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.2010年5月；298（5）：H1357-64。
doi:10.1152/ajpheart.00464.2009。 Epub 2010年2月12日。

Ac-SDKP抑制转化生长因子β1诱导的人心脏成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化

彭红梅 1, 奥斯卡·A·卡罗罗, 爱德华·彼得森, 努尔·埃丁·拉勒布
附属公司

Ac-SDKP抑制转化生长因子β1诱导的人心脏成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化

彭红梅等人。 美国生理学杂志心脏循环生理学. 2010年5月.

摘要

N-乙酰-芳基-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸（Ac-SDKP）抑制培养的大鼠心脏成纤维细胞的胶原生成和细胞增殖，但其对成纤维细胞向肌成纤维细胞分化的影响尚不清楚。纤维化心脏组织中发现大量转化生长因子β1（TGF-β1）。TGF-β1将成纤维细胞转化为肌成纤维细胞，肌成纤维细胞比成纤维细胞产生更多的细胞外基质蛋白。我们假设：1）Ac-SDKP抑制TGF-β1诱导的成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化；和2）这种作用部分是通过阻断小分子-他汀类药物对去甲停搏液（Smad）2和细胞外信号调节激酶（ERK）1/2的磷酸化来介导的。在本研究中，我们使用了人胎儿心脏成纤维细胞（HCFs），当低代培养时，HCFs不会自发成为肌成纤维细胞。我们研究了Ac-SDKP对TGF-β1诱导HCF转化为肌成纤维细胞、Smad2和ERK1/2磷酸化、Smad7表达、细胞增殖和胶原生成的影响。我们还研究了内皮素-1（ET-1）刺激的HCF产生TGF-β1的情况。正如预期的那样，与未经处理的细胞相比，经TGF-β1处理的HCF转化为肌成纤维细胞，表现为α-平滑肌肌动蛋白的表达增加，平滑肌肌球蛋白胚胎亚型的比例更高。TGF-β1也增加Smad2和ERK1/2磷酸化，但不影响Smad7的表达。此外，TGF-β1刺激HCF增殖，如线粒体脱氢酶活性和胶原蛋白生成增加所示（羟脯氨酸测定）。Ac-SDKP显著抑制TGF-β1的所有作用。它还抑制ET-1刺激的TGF-β1的产生。我们得出的结论是，Ac-SDKP显著抑制人心脏成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化，可能是通过抑制TGF-β/Smad/ERK1/2信号通路，从而介导其抗纤维化作用。

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数字

图1。
图1。
代表性显微照片(A类)和定量数据(B类)代表平滑肌α-肌动蛋白（α-SMA）染色培养的成纤维细胞，用转化生长因子-β1（TGF-β1，5 ng/ml，24 h）处理，有无N个-乙酰-SDKP（Ac-SDKP）。用苏木精对细胞进行复染，以显示细胞核。P（P）=0.001，对照组与TGF-β1（*）和Ac-SDKP+TGF-(n个=5个实验/组）。
图2。
图2。
显示Ac-SDKP对TGF-β1处理24小时的人胎儿心脏成纤维细胞中胚胎平滑肌肌球蛋白表达亚型的影响的典型显微照片。条件与图1相同。
图3。
图3。
代表性Western印迹(A类)和定量数据(B类)代表α-在存在或不存在Ac-SDKP的情况下，用TGF-β1（5 ng/ml）处理24小时的成纤维细胞中SMA的表达。α-SMA标准化为肌动蛋白*P（P）=0.004，对照组vs.TGF-β1；†P（P）<0.007，Ac-SDKP+TGF-β1 vs.单独使用TGF-(n个=5/组）。
图4。
图4。
代表性Western印迹(A类)和定量数据(B类)代表在存在或不存在Ac-SDKP的情况下，用TGF-β1处理30分钟的成纤维细胞中磷酸化（p）的小母亲对抗脑卒中（Smad）2水平。pSmad2归一化为总（t）Smad2*P（P）=0.005，对照组vs.TGF-β1；†P（P）<0.05，Ac-SDKP+TGF-β1 vs.单独使用TGF-(n个=4/组）。
图5。
图5。
代表性Western印迹(A类)和定量数据(B类)在有或无Ac-SDKP的情况下，TGF-β1处理30分钟的成纤维细胞中Smad7水平。Smad7被归一化为甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）(n个=4/组）。
图6。
图6。
代表性Western印迹(A类)和定量数据(B类)在存在或不存在Ac-SDKP的情况下，用TGF-β1处理15分钟的成纤维细胞中磷酸化细胞外信号调节激酶（ERK）1/2的水平。pERK1/2归一化为tERK1/2*P（P）=0.001，对照组vs.转化生长因子-β1；†P（P）<0.02，Ac-SDKP+TGF-β1 vs.单独使用TGF-(n个=6/组）。
图7。
图7。
Ac-SDKP对TGF-β1刺激的培养成纤维细胞胶原生成的影响（5 ng/ml TGF-？48小时）*P（P）=0.002，对照组vs.TGF-β1；†P（P）=0.001，Ac-SDKP+TGF-β1与单独TGF-(n个=6/组）。
图8。
图8。
Ac-SDKP对两种成纤维细胞生长补充剂刺激的成纤维细胞增殖的影响(A类)或TGF-β1(B类). 通过测量线粒体脱氢酶活性来测量细胞增殖(A类:n个=28-29/组；B类:n个=12/组）。在450 nm处使用微量滴定板阅读器记录吸光度，并表示为任意单位（AU）。P（P）=0.001，对照组对TGF-β1（*），Ac-SDKP+TGF-α1对单独TGF-γ1（†）。
图9。
图9。
Ac-SDKP对内皮素-1（ET-1）刺激的人心脏成纤维细胞分泌TGF-β1的影响。用定量夹心酶免疫分析法测定TGF-β1*P（P）<0.05，对照组与ET-1；†P（P）<0.05，Ac-SDKP+ET-1 vs.ET-1单独使用#P（P）=0.0021，Ac-SDKP+ET-1 vs.仅ET-1(n个=4/组）。
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