Newcastle disease virus-based live attenuated vaccine completely protects chickens and mice from lethal challenge of homologous and heterologous H5N1 avian influenza viruses

doi:10.1128/JVI.01514-06

.2007年1月；81(1):150-8.

doi:10.1128/JVI.01514-06。 Epub 2006年10月18日。

新城疫病毒减毒活疫苗完全保护鸡和小鼠免受同源和异源H5N1禽流感病毒的致命攻击

葛金英¹, 邓国华, 致远文, 田国兵, 王勇（音）, 史建忠, 王西军（Xijun Wang）, 李彦兵, 胡森（Sen Hu）, 江永平, 杨庆来, 余康珍, 志高部, 陈华兰

附属公司

PMID： 17050610
预防性维修识别码：项目编号1797253
内政部： 10.1128/JVI.01514-06

基于新城疫病毒的减毒活疫苗可完全保护鸡和小鼠免受同源和异源H5N1禽流感病毒的致命攻击

金鹰阁等人。 J维罗尔. 2007年1月.

.2007年1月；81(1):150-8.

doi:10.1128/JVI.01514-06。 Epub 2006年10月18日。

作者

金鹰阁¹, 邓国华, 致远文, 田国兵, 王勇（音）, 史建忠, 王西军（Xijun Wang）, 李彦兵, 胡森（Sen Hu）, 江永平, 杨庆来, 余康珍, 志高卜, 陈华兰

附属

¹哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，中国农业科学院，哈尔滨市马兜街427号，150001。

PMID： 17050610
预防性维修识别码：下午1797253
内政部： 10.1128/JVI.01514-06

摘要

H5N1高致病性禽流感病毒（HPAIV）继续传播，对动物和人类健康构成严重威胁。目前的流感疫苗策略存在局限性，无法有效用于现场动物的广泛接种。然而，新城疫病毒（NDV）疫苗株已成功用于为大量动物接种疫苗。在本研究中，我们使用反向遗传学构建了一种表达H5亚型禽流感病毒（AIV）血凝素（HA）的NDV。将来自HPAIV野鸟分离物a/Bar-headed goose/3/2005（H5N1）的野生型和突变HA开放阅读框（ORF）插入LaSota NDV疫苗株的P和M基因之间的基因间区域。稳定表达野生型和突变HA基因的重组病毒在1日龄鸡脑内接种后被发现是无害的。在鸡体内单剂量的重组病毒可诱导NDV和AIV H5特异性抗体，并完全保护鸡免受致命剂量的快速NDV和同源及异源H5N1 HPAIV的攻击。此外，用基于NDV的重组疫苗免疫的BALB/c小鼠产生H5 AIV特异性抗体，并完全免受同源和异源致命病毒的攻击。我们的结果表明，重组NDV适合作为家禽NDV和AIV感染的双价减毒活疫苗。重组新冠病毒疫苗也可能在高危人群中具有潜在用途，以控制致命禽流感的大流行传播。

PubMed免责声明

数字

**图1。**
H5 HA基因重组NDV的制备与鉴定。（A）在P和M基因（I）和插入PmeI位点的野生型H5 AIV HA基因（II）或突变的H5 AIV-HA基因（III）之间引入PmeI位置的rLa基因组示意图。（B） H5禽流感病毒HA蛋白表达的免疫荧光分析。汇合的BHK-21细胞以0.2的MOI感染rLa（I）、rLa-H5w（II）或rLa-H5m（III）。用鸡抗NDV抗血清（a，d，g）、鸡抗H5禽流感病毒抗血清（b，e，h）或非感染（NI）SPF鸡血清（c，f，i）固定并探测感染细胞，然后用异硫氰酸荧光素结合的兔抗鸡IgG（Sigma）孵育。用徕卡DMIRE2荧光显微镜（徕卡）分析细胞。（C）表达AIV H5的NDV重组子的Western blot分析。感染rLa、rLa-H5w或rLa-H5m的细胞裂解液与H5 HA基因DNA免疫（I）或鸡抗NDV抗血清（II）产生的鸡H5 AIV HA特异性抗血清孵育。与过氧化物酶偶联二级抗体孵育后，用3,3′-二氨基联苯试剂观察结合情况。标记蛋白的位置显示在左侧，AIV血凝素的未分离型（HA0）和加工型（HA1和HA2）显示在右侧。

**图2。**
重组病毒在胚胎卵中的生长特性。获救的NDV rLa（⋄），rLa-H5w(▵), 或rLa-H5m(○) （0.1 ml 100 EID₅₀)将其接种到10天龄胚胎蛋的尿囊腔中，在接种后24、48、72和96 h的时间点采集每组6个蛋的尿囊液，并汇总用于EID的测定₅₀鸡蛋；所示数据来自三个重复序列。

**图3。**
H5N1病毒血凝素基因的系统发育关系。这棵树包括2003年至2005年在东南亚国家分离的禽流感病毒和2005年至2006年在中东、欧洲和非洲分离的病毒。系统发育树是由CLUSTALX软件包（1.81版）的PHYLIP程序使用邻接算法并基于1000的bootstrap值生成的。强调了用于重组疫苗生产的HA基因供体病毒，本研究中使用的挑战性病毒用斜体标记。CK，鸡肉；DK、鸭子；GS，鹅；MD，野鸭；有限公司，*疣鼻天鹅*; CC的情况下，*大天鹅*; 远景：大天鹅。

**图4。**
重组病毒rLa-H5w在SPF鸡体内诱导的HI抗体持续时间。将10只1周龄Leghorn SPF白鸡眼接种⁶电子数据交换₅₀将拯救的重组病毒rLa-H5w置于50μl中。每周收集血清，检测NDV（⋄）和H5N1禽流感病毒的HI抗体(○). 数据表示为平均值±标准偏差。

**图5：。**
接种不同H5N1病毒的小鼠经鼻致命攻击后的结果。（A）接种rLa的小鼠的体重减轻和（B）存活率(·，▪) 或rLa-H5w(▵, □) 并接受1000 MLD鼻腔接种₅₀流感病毒BHG/QH/05(▵, ▴) 或DK/FJ/02(□, ▪) 第二次免疫后两周。平均重量损失表示为原始重量的百分比。

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中的注释

注意以新城疫病毒为基础的减毒活疫苗。
韩国忠，刘XP，李世生。 Han GZ等。《维罗尔杂志》。2008年7月；82（13）：6782。doi:10.128/JVI.00370-08。《维罗尔杂志》。2008 PMID：18544791 免费PMC文章。没有可用的摘要。

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1. Alexander，D.J.1989年。纽卡斯尔病，第114-120页。H.G.Purchase、L.H.Arp、C.H.Domermuth和J.E.Pearson（编辑），《鸟类病原体分离和鉴定实验室手册》，第三版，美国鸟类病理学家协会，宾夕法尼亚州肯尼特广场。
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1. 陈，H.，G.邓，Z.李，G.田，Y.李，P.焦，L.张，Z.刘，R.G.韦伯斯特，K.Yu。2004年。中国南方鸭体内H5N1流感病毒的演变。程序。国家。阿卡德。科学。美国101:10452-10457。-项目管理咨询公司-公共医学

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[1] Alexander，D.J.1989年。纽卡斯尔病，第114-120页。H.G.Purchase、L.H.Arp、C.H.Domermuth和J.E.Pearson（编辑），《鸟类病原体分离和鉴定实验室手册》，第三版，美国鸟类病理学家协会，宾夕法尼亚州肯尼特广场。

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[6] Bukreyev，A.、Z.Huang、L.Yang、S.Elankumaran、M.St.Claire、B.R.Murphy、S.K.Samal和P.L.Collins。表达外来病毒抗原的重组新城疫病毒在灵长类动物中被减弱并具有高度免疫原性。J.维罗尔。79:13275-13284.-项目管理咨询公司-公共医学

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[9] 陈，H.，G.邓，Z.李，G.田，Y.李，P.焦，L.张，Z.刘，R.G.韦伯斯特，K.Yu。2004年。中国南方鸭体内H5N1流感病毒的演变。程序。国家。阿卡德。科学。美国101:10452-10457。-项目管理咨询公司-公共医学

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