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.2007年12月26日；104(52):20890-5.
doi:10.1073/pnas.0704154104。 Epub 2007年12月18日。

脂营养不良蛋白seipin位于内质网脂滴连接处，对液滴形态很重要

金伯利·M·西曼斯基 1, 德克·宾斯, 雷内·巴茨, 尼克·V·格里申, 李伟平, 阿尼尔·K·阿加瓦尔, Abhimanyu Garg公司, 理查德·G·W·安德森, 乔尔·古德曼
附属公司

脂营养不良蛋白seipin位于内质网脂滴连接处，对液滴形态很重要

金伯利·M·西曼斯基等。 美国国家科学院程序. .

摘要

脂营养不良是一种以脂肪组织丢失为特征的疾病，常伴有严重的高甘油三酯血症、胰岛素抵抗、糖尿病和脂肪肝。它可以继承或获得。最严重的遗传形式是Berardinelli-Seip先天性脂营养不良2型，与BSCL2基因突变相关。BSCL2编码seipin，其功能一直完全未知。我们现在报道了通过筛选检测对脂滴形态重要的基因来鉴定酵母BSCL2/seipin。酵母菌seipin的缺乏导致不规则的脂滴通常聚集在增殖的内质网（ER）旁边；还可以看到巨大的脂滴。BSCL2患者的成纤维细胞中也可见许多不规则的小脂滴。人类seipin可以在功能上取代酵母seipin，但人类seipon中的错义突变会导致脂肪营养不良，或酵母基因中的相应突变，使其无法补充。酵母seipin定位于内质网，在那里形成点状。几乎所有的脂滴都出现在ER上，seipin出现在这些连接处。因此，我们假设seipin对液滴维护和组装很重要。除了检测seipin外，该筛查还鉴定了58个其他基因，这些基因的缺失会导致异常的脂滴，包括2个编码已知激活脂蛋白的蛋白质的基因，一个小鼠脂肪营养不良位点，以及16个其他与内胚体溶酶体贩运有关的基因。我们筛选出的基因对理解脂滴生物生成和维持的途径以及某些脂肪营养不良的原因具有价值。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

图1。
图1。
脂质体形态异常的菌株示例。在对数期或静止期收获细胞，并用BODIPY对脂滴进行染色。（比例尺，2μm）
图2。
图2。
YLR404瓦是酵母英国标准CL2/塞宾。(A类)通过使用PROMALS（19）对齐seipins。NCBI基因识别号（gi号）显示在序列之后。区域以黄色突出显示，表示疏水性斑块，保守的小氨基酸以灰色突出显示。预测的二级结构（PSIPRED）（29）显示在序列下方。预测的跨膜α-螺旋呈红色(B类和C类)，脂滴表型的补充ylr404瓦Δ由人和酵母塞宾决定。用空质粒（pRS315）或含有编码长或短形式的人seipin（HSeipinL或HSeipinS）、A212P人seipin、酵母seipin（YSeipin）或具有突变S224P或G225P的酵母seipin的序列的质粒转化野生型或seipin缺失菌株。BODIPY染色图像如所示B类（标尺，5μm）；中的直方图C类显示每个细胞的脂滴数量。
图3。
图3。
精蛋白缺乏细胞中的异常脂滴。(A类)野生型或seipin KO酵母菌株的超微结构。如图所示，细胞在葡萄糖或油酸盐中培养。KO中的脂滴呈簇状（箭头所示b条，在更高分辨率中d–f日). 在油酸介质中，野生型脂滴大小均匀(克)但在KO菌株中在大小、形状和数量上是不规则的(小时和我). （所有标尺，200 nm）ER，内质网；LB，脂滴；N、 细胞核；五、 液泡。(B类)磷脂缺乏的人成纤维细胞中的脂滴异常。细胞用Hoechst和油红O染色（有或没有用油酸盐培养）或针对脂滴标记蛋白ADRP的抗体（没有油酸盐）。（比例尺，10μm）(C类)Erg6p靶向异常簇（箭头），表明蛋白质靶向正常。合并图像还合并了亮场以勾勒单元格的轮廓。（比例尺，5μm）(D类)ER集中在异常簇中（箭头）。箭头表示一个巨大的脂滴。注意，在野生型菌株中，脂滴似乎附着在内质网上。（比例尺=5μm）(E类)在不含油酸盐的情况下生长的缺乏大豆蛋白的成纤维细胞中小脂滴的增殖。注意突变细胞中存在许多小的透明细胞器。（比例尺，2μm）
图4。
图4。
酵母seipin定位于内质网并标记与脂滴接触的部位。(A类)Seipin在两个末端都标记有mCherry，定位于ER。Seipin和GFP-HDEL都在质粒上表达，并由PGK公司发起人。(B类)大多数脂滴似乎与ER结合。Erg6p-mCherry染色体标记的液滴也表达GFP-HDEL ER标记。(C类)Seipin标记脂质体的对接部位。Seipin mCherry或无活性的Seipin-G225P-mCherry在Seipin基因座上染色体表达。由PGK启动子驱动的CFP-HDEL被质粒表达。脂滴用BODIPY染色。黄色方框框出两个单元格，显示出清晰的seipin液滴接近。表达突变蛋白的细胞中的液滴簇（空背景）也使seipin共定位。（比例尺，5μm）
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