Snail is a repressor of RKIP transcription in metastatic prostate cancer cells

doi:10.1038/sj.onc.1210860

.2008年4月3日；27(15):2243-8.

doi:10.1038/sj.onc.1210860。 Epub 2007年10月22日。

蜗牛是转移性前列腺癌细胞中RKIP转录的阻遏物

S海滩¹, H唐, S公园, A S Dhillon公司, E T Keller公司, W Kolch公司, K C杨

附属公司

采购管理信息： 17952120
预防性维修识别码：项目经理2933472
内政部： 10.1038/sj.onc.1210860

蜗牛是转移性前列腺癌细胞中RKIP转录的阻遏物

S海滩等。癌基因. 2008.

.2008年4月3日；27（15）：2243-8。

doi:10.1038/sj.onc.1210860。 Epub 2007年10月22日。

作者

S海滩¹, H唐, S公园, A S Dhillon公司, E T Keller公司, W Kolch公司, K C杨

附属

¹美国俄亥俄州托莱多市托莱多大学医学院生物化学和癌症生物学系43614-5804。

采购管理信息： 17952120
预防性维修识别码：项目经理2933472
内政部： 10.1038/sj.onc.1210860

摘要

转移抑制蛋白RKIP在许多癌症中的表达减弱。其潜在机制尚不清楚。这里，我们表明RKIP的表达与蜗牛锌转录阻遏物的表达呈负相关，蜗牛锌是正常和肿瘤性上皮-间充质转化（EMT）程序的关键调节剂。结合功能丧失和功能获得方法，我们发现蜗牛抑制转移性前列腺癌细胞系中RKIP的表达。蜗牛对RKIP的影响是在转录起始水平上，并由RKIP启动子上的近端E-box介导。因此，我们的结果表明，RKIP是蜗牛转录调控网络的一个新组成部分，对癌症的进展和转移至关重要。

PubMed免责声明

数字

**图1。RKIP在高转移癌细胞中的表达受到抑制**
a）前列腺癌或乳腺癌细胞提取物与特异性抗体的免疫印迹分析。b条)通过qRT-PCR测量前列腺癌细胞内RKIP mRNA的内源性水平，并将其归一化为GAPDH（左）或mATP6的水平。每个条形代表平均值±PCR反应的SEM（标准误差平均值）一式三份。**c-d）**前列腺癌细胞DU145经c）TSA或d）5-Aza-2-dC处理24或48小时后的提取物免疫印迹分析，如图所示。所示数据代表三个独立实验。

**图2。蜗牛是RKIP表达的直接阻遏物**
a）通过Western blot分析比较前列腺癌细胞系中RKIP和蜗牛的表达。使用多克隆抗RKIP或蜗牛抗体对Triton x-100提取的细胞裂解物（30μg）进行免疫印迹。用抗肌动蛋白血清作为负载对照对相同的膜进行再印迹。**b-c）**蜗牛异位表达抑制RKIP表达。b）用特定抗体对稳定感染指示逆转录病毒或EVC（空载体对照）的癌细胞提取物进行免疫印迹分析。c）稳定感染所示逆转录病毒的LNCaP细胞中RKIP mRNA水平的比较。用qRT-PCR测定感染细胞内RKIP mRNA的内源性水平，并将其归一化为GAPDH水平。每个条形代表平均值±PCR反应的SEM一式三份。d）蜗牛在前列腺癌细胞中的下调增强了RKIP的表达。细胞被表达shRNA的逆转录病毒稳定感染*荧光素酶*或蜗牛通过免疫印迹分析测定感染细胞内RKIP、微管蛋白和蜗牛蛋白的内源性水平。e）蜗牛抑制癌细胞中的RKIP启动子报告子。用指定的效应质粒和报告质粒转染MCF7细胞。转染后48小时收获细胞进行萤光素酶测定。包含RKIP启动子区域的RKIP-LUC报告子示意图如左图所示。显示了假定电气箱的位置。TK代表胸苷激酶。f）蜗牛与*RKIP公司*发起人。在稳定表达Flag-taged蜗牛蛋白的LNCaP细胞上使用抗Flag或抗HA抗体进行ChIP分析。用抗体免疫沉淀下来的DNA用引物对PCR扩增，如下图箭头所示。

**图3。前列腺癌中RKIP的表达与蜗牛呈负相关**
a）前列腺癌微阵列数据集中RKIP和蜗牛水平的方框图。方框表示分布的标准偏差，穿过方框的线表示该分布的平均值。方框上方和下方的水平线表示分布的极值。使用统计程序R.NAP N=3、BPH N=5、PCA N=10和MET N=7，对参考前列腺癌样本与患者正常邻前列腺（NAP）样本池的比率进行对数转换和绘图。b）绘制每个样本的RKIP或蜗牛的对数转换表达单位。样本分为NAP、BPH、PCA和MPC，如a）所示。c） a）中显示的蜗牛与所有样本RKIP的散点图

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