An in vitro system to study Sertoli cell blood-testis barrier dynamics

doi:10.1007/978-1-61779-191-8_16

.2011:763:237-52.

doi:10.1007/978-1-61779-191-8_16。

一种研究Sertoli细胞血-试验屏障动力学的体外系统

多洛雷斯·D·姆鲁克¹, C严成

附属公司

PMID： 21874456
预防性维修识别码：项目经理4138974
内政部： 10.1007/978-1-61779-191-8_16

一种研究Sertoli细胞血-试验屏障动力学的体外系统

多洛雷斯·D·姆鲁克等。分子生物学方法. 2011.

.2011:763:237-52.

doi:10.1007/978-1-61779-191-8_16。

作者

多洛雷斯·D·姆鲁克¹, C严成

附属

¹美国纽约州纽约市人口委员会生物医学研究中心。

PMID： 21874456
预防性维修识别码：项目经理4138974
内政部： 10.1007/978-1-61779-191-8_16

摘要

近年来，基于从大鼠睾丸分离出的支持细胞原代培养的体外系统的使用极大地促进了对血睾屏障的研究。在此，我们总结了从20天龄大鼠睾丸中分离未分化支持细胞的详细程序，这些细胞在Matrigel-coated双室单位上单层培养，这些培养细胞的特性，以及使用支持细胞上皮监测支持细胞血液测试屏障的完整性。这些信息是基于我们实验室在过去二十年中常规使用该系统来研究Sertoli细胞血-试验屏障的结果，这应该对该领域的研究人员有所帮助。

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图1
通过量化上皮上的TER，评估在Matrigel™涂层培养单元上培养的Sertoli细胞中TJ通透性屏障的组装的典型实验。从四胞体两院体培养室中记录TER（见图2A），其中支持细胞以1×10的密度铺板⁶细胞/厘米²如文中所述。

图2
一张示意图，说明支持细胞（Nu，支持细胞的细胞核）在被放置在双腔培养单元上后形成完整的上皮，并用于记录TER。Millicell ERS电极的一根筷子（即较长的一端）插入基底室，而另一根筷（即较短的一端）放置在培养单元的顶端室。然后，短脉冲电流通过支持细胞上皮发送，并记录电阻（单位：Ω）。该技术监测TJ渗透屏障的完整性。支持细胞顶端的细胞质突起清晰可见(*参见星号*)这是体外培养支持细胞的典型特征。

图3
(一–**c（c）**)通过荧光显微镜评估支持细胞TJ屏障的功能特征。支持细胞培养在0.025×10⁶细胞/厘米²在Matrigel™涂层玻璃盖玻片上，以使用FITC-结合的指骨肽可视化肌动蛋白(一，分子探针，尤金，俄勒冈州），使用抗闭塞素抗体的闭塞素(b条，Invitrogen，San Francisco，CA）和使用抗ZO-1抗体的ZO-1(**c（c）**，Invitrogen）。对于(b条)和(**c（c）**)使用与FITC结合的二级抗体观察闭塞素和ZO-1。支持细胞核用DAPI染色。Bar=10μm英寸(一)，适用于(b条)和(**c（c）**).

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