm。(B类)VEGF在免疫印迹上的肝脏表达(C类)用VEGF ASO或对照寡核苷酸治疗的大鼠肝窦的典型SEM。*p<0.05。比例尺，2μm。所有数字表示n≥3。
图2
图2。VEGF刺激的cGMP是必要的，但不足以维持LSEC表型在体外
ODQ（sGC抑制剂）或Rp-8-pCPT-PET-cGMPS（PKG抑制剂）完全阻断培养2天的LSEC中VEGF刺激的（A）开窗和（B）孔隙度。比例尺：5μm.*p<0.001与VEGF对照组相比，n=3。（C） 没有VEGF的YC-1（sGC激活剂）或8-pCPT-cGMP（cGMP类似物）都无法使开窗正常化。然而，VEGF+L-NAME（eNOS抑制剂）+YC-1或VEGF+ODQ+8-pCPT-cGMP使LSEC开窗正常化；因此，需要不依赖于NO的VEGF和VEGF刺激的cGMP途径，而使用VEGF+L-NAME+YC-1的实验也表明蛋白质S-亚硝基化是不必要的。比例尺：5μm。（D） （C）中所述实验的孔隙度测量。*p<0.001与VEGF对照组相比；NS，不显著；n=3。
图3
图3。VEGF依赖NO和VEGF刺激NO都需要维持正常的LSEC开窗
用VEGF+L-NAME（左上图）或DETA-NONOate（NO供体；右上图）培养2天的LSEC没有开窗，而用VEGF+L-NAME+DETA-NNOate（左下图）培养2天后的LSEC显示正常开窗。孔隙度显示在右下面板中。比例尺，5μm.*与VEGF对照组相比p<0.001；NS，不显著；n＝3。
图4
图4。体内sGC激活可恢复硫代乙酰胺（TAA）诱导的毛细血管化LSEC表型
（A） 肝窦的典型SEM。左上角：正常肝窦，窗孔聚集成筛板。右上图：TAA 3周后毛细血管化。左下图：停止TAA后1周毛细管作用的最小逆转。右下图：停用TAA后，每日服用sGC激活剂1周，完全逆转毛细血管化。比例尺：2μm。（B） 按（A）处理的大鼠的孔隙度。*P<0。001.（C）根据（A）所示治疗的大鼠分离的LSEC中的细胞cGMP水平。*P<0.001。n=3。
图5
图5。分化LSEC表型的恢复加速了硫代乙酰胺（TAA）诱导的早期肝硬化的消退
（A） 5个治疗组的方案（n=9-12）。（B） TAA治疗3周后，免疫印迹密度测定和（C）免疫组织化学显示α-SMA表达升高。停止TAA后1周使用溶剂或sGC激活剂不会改变α-SMA的表达，但当使用sGC激活器1周后再使用溶剂1周时，α-SMA表达显著降低（第5组），而TAA后2周使用溶剂（第4组）。*p<0.001。比例尺，30μm。（D） 典型的天狼星红染色显示TAA治疗3周的大鼠出现早期肝硬化（中上部）。停止TAA后，使用溶剂（右上角）或sGC激活剂（左下角）1周后，肝硬化持续存在，但与TAA后接受溶剂2周的大鼠（中下角）的持续性肝硬化相比，在使用sGC激活剂1周后再使用溶剂1周（右下角）时，仅观察到桥接纤维化。比例尺，1.2 mm。（E）通过扫描形态计量学定量纤维化。*p<0.05。
图6
图6。体内sGC激活通过恢复LSEC分化阻止肝硬化的进展并加速其消退
（A） 5个治疗组的方案（n=5）。（B） 代表性SEM（比例尺，2μm）和孔隙度测量（n=4）表明，sGC活化剂处理与溶剂对照（II组）相比，尽管进行了TAA（III组），但完全逆转了毛细作用。*P<0。001.（C）免疫印迹（n=5）和（D）免疫组织化学显示，与TAA治疗6周的大鼠（第II组）相比，第4周至第6周sGC与TAA联合治疗（第III组）降低了α-SMA的表达。停药4周后，与4周前（第III组）或TAA溶剂对照组（第IV组）相比，第V组α-SMA的表达进一步降低。*P<0.05。比例尺，30μm。（E） 代表性天狼星红染色及其（F）扫描形态计量学（n=5）显示，TAA 6周后（第二组）的纤维化程度高于TAA 3周后（第一组）。TAA加sGC激活剂治疗6周后，与TAA治疗3周（第一组）相比，第4周至第6周（第三组）的纤维化程度没有变化。停药4周后，sGC激活剂组（V组）与溶剂组（IV组）相比，纤维化的消退程度更大。比例尺，1.2毫米*P<0.001。
图7
图7。sGC激活剂完全逆转HSC激活需要LSEC的存在，并且与NO无关
（A）上面板：与单独使用BAY60-2770相比，使用LSEC和BAY60-23770培养的HSC中，共焦显微镜测定的α-SMA阳性HSC百分比较低（p<0.0001，n=4）；下面板：HSC的代表性显微照片。HSC第6天：HSC单独培养6天；HSC第0天–6，LSEC第3天–6：第0-3天单独培养HSC，然后第3-6天与第3天分离的LSEC共同培养（注：与活化HSC培养3天的LSEC毛细血管化）；HSC第0天–6，sGC激活剂第3天–6：第0-6天单独培养HSC，第3-6天培养BAY 60-2770；HSC第0天–6，sGC激活剂+LSEC第3天–6：HSC单独培养3天，然后在第3-6天与第3天分离的LSEC和BAY60-2770共同培养（注：与BAY60-2-770培养3天的LSEC保持分化）（比例尺：40μm，每组n=4-6）。（B）NO不促进HSC静止。α-SMA阳性HSC的百分比在含有或不含DETA-NONOate的HSC中，或与LSEC和BAY 60-2770联合培养的HSC（含或不含L-NAME）中没有显著差异。HSC第6天：HSC单独培养6天；HSC第0天–6，DETA-NONOate第3天–6：从第0–6天开始单独培养HSC，在第3天添加DETA NONOate；HSC第0天–6，BAY+LSEC第3天–6：HSC单独培养3天，然后在第3-6天与第3天分离的LSEC和BAY 60-2770共同培养；HSC第0天–6，sGC激活剂+LSEC+L-NAME第3天–6：HSC单独培养3天，然后在第3-6天与第3天分离的LSEC共培养，再加上BAY 60-2770与L-NAME共培养。每组n=3–6。
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中的注释

  • 肝窦内皮细胞在疾病中的作用及治疗？
    Stutchfield BM，福布斯SJ。 Stutchfield BM等人。 肝素杂志。2013年1月；58(1):178-80. doi:10.1016/j.jhep.2012.07.046。Epub 2012年8月11日。 肝素杂志。2013 PMID：22892397 没有可用的摘要。

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