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.2007年3月；75(3):1325-34.
doi:10.1128/IAI.00686-06。 Epub 2006年12月11日。

皮质类固醇和神经肽对牛气管上皮细胞防御素表达的影响

戈登·米切尔 1, 穆萨法尔·哈达维, 玛丽·埃伦·克拉克, 詹妮弗·D·贝弗里奇, 杰夫·L·卡斯维尔
附属公司

皮质类固醇和神经肽对牛气管上皮细胞防御素表达的影响

戈登·米切尔等。 感染免疫. 2007年3月.

摘要

牛对细菌性肺炎的易感性因运输、断奶和混合等应激源而增强，这些应激源触发生理应激反应，导致内源性皮质类固醇和儿茶酚胺水平升高。为了确定神经内分泌介质对肺天然防御肽表达的影响，将牛气管上皮细胞暴露于地塞米松、儿茶酚胺、乙酰胆碱或P物质，然后使用实时逆转录PCR定量β-防御素表达。气管抗菌肽（TAP）mRNA的基本表达不受任何受试介质的影响。然而，地塞米松预处理显著抑制了脂多糖诱导TAP表达。治疗48小时后，地塞米松处理的小牛支气管活检标本中TAP和舌抗菌肽（LAP）mRNA的表达显著低于盐水处理的对照组。与盐处理对照组相比，地塞米松处理的小牛肺中脂多糖合法的中性粒细胞募集增强。这些发现表明，调节上皮抗菌肽表达是皮质类固醇和应激可能损害先天性肺防御的机制之一。

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数字

图1。
图1。
地塞米松（Dex）抑制LPS诱导的TEC原代培养中TAP mRNA水平的上调。（A） TEC生长为分化的假复层柱状上皮细胞，在气液界面的胶原涂层多孔嵌件上，然后在有或无10−6或10−7地塞米松在其基底外侧表面作用24小时，然后在其顶部表面施加（+）或（−）LPS（100 ng/ml）16小时。（B） TEC浸没在胶原蛋白涂层板的培养基中生长，并在有或无10−5, 10−6、或10−7M地塞米松24小时，然后在有或没有LPS（100ng/ml）的情况下16小时。数据表示三份原代培养物中TAP mRNA表达与GAPDH mRNA表达的平均±SEM比值。显示了三（A）或四（B）只不同动物的代表性数据（*，P（P）<0.05与LPS单独比较，单因素方差分析与事后Tukey's）。
图2。
图2。
RU486消除地塞米松（Dex）对LPS诱导TAP mRNA表达的影响。用地塞米松（10−6M） 带（+）或不带（−）RU486（10−6M） 在添加LPS（100 ng/ml）16 h之前的24 h内，数据表示TAP mRNA表达与来自三只不同动物（a，P（P）<0.05，与单纯LPS相比；b、，P（P）<0.05与Dex+LPS，单因素方差分析与事后Tukey’s）。
图3。
图3。
地塞米松（Dex）不抑制LPS诱导的LAP mRNA表达，也不改变TLR-4 mRNA表达。（A） 用（+）或不使用（−）地塞米松（10−6M） 在添加LPS（100 ng/ml）前24小时，持续16小时。数据表示来自三只不同动物（*，P（P）与未经处理的细胞相比<0.05）。（B） 按照A组所述对细胞进行处理，但数据表示TLR-4 mRNA表达与来自三只单独动物的三份原代培养物的GAPDH mRNA的混合平均（±SEM）比率。
图4。
图4。
地塞米松抑制LPS诱导的培养TEC中TAP表达的上调。用地塞米松或不用地塞米松处理细胞（10−6M） 在添加LPS（100 ng/ml）前24 h，持续16 h。从未经处理的（A）、LPS处理的（B）、地塞米松处理的（C）或地塞米森和LPS处理（D）细胞获得细胞质提取物的MALDI-TOF质谱。显示了从三种不同动物分离的细胞中获得的代表性数据。
图5：。
图5：。
P物质、乙酰胆碱、去甲肾上腺素和肾上腺素不会改变培养的TEC中TAP mRNA的表达。（A） TEC暴露于P物质（SP）（10−6, 10−8, 10−10、或10−12M） 或在添加LPS（100 ng/ml）前30 min，持续16 h。（B）乙酰胆碱（Ach）（10−5, 10−6、或10−7M） 或在添加LPS（100 ng/ml）16 h之前向TEC中添加载体3 h。TEC用去甲肾上腺素（NE）（10−5, 10−6, 10−7、或10−8M） （C）或肾上腺素（Epi）（10−4, 10−6, 10−8、或10−10M） （D）在添加LPS（100 ng/ml）前30 min，持续16 h。数据表示来自三份原代培养物的TAP mRNA表达相对于GAPDH mRNA的平均±SEM比率。显示了三种不同动物的代表性数据。+，带有；−，没有。
图6。
图6。
地塞米松和LPS改变外周血和BALF中性粒细胞的比例。每24小时向小牛注射地塞米松（0.1 mg/kg）或生理盐水，持续6天，然后将LPS（500μg，10 ml PBS）注入肺尾叶的支气管。在治疗前（第0天）和第2、6和7天（LPS输注后24小时）采集外周血和BALF。测量全血中性粒细胞（A）和淋巴细胞（B）的百分比、BALF（C）中的总细胞计数和BALF中的中性粒细胞百分比（D）。数据表示4天内盐水或地塞米松处理小牛（每组4只小牛）的平均±SEM计数。显著性基于事后Bonferroni（*，P（P）每天使用生理盐水与地塞米松治疗的患者之间的差异<0.05）。
图7。
图7。
地塞米松降低地塞米森处理的小牛支气管活检标本中β-防御素mRNA的表达。每24小时给小牛注射0.1mg/kg地塞米松（黑条）或生理盐水（白条），持续6天，然后将LPS（500μg，在10ml PBS中）输注到肺尾叶的支气管中。然后使用从支气管活检标本中提取的总mRNA，通过实时RT-PCR定量TAP（A）或LAP（B）mRNA的表达。数据表示四只不同动物TAP或LAP mRNA表达相对于GAPDH mRNA的平均±SEM比率。显著性基于对数转换数据（*，P（P）生理盐水与地塞米松处理的小牛每天的差异<0.05）。
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