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.2011年12月1日;419(1):53-60.
doi:10.1016/j.ab.2011.07.031。 Epub 2011年7月30日。

表面等离子体共振生物传感器实时监测基质金属蛋白酶-9胶原酶溶解活性

附属公司

表面等离子体共振生物传感器实时监测基质金属蛋白酶-9胶原酶溶解活性

Atsushi Shoji公司等。 Ana Biochem公司. .

摘要

我们描述了一种使用表面等离子共振(SPR)生物传感器实时监测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)对天然三螺旋IV型胶原的胶原酶溶解活性的简单方法。MMP-9的蛋白水解活性通过固定在传感器表面的IV型胶原蛋白的裂解导致SPR信号的减少来测量。用SPR方法估算了全长MMP-9的动力学参数及其催化域催化常数k(cat)、缔合速率常数k(a)和解离速率常数k。反应溶液中氯化钠和非离子洗涤剂Brij-35的存在导致MMP-9的胶原酶溶解活性降低,而它们抑制了MMP-9和半胱胺修饰芯片之间的非特异性相互作用。MMP-9与其催化结构域之间的动力学参数比较显示,MMP-9的缔合常数远大于催化结构域的缔合常数,这表明血红素样结构域、纤连蛋白II型重复基序和连接区(O-糖基化结构域)之间的相互作用在识别IV型胶原中起着重要作用。

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