跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府政府网站。

Https系统

该站点是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2006年11月28日；103(48):18261-6.
doi:10.1073/pnas.0606108103。 Epub 2006年11月17日。

NOTCH1直接调节c-MYC并激活前馈转录网络，促进白血病细胞生长

特蕾莎·帕洛梅罗 1, 魏济特·林, 邓肯·T·奥多姆, 玛丽亚·路易莎·苏利斯, 佩德罗·J·雷亚尔, 亚当·马戈林, 凯利·巴恩斯, 詹妮弗·奥尼尔, 唐娜·纽伯格, 安德鲁·P·翁, 乔恩·C·阿斯特, 弗朗索瓦·西高克斯, 让·苏利埃, 托马斯造型, 理查德·A·杨, 安德烈亚·卡里瓦诺, 阿道夫·阿费兰多
附属公司

NOTCH1直接调节c-MYC并激活前馈转录网络，促进白血病细胞生长

特蕾莎·帕洛梅罗等。 美国国家科学院程序. .

勘误表in

  • 美国国家科学院院刊2007年3月6日；104(10):4240

摘要

NOTCH1信号通路直接将细胞外信号与细胞核中的转录反应联系起来，在T细胞发育和50%以上的人类T细胞淋巴母细胞白血病（T-ALL）病例的发病机制中起着关键作用。然而，对NOTCH1激活的转录程序知之甚少。使用综合系统生物学方法，我们表明NOTCH1控制促进细胞生长的前馈转录网络。抑制T-ALL细胞中的NOTCH1信号传导导致细胞尺寸减小，并引发由下调的生物合成途径基因主导的基因表达特征。通过整合基因表达阵列和ChIP-on-ChIP数据，我们发现NOTCH1直接激活多种生物合成途径并诱导c-MYC基因表达。表达谱调控网络的反向工程表明，NOTCH1和c-MYC控制两个直接相连的转录程序，这两个转录程序包含共同的靶基因，共同调节原代T-ALL细胞的生长。这些结果确定了c-MYC是NOTCH1信号传导的重要介质，并将NOTCH2激活与c-MYC上游的致癌信号传导途径结合起来。

PubMed免责声明

利益冲突声明

作者声明没有利益冲突。

数字

图1。
图1。
致癌NOTCH1信号激活调节白血病细胞生长的转录程序。(一)使用特异性识别ICN1的Val-1744抗体，在GSI（CompE 500 nM）处理24小时的T-ALL细胞系或模拟处理（DMSO）对照的细胞裂解液中，通过Western blot分析检测γ-分泌酶裂解后激活的细胞内NOTCH1水平。在NOTCH1的PEST结构域发生截断突变的细胞系中观察到较小的分子量条带（ICN1-ΔPEST）。α-管蛋白水平显示为负荷控制。(b条)对用GSI（CompE）或载体（DMSO）处理24小时的7个T-ALL细胞系的重复样本进行基因表达谱分析。热图表示每个样本相对于模拟治疗对照的彩色编码表达水平。最重要的基因(P（P）<0.00001）排名t吨显示了测试。(c（c）)顶级基因的功能注释(P（P）<0.0001）使用DAVID工具通过GSI治疗抑制NOTCH后下调。(d日)详细的热图表示GSI在选定功能类别中诱导的表达变化。
图2。
图2。
抑制NOTCH1信号传导会损害T-ALL细胞的细胞生长。(一)与载体（DMSO）处理相比，GSI处理6天的DND41 T-ALL细胞的细胞直径减小。显示了三次重复实验的代表性直方图。在HPB-ALL、CUTLL1和KOPTK1细胞系中也获得了类似的结果。(b条)GSI诱导的细胞大小变化与细胞周期无关，G1（2N DNA含量）门控细胞。(c（c）)ICN1的强制表达可以缓解GSI对细胞大小的影响。(d日)通过慢病毒表达shRNA靶向抑制NOTCH1信号传导槽口1（pGK GFP shRNA NOTCH1）或荧光素酶基因（pGK-GFP shRNA-LUC）用作对照。
图3。
图3。
NOTCH1是参与细胞生长和代谢的基因的直接调节器。(一)散点图显示了三个独立的ChIP-on-ChIP实验与识别HPB-ALL细胞中NOTCH1反式激活域的N1-TAD抗体的联合结果。用Cy3标记的对照DNA的对数荧光值绘制在x个轴，标记有Cy5的NOTCH1 IP DNA绘制在年轴。由NOTCH1（箭头）绑定的启动子序列从对角线移到左上角。(b条)ChIP-on-ChIP识别的NOTCH1直接目标的功能分类(P（P）< 0.0001). (c（c）)GSI诱导的T-ALL细胞株顶层基因表达变化按信噪比排序。热图表示每个样本相对于模拟治疗对照的色码表达水平。重点介绍了先前已知的NOTCH1直接靶基因和在ChIP-on-ChIP分析中确定的基因。(d日)GSEA富集分数和NOTCH1占用启动子基因分布的图形表示（结合P（P）值<0.0001）。(e（电子）)NOTCH1直接靶基因注释沿着GSI调节的转录物排列，按信噪比排序。
图4。
图4。
NOTCH1绑定到c-MYC公司近端启动子序列并调节T-ALL中的c-MYC mRNA和蛋白表达。(一)感染慢病毒（pLKO-puro）的RPMI 8402 T-ALL细胞ICN1水平的Western blot分析驱动靶向shRNAs表达槽口1（shRNA NOTCH1）或靶向荧光素酶基因的对照shRNA（shRNA LUC）。(b条)定量RT-PCR分析DELTEX1公司和c-MYC公司NOTCH1 shRNA敲除后RPMI 8402 T-ALL细胞和对照shRNA处理细胞中的转录水平。(c（c）)HPB-ALL T-ALL细胞中c-MYC的Western blot分析显示，GSI（CompE 500 nM）抑制NOTCH1后，c-MYC表达下调。箭头指示c-MYC特定的标注栏。(d日)NOTCH1绑定的ChIP分析c-MYC公司启动子序列。定量PCR分析c-MYC公司启动子序列标准化为对照DNA和染色质免疫沉淀物中的β-肌动蛋白水平，在HPB-ALL细胞中使用两种NOTCH1抗体（N1-TAD和Val 1744）和IgG作为对照。
图5。
图5。
NOTCH和c-MYC构成控制细胞生长的前馈调节网络基序。(一)控制c-MYC和细胞生长基因的NOTCH1前馈环调控基序的结构。(b条)用GSI抑制T-ALL细胞中的NOTCH1可关闭通过强制表达c-MYC公司T细胞淋巴母细胞中。GSEA富集分数和c-MYC调节基因沿GSI调节转录物等级分布的图形表示。(c（c）)逆转录病毒表达c-MYC公司DND41在GSI治疗后拯救细胞生长。用流式细胞术估计感染pBMN的DND41细胞的细胞大小c-MYC公司IRES GFP逆转录病毒在CompE或载体（DMSO）存在下生长4天。
图6。
图6。
激活T-ALL中的NOTCH1和c-MYC调节网络。(一)基于与T-ALL细胞系中激活NOTCH1蛋白水平相关的基因表达特征的元基因整合到由T-ALL样本微阵列表达数据构建的ARACNe全球调控网络中。被ChIP-on-ChIP识别为NOTCH1直接靶基因的NOTCH2原基因的邻近基因以粉红色阴影显示，在经GSI治疗的T-ALL细胞中受调控的邻近基因则以蓝色阴影显示，显示ChIP-on-ChIP显著启动子占用和GSI治疗调控的相邻基因均以紫色阴影显示。(b条)NOTCH1相邻基因和ChIP-on-ChIP数据之间重叠的详细表示。每个相邻节点的强度代表NOTCH1启动子占用的显著性水平。(c（c）)GSI处理的T-ALL细胞中调节的NOTCH1邻近基因的详细表达。每个相邻节点的强度对应于右侧的比例面板，代表GSI处理的基因调控显著性水平。(d日)与NOTCH1元基因和c-MYC公司.
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“被引用”文章

工具书类

    1. Struhl G，Greenwald I.美国国家科学院院刊，2001年；98:229–234.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Hansson EM、Lendahl U、Chapman G.Semin癌症生物学。2004;14:320–328.-公共医学
    1. Allman D，Aster JC，Pear WS。免疫学修订版，2002年；187:75–86.-公共医学
    1. Ellisen LW、Bird J、West DC、Soreng AL、Reynolds TC、Smith SD、Sklar J.Cell。1991;66:649–661.-公共医学
    1. 翁美联社、费兰多AA、李W、莫里斯JP IV、西尔弗曼LB、桑切斯·伊里扎里C、布莱克洛SC、Look AT、阿斯特JC。科学。2004;306:269–271.-公共医学

出版物类型