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.2010年2月;1(1):44-54.
doi:10.1007/s12672-009-0005-y。

从原发性和分离后复发肿瘤建立小鼠前列腺癌细胞系

附属公司

从原发性和分离后复发肿瘤建立小鼠前列腺癌细胞系

廖春鹏等。 霍姆癌. 2010年2月.

摘要

前列腺癌的临床过程分为两大阶段。第一阶段,即雄激素依赖性癌(AD-Ca)的生长,对雄激素耗竭治疗反应良好,而第二阶段,即可称为雄激素耗损依赖性癌的生长,则没有反应。我们使用两个单独的前列腺肿瘤,一个来自条件性Pten缺失小鼠模型的AD-Ca和一个ADI-Ca,从每个细胞系生成一对细胞。AD-Ca细胞系(E2和E4)和ADI-Ca细胞系(cE1和cE2)在Pten基因位点显示双等位基因缺失,这是一种对该小鼠模型前列腺上皮特异的事件,雄激素受体(AR)的表达水平相当相似。ADI-Ca细胞系(cE系列)在没有雄激素的情况下生长良好,在雄激素缺乏的环境下显示AR转录增加,并在补充雄激素时保持对增殖增加的敏感性。AD Ca细胞系(E系列)在缺乏雄激素的情况下生长缓慢,与cE细胞不同,在缺乏雄激素的情况下维持时,AR表达不会增加。在cE系列中检测到的上皮细胞标记物,如CK8、CK14、CK18和E-cadherin,与培养中这些细胞的多边形上皮形态相符。E细胞也呈现出多角形形态,其中有一小部分细胞具有纤维母细胞形态,并产生少量或极低水平的细胞角蛋白,但波形蛋白、Twist和Slug水平增加,这些标记物已知与上皮-间质转化有关。将每个细胞系皮下接种到雄性或雌性NOD中。SCID小鼠在8周内诱发肿瘤,发生率为100%。然而,肿瘤切片的组织病理学检查导致了明显的生物学差异。cE系列诱发腺癌,尤其是男性宿主,而E系列诱发男性或女性宿主的肉瘤样癌(CK8和AR以及vimentin表达阳性)。这些新的细胞系是阐明雄激素代谢及其在前列腺癌中作用的有前景的模型。

关键词:前列腺癌条件性Pten-delection小鼠模型;雄激素依赖性和雄激素耗竭依赖性前列腺癌;小鼠前列腺癌细胞系;前列腺肉瘤样癌。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
E2和E4以及cE1和cE2细胞系的特征。显微镜下亮场下细胞形态的比较。虽然所有细胞株都显示出不同于上皮细胞的多边形细胞,但E2或E4细胞也表现出少量形态细长的细胞,如下所示箭头.酒吧,100微米。b条使用的细胞系的PCR基因分型铂族-特异性引物。(正常小鼠尾部组织;b条c(c)铂族 −/− L(左)小鼠尾部组织)。c(c)PCR检测Cre公司细胞系中的基因。d日小鼠细胞系AR表达的Western blots分析;作为对照的人前列腺癌细胞系为:PC3,阴性;LNCaP,阳性。e(电子)(f)标记基因表达的比较实时PCR分析,包括基底(CK5,p63,CK14)、管腔(CK18,CK8)、神经内分泌细胞标记(CgA,Syph)和PSCA。
图2
图2
培养物中细胞系增殖率的比较。SFM的增长率。E系列和cE系列在第5天计数的细胞数差异显著(P(P) < 0.01).b条低浓度雄激素(R1881)对SFM中E4细胞生长的影响的说明(E2细胞也获得了类似的结果)。增长速度显著提高(P(P) < 0.05)在5nM但不是1nM R1881存在下进行。c(c)相似浓度雄激素对cE1和cE2细胞生长的影响(d日). 在第天雄激素刺激显著(P(P) < 0.01)。e(电子)分析E和cE系列在维持培养基或无雄激素培养基中培养的AR表达水平,该培养基由炭化血清代替正常血清(CSS)获得。cE1和cE1 CSS之间以及cE2和cE2 CSS之间的差异是显著的(P(P) < 0.01).
图3
图3
NOD中男性或女性细胞系诱发肿瘤的显微解剖分析。SCID小鼠。E2和E4移植物切片的H&E和IHC染色检测AR、CK8和波形蛋白。标记为箭头显示在每个部分的左上角。酒吧,100微米。b条用来自cE1和cE2移植物的切片进行类似的染色实验。酒吧,100微米。c(c)Ki67移植物的IHC染色。酒吧,100微米。
图3
图3
NOD中男性或女性细胞系诱发肿瘤的显微解剖分析。SCID小鼠。E2和E4移植物切片的H&E和IHC染色检测AR、CK8和波形蛋白。标记为箭头显示在每个部分的左上角。酒吧,100微米。b条cE1和cE2移植物切片的类似染色实验。酒吧,100微米。c(c)Ki67移植物的IHC染色。酒吧,100微米。
图3
图3
NOD中男性或女性细胞系诱发肿瘤的显微解剖分析。SCID小鼠。E2和E4移植物切片AR、CK8和波形蛋白的H&E和IHC染色。标记为箭头显示在每个部分的左上角。酒吧,100微米。b条cE1和cE2移植物切片的类似染色实验。酒吧,100微米。c(c)Ki67移植物的IHC染色。酒吧,100μm。
图4
图4
细胞系中EMT相关标记的表达分析。E-cadherin、N-cadherin和vimentin的相对表达b条实时PCR测定的扭曲、蜗牛和鼻涕虫。与cE序列相比,E序列中波形蛋白、扭曲蛋白、蜗牛蛋白或Slug的表达水平差异显著(P(P) < 0.01).c(c)e(电子)来自E和cE细胞系的肿瘤移植物染色时的共同免疫荧光结果图示红色对于α-SMA和绿色对于任一CK8(c(c)),E-钙粘蛋白(d日)或N-钙粘蛋白(e(电子)).白色箭头显示细胞共表达(黄色的).酒吧,50微米。

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工具书类

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