跳到主页内容
美国国旗

美国政府的官方网站

Dot政府

gov意味着它是官方的。
联邦政府网站通常以.gov或.mil结尾。之前分享敏感信息，确保你在联邦政府网站。

Https公司

网站是安全的。
这个https（https）：//确保您连接到官方网站，并且您提供的任何信息都是加密的并安全传输。

访问密钥 NCBI主页 MyNCBI主页 主要内容 主导航
.2005年11月；115(11):3166-76.
doi:10.11172/JCI25001。 Epub 2005年10月20日。

β-catenin介导的人类原发性黑色素瘤进展需要Notch1信号的激活

克拉拉·巴林 1, 闵晓, Chelsea C Pinnix公司, 阿基诺布·索马, Imre Veres公司, 伊斯特万·朱哈斯, 埃里克·J·布朗, 安东尼·卡波比安科, 米恩哈德·赫林, 刘兆军
附属公司

β-catenin介导的人类原发性黑色素瘤进展需要Notch1信号的激活

克拉拉·巴林等。 临床研究杂志. 2005年11月.

摘要

Notch是一种高度保守的跨膜受体，决定细胞命运。Notch信号表示Notch胞内结构域的断裂、向细胞核的移位以及随后靶基因转录的激活。Notch信号在几种癌症中的作用是众所周知的，但其在黑色素瘤中的作用仍不明确。在这里，我们表明Notch1通路在人类黑色素瘤中被激活。阻断Notch信号传导抑制，而Notch1通路的组成性激活增强了体内外原发性黑色素瘤细胞的生长，但对转移性黑色素癌细胞几乎没有影响。Notch1信号的激活使原发性黑色素瘤细胞获得转移能力。此外，Notch1对原发性黑色素瘤细胞的致癌作用是由β-catenin介导的，β-catening在Notch1激活后上调。抑制β-catenin表达可逆转Notch1增强的肿瘤生长和转移。因此，我们的数据表明Notch1信号在促进原发性黑色素瘤进展中具有β-catenin依赖性、阶段特异性作用。

PubMed免责声明

数字

图1
图1
人类黑素细胞和黑色素瘤细胞中Notch通路成分的表达。(A类)人类恶性黑色素瘤和痣原发灶中Notch1的免疫组织化学研究。标本用标准免疫过氧化物酶法染色。红色染色表示Notch1阳性，而棕色染色表示黑色素。阴性对照用等型匹配的二级抗体染色。HMB45染色证实黑素细胞来源。比例尺：200μm。高清晰度图像显示在右栏中。比例尺：20μm。(B类)人类黑素细胞和黑色素瘤细胞系激活Notch1水平的Western blot分析。与黑素细胞相比，大多数黑色素瘤细胞系中激活的Notch1水平增加。β-肌动蛋白作为负荷控制。(C类)HEY1、HEY2、HES1、和HES2型实时定量RT-PCR测定正常和恶性黑素细胞中mRNA的表达。结果为3个独立实验的平均值±SD*对<0.05，学生t吨测试。(D类)相对数量堵塞1实时定量RT-PCR测定正常和恶性黑素细胞中mRNA的表达。结果为3个独立实验的平均值±SD。
图2
图2
Notch信号的抑制抑制黑色素瘤细胞的生长。(A类)用DAPT（0.2μM和1μM）处理细胞，并与等量溶剂DMSO进行比较。MTT法检测细胞生长情况。结果表明，与对照组相比，细胞生长百分比（调整为100%）*对<0.005，学生的t吨测试。(B类)培养10天后，对软琼脂中形成的菌落进行计数并拍照。图中显示了每种情况下的图表和代表性照片。比例尺：500μm。结果为3个独立实验的平均值±SD。(C类)MTT法分析转染DN MAML1/pBabe的细胞的生长情况。结果为3个独立实验的平均值±SD**对<0.001，学生t吨测试。(D类)转染DN MAML1/pBabe或pBabe（模拟）的细胞集落数。结果为3个独立实验的平均值±SD。展示了具有代表性的照片。比例尺：500μm。(E类)在SCID小鼠中评估DN MAML1对WM3248细胞生长的影响。在皮下注射后的指定时间测量肿瘤大小。结果为平均值±标准偏差(n个= 8).#对=0.024，学生的t吨测试。内板，用DN MAML1/pBabe或pBabe转染WM3248细胞。免疫印迹证实Myc-tagged DN MAML1表达。
图3
图3
Notch1通路的组成性激活促进体外黑色素瘤生长。(A类)细胞转染N集成电路-GFP或GFP。将相等数量的稳定转染子接种并在4小时后在荧光显微镜下拍照。比例尺：20μm。在所有其他黑色素瘤细胞系中观察到95%以上的绿色细胞。(B类)上部面板显示转染N的COS7细胞集成电路-通过Northern（左）和Western（右）印迹分析GFP或GFP慢病毒。N个集成电路显示了基因和蛋白质的表达。28秒rRNA和β-actin分别用作Northern和Western印迹的对照。下面板显示通过Western blot检测到黑色素瘤转染物中激活的Notch1的表达。(C类)细胞生长通过三[H] -胸腺嘧啶掺入分析。N的异位表达集成电路加速原发性黑色素瘤，但不影响转移性黑色素癌细胞的生长。通过将GFP转染的对照细胞的活性设置为100。在3个独立实验中，结果为三倍的平均值±SD*对<0.005，学生的t吨测试。(D类)在软琼脂中形成菌落的百分比。N个集成电路增强原发性但非转移性黑色素瘤细胞的集落形成**注意WM3248-N形成的菌落集成电路-GFP细胞比对照组大，尽管数量没有显著增加。通过将GFP转染对照细胞的活性设置为100，将数据标准化。结果为独立实验的平均值±SD。#对<0.001，学生t吨测试。(E类)软琼脂平板中的代表性区域。比例尺：500μm。
图4
图4
激活的Notch1增加成年小鼠原发性黑色素瘤的生长并促进肺转移。(A类) 3 × 106WM35-N型集成电路-将GFP或WM35-GFP细胞分别皮下注射到小鼠体内。7周后处死小鼠，采集肿瘤样本，测量并拍照。图中显示了从每组3个样本中采集的黑色素瘤（带皮肤）的代表性照片（左侧面板）。计算并显示各组小鼠的肿瘤总重量（g）（右侧面板）。数据为平均值±标准偏差*对=0.006，学生的t吨测试。(B类)WM3248-N型集成电路-将GFP或WM3248-GFP细胞静脉注射到SCID小鼠体内。7周后处死小鼠，并采集肺部。每组代表性肺部显示：GFP（上面板）和N集成电路-GFP（下部面板）。(C类)WM3248-N的肺部切片集成电路-GFP–和WM3248-GFP–注射小鼠（右侧面板）。使用基于H&E染色切片的Image-Pro Plus Phase 3成像系统（MediaControlnetics）测量肺部肿瘤占总面积的百分比。数据为平均值±标准偏差**对<0.005，学生的t吨测试。比例尺：1 mm(D类)激活的Notch1上调黑色素瘤细胞上Mel-CAM的表达。N全细胞裂解物的免疫印迹分析集成电路-GFP-或GFP-转染的WM3248细胞显示，N集成电路–GFP–转染但未转染GFP的细胞。β-肌动蛋白的水平显示为等负荷条件。
图5
图5
Notch1信号的激活可稳定原发性黑色素瘤细胞系中的β-连环蛋白。(A类)免疫印迹分析显示N中β-catenin水平增加集成电路–GFP转染RGP和VGP的原发性黑色素瘤，但在N集成电路–GFP转染的黑素细胞或转移性黑色素瘤细胞。β-肌动蛋白的水平显示为等负荷条件。(B类)DAPT治疗抑制黑色素瘤细胞中β-catenin的表达。用1μM DAPT处理细胞24小时，并用免疫印迹法分析全细胞裂解物。β-肌动蛋白的水平显示为等负荷条件。(C类)外源性β-catenin的引入可阻断DAPT对原发性黑色素瘤细胞生长的抑制作用。用DAPT（1μM）或DMSO处理β-catenin/腺病毒转染的黑色素瘤细胞。MTT法测定β-catenin的过度表达加速了细胞生长。内板显示通过免疫印迹检测β-catenin表达。虽然DAPT抑制细胞增殖，但其生长速度与未经DAPT处理的亲代细胞相当。结果为3个独立实验的平均值±SD*对<0.01，学生的t吨测试。(D类)荧光素酶分析显示TCF介导的N集成电路–GFP转染细胞与对照细胞的比较。通过将对照细胞的荧光素酶活性设置为100，将数据归一化。结果为3个独立实验的平均值±SD**对<0.001，学生t吨测试。(E类)RT-PCR分析表明β-连环蛋白在N中没有同时上调集成电路–GFP转染RGP和VGP细胞系，表明稳定β-catenin的转录后机制。β-肌动蛋白用作对照。
图6
图6
抑制β-catenin可逆转Notch1诱导的肿瘤生长和转移。(A类和B类)用免疫印迹法检测WM35-N中的β-catenin集成电路-表达β-cat–siRNA1、β-cat-siRNA2、β-cat-siRNA3和对照载体的GFP细胞(A类)和WM3248–N集成电路-表达β-cat–siRNA2的GFP细胞(B类). β-cat–si–RNA2有效抑制β-catenin的表达。β-肌动蛋白作为负载对照。(C类和D类)MTT分析显示β-cat–siRNA1诱导的生长速度降低(*对<0.01，学生的t吨测试）和β-cat–siRNA2(**对<0.001，学生t吨试验），WM35–N集成电路-WM3248-N中的GFP细胞和β-cat–siRNA2集成电路-与对照组比较GFP细胞。结果为三次独立实验的平均值±SD。(E类)β-cat–siRNA2诱导WM35-N细胞凋亡集成电路-GFP细胞。圆形表示细胞死亡。比例尺：20μm。ELISA定量检测细胞凋亡。结果为三次独立实验的平均值±SD。在WM3248–N中观察到类似结果集成电路-GFP细胞。(F类)三[H] -胸腺嘧啶掺入试验显示，与对照组相比，转染DNβ-catenin的WM3248细胞的生长速度降低。结果为3个独立实验的平均值±SD。内板显示DNβ-catenin蛋白的表达。β-肌动蛋白作为负载对照。(G公司)体内肺集落形成试验。β-cat–siRNA-WM3248-N集成电路-GFP或H1UG-WM3248-N集成电路-将GFP细胞静脉注射到小鼠体内。12周后，采集并分析肺部样本。在解剖显微镜下对肺表面形成的肿瘤集落进行宏观计数。数据为平均值±标准偏差。
请参阅PMC中的此图像和版权信息

类似文章

查看所有类似文章

引用人

查看所有“引用者”文章

工具书类

    1. Artavanis-Tsakonas S，Rand MD，Lake RJ。缺口信号：发育中的细胞命运控制和信号整合。科学。1999;284:770–776.-公共医学
    1. Davis RL和Turner DL。脊椎动物毛发和分裂相关蛋白的增强子：调节细胞分化和胚胎模式的转录阻遏物。致癌物。2001;20:8342–8357.-公共医学
    1. Iso T、Kedes L、Hamamori Y.HES和HERP家族：notch信号通路的多效应器。J.细胞。生理学。2003;194:237–255.-公共医学
    1. Reizis B，Leder P.通过哺乳动物notch信号通路直接诱导T淋巴细胞特异性基因表达。基因发展2002；16:295–300.-项目管理咨询公司-公共医学
    1. Rangarajan A等人。Notch信号是角质形成细胞生长停滞和进入分化的直接决定因素。EMBO J.2001；20:3427–3436.-项目管理咨询公司-公共医学

出版物类型

MeSH术语