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.2008年3月21日;283(12):7885-93.
doi:10.1074/jbc。M709943200。 Epub 2008年1月10日。

停流光谱法对蛋白激酶C C1结构域与脂质膜相互作用的动力学分析

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蛋白激酶C C1结构域与脂质膜相互作用的停流光谱动力学分析

丹尼尔·R·德里斯等。 生物化学杂志. .
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摘要

传统蛋白激酶C(PKC)同工酶的二酰甘油(DG)/佛波酯依赖性易位由C1结构域介导,C1结构域是一种膜靶向模块,也可选择性结合磷脂酰丝氨酸(PS)。利用停流光谱,我们分析了DG/佛波酯(C1配体)和PS在驱动C1结构域与膜的结合和分离中的作用。具体来说,我们研究了PKCbeta的C1B结构域与取代的Trp(Y123W)的结合,其荧光在与膜结合时被猝灭。如前所述,该结构体(C1Bbeta-Y123W)与磷脂小泡的结合在PS含量方面是协同的,并且依赖于C1配体。停流分析表明,表观结合率(k(on)(app)),而非表观解离率(k)(off)(app),对PS含量高度敏感:与40 mol%PS相比,不含PS的囊泡的膜亲和力增加了60倍,这主要是由于k(on,app)增加了30倍对k(off)(app)几乎没有影响(2倍)。膜亲和力也由C1配体的含量和结构控制。与PS相反,这些配体显著改变k(off)(app),但对k(on)(app)的影响较小。我们还表明,对佛波酯膜的亲和力比对DG膜的亲和力高2个数量级,这主要是由于k(off)(app)的差异所致。我们的数据与一个模型一致,在该模型中,C1结构域通过与PS的初始弱静电相互作用被招募到膜上,然后快速二维搜索配体,配体的结合保留了膜上的结构域。因此,PS推动了最初的接触,而DG/佛波酯保留了膜上的结构域。与佛波酯相比,DG在保留细胞膜C1结构域方面的有效性降低,这导致了DG依赖性PKC信号的快速、短暂性与佛波酯类激活的PKC的慢性过度活性的分子二分法。

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