ECM and FGF-dependent assay of embryonic SMG epithelial morphogenesis: investigating growth factor/matrix regulation of gene expression during submandibular gland development

doi:10.1007/978-1-59745-413-1_21

.2009:522:319-30.

doi:10.1007/978-1-59745-413-1.21。

胚胎SMG上皮形态发生的ECM和FGF依赖性检测：研究生长因子/基质对颌下腺发育过程中基因表达的调节

Ivan T Rebustini公司¹, 马修·P·霍夫曼

附属公司

PMID： 19247608
预防性维修识别码： PMC3375330型
内政部： 10.1007/978-1-59745-413-1_21

胚胎SMG上皮形态发生的ECM和FGF依赖性检测：研究生长因子/基质对颌下腺发育过程中基因表达的调节

Ivan T Rebustini公司等。分子生物学方法. 2009.

.2009:522:319-30.

doi:10.1007/978-1-59745-413-1.21。

作者

Ivan T Rebustini公司¹, 马修·P·霍夫曼

附属

¹NIDCR，美国马里兰州贝塞斯达国立卫生研究院。

PMID： 19247608
预防性维修识别码： PMC3375330型
内政部： 10.1007/978-1-59745-413-1_21

摘要

器官发生过程中的上皮-间充质相互作用由生长因子和细胞外基质（ECM）成分之间的动态相互作用调节。小鼠胚胎颌下腺（SMG）上皮是从其内源性间充质中分离出来的，当在无血清培养基中的基膜提取物中体外培养时，在生长因子刺激下，SMG上皮会发生分支形态发生。在定义的培养系统中产生的三维上皮形态发生使其成为一个有用的模型，用于分析原代器官培养系统中的细胞-细胞和细胞-基质相互作用、生长因子介导的信号和基因表达、增殖、凋亡、迁移、管腔形成和上皮形态发生。SMG上皮细胞培养是强健的，可重复的，使用少量试剂，基因表达的变化通过使用有限数量的胚胎组织的实时PCR来测量。在本章中，我们描述了分离原代胚胎SMG上皮的详细方案，并建立了ECM和生长因子依赖的无血清上皮形态发生检测，随后通过实时PCR分析基因表达。

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数字

图1
胚胎小鼠SMG、上皮组织和离体器官培养系统的解剖。图1-A：在胚胎发育13天时采集胚胎后（左图），按如下方式解剖腺体：从颈部切除胚胎头部（左图），并切除约1 mm的下颌骨下片（中图），切除带脑干的切片后半部分（bar），舌头与下颌骨分离，并连接SMG（右侧面板）。两个SMG位于舌根，最后用细镊子分开。比例尺=1 mm。图1-B显示了E13处SMG形态随交配时间的变化。左侧和中部显示的早期腺体适用于上皮间质解剖；E13晚期的腺体经历了很多分支，上皮很难从间质中完整分离出来。解剖后，将SMG置于培养基中，并将上皮雏形从间质中分离出来，如图1-C所示。图1-D中的图显示了培养的建立；上皮原基被镀在过滤器顶部的一滴层粘连蛋白-111底物中，漂浮在200μl培养基上。

图2
用FGF7或FGF10培养SMG上皮雏形。图2-A显示了培养48小时的上皮原基以及FGF7或FGF10分别促进的相应芽扩张或导管伸长。图2-B说明了如何量化SMG上皮形态发生过程中的形态学事件。上图显示了如何测量宽度（用箭头表示）以及如何计算端芽的数量（*）；下图显示可以测量管道的直径（虚线圈）和长度（箭头）。

图3
SMG上皮培养过程中基因表达的时间过程。在指定的时间收集总RNA以生成cDNA，并进行实时PCR以评估FGF7-（实线）或FGF10-诱导的（虚线）基因表达。将每个感兴趣基因的表达与家政基因进行比较*29秒*然后将不同时间（6、18、24和30 h）基因表达的相应折叠变化值与对照组（时间0 h）的基因表达的各自折叠变化进行比较。有关更多详细信息，请参阅**方法3.2.2。**

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