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.2007年6月;4(2):76-84.
doi:10.4161/rn1.4.2.4640。 Epub 2007年6月28日。

从分离的精氨酸蛋白复合物中鉴定人microRNA靶点

附属公司

从分离的精氨酸蛋白复合物中鉴定人microRNA靶点

迈克拉·贝辛格等。 RNA生物. 2007年6月.

摘要

微小RNA(miRNA)是一类小的非编码RNA,在翻译和/或mRNA稳定性水平上调节基因表达。哺乳动物miRNAs与精氨酸(Ago)蛋白家族成员相关,并与特定靶mRNAs的3'非翻译区(UTR)中的部分互补序列结合。基于自由结合能或序列守恒等因素的计算机算法已被用于预测miRNA靶mRNA。根据这些预测,多达三分之一的哺乳动物mRNA似乎处于miRNA调控之下。然而,由于miRNA与其靶点之间的互补性很低,这种计算机程序通常不精确,因此不太可靠。在这里,我们报道了第一种从人类细胞中鉴定miRNA靶点的生化方法。使用针对Ago蛋白家族成员的高度特异性单克隆抗体,我们共同免疫沉淀Ago-bound mRNA并通过克隆进行鉴定。有趣的是,大多数确定的目标也由不同的计算机程序预测。此外,我们随机分析了六个不同的候选靶点,并通过实验验证了其中五个靶点为miRNA靶点。我们的数据清楚地表明,miRNA靶点可以通过实验从Ago复合物中识别出来,因此提供了一种直接分析miRNA功能的新工具。

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