P2Y6 receptor mediates colonic NaCl secretion via differential activation of cAMP-mediated transport

doi:10.1172/JCI16711

.2003年2月；111（3）：371-9。

doi:10.1172/JCI16711。

P2Y6受体通过差异激活cAMP介导的转运介导结肠NaCl分泌

迈克尔·科特根¹, 托马斯·洛夫勒, 克里斯托夫·雅各比, 罗兰·尼奇克, 赫尔曼·帕文斯特, Rainer Schreiber公司, 塞巴斯蒂安·弗里泽, 瑟伦·尼尔森, 延斯·莱比锡

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PMID： 12569163
预防性维修识别码：项目经理151859
内政部： 10.1172/JCI16711

P2Y6受体通过差异激活cAMP介导的转运介导结肠NaCl分泌

迈克尔·科特根等。临床研究杂志. 2003年2月.

.2003年2月；111(3):371-9.

doi:10.1172/JCI16711。

作者

附属

¹德国弗莱堡美第奇大学。

PMID： 12569163
预防性维修识别码：项目经理151859
内政部： 10.1172/JCI16711

摘要

细胞外核苷酸是上皮细胞离子转运的重要调节因子。在这里，我们研究了核苷酸对结肠NaCl分泌的介导作用以及相关的信号转导机制。基底外侧UDP诱导Cl（-）分泌的持续激活，这被293B完全抑制，293B是cAMP刺激的基底外侧KCNQ1/KCNE3K（+）通道的特异性抑制剂。因此，我们推测基底外侧P2Y（6）受体可以增加cAMP。事实上，UDP提高了孤立地穴中的cAMP。我们使用crypt[Ca（2+）]（i）测量、RT-PCR和免疫组织化学方法鉴定了上皮P2Y（6）受体。为了研究大鼠P2Y（6）是否升高cAMP，我们在爪蟾卵母细胞中与cAMP调节的囊性纤维化跨膜电导调节器（CFTR）Cl（-）通道共同表达P2Y（1）或P2Y（5）受体。使用双电极电压钳监测核苷酸诱导的Cl（-）电流。在表达P2Y（1）受体的卵母细胞中，ATP瞬时激活内源性Ca（2+）激活的Cl（-）电流，但不激活CFTR。相反，在表达P2Y（6）受体的卵母细胞中，UDP瞬时激活Ca（2+）激活的Cl（-）电流，随后激活CFTR。CFTR Cl（-）电流由其卤化物电导序列确定。总之，我们在结肠上皮细胞中发现一个基底外侧P2Y（6）受体，通过协同增加[Ca（2+）]（i）和cAMP刺激持续NaCl分泌。为了支持这些数据，P2Y（6）受体刺激可在爪蟾卵母细胞中差异激活CFTR。

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数字

图1
ATP和UDP对结肠离子转运的影响。(一)结肠肠细胞中NaCl分泌的模型。(b条)跨上皮电压的原始记录(*V（V）*_特)和跨上皮电压变化（Δ*V（V）*_特). 上面一行显示*V（V）*_特电压偏转的带宽反映了跨上皮电阻(*R（右）*_特，参见方法）。ATP应用于基底外侧导致*V（V）*_特，并且减少*R（右）*_特. (**c（c）**)基底外侧UDP增加管腔阴性*V（V）*_特并且减少了*R（右）*_特坚持。这一效应被293B完全阻断。(d日)基底侧UDP和ATP的加性效应。(**e（电子）**)UDP在吲哚美辛（50μM）存在（+）和不存在（填充圈）时的浓度响应曲线。等效短路电流(我_供应链)根据欧姆定律计算（见方法）。(**（f）**)293B（10μM）对UDP诱导的我_供应链在不在场的情况下(克)消炎痛（*和^§指出重大变化）。Con，控制。

图2
(一)孤立结肠隐窝中呋喃-2荧光比率测量的原始记录。镀液中的UDP（100μM）和ADP（100µM）都会导致[Ca的增加²⁺]_我. (b条)UDP诱导的（100μM）和ADP诱导的对胞浆钙的影响概述²⁺在孤立的结肠隐窝中*ATP或UDP引起的显著变化。(**c（c）**)不同激动剂对cAMP生成的影响。所有实验均在IBMX（0.1 mM）存在下进行*与控制的显著差异(*P（P）*>0.05）。

图3
大鼠结肠的免疫组织化学。rP2Y₆-抗体标记粘膜上皮（m）和单一粘膜下细胞(一). 与兔血清孵育后，单个粘膜下细胞被标记，表明这些细胞中IgG的非特异性结合（插入一). rP2Y孵化₆抗体，已被免疫肽预吸收(b条). 免疫前血清孵育(**c（c）**).

图4
[Ca的联合测量²⁺]_我和全细胞电流爪蟾卵母细胞。上部痕迹：俄勒冈州绿色荧光强度作为[Ca的测量²⁺]_我低迹线：使用双电极电压灯技术测量的全细胞电流（电压灯协议：分别为-30、-80、-40、+60 mV，持续1秒）。(一)ATP诱导[Ca平行增加²⁺]_我表达P2Y的卵母细胞的全细胞电流₁受体。(b条)在P2Y中₆受体表达卵母细胞UDP升高²⁺]_我和全细胞电流。

图5
全电池导电性能爪蟾表达P2Y的卵母细胞₁和P2Y₆仅受体。第2页₁: (一)ATP（10μM）诱导全细胞电流快速增加（钳制方案见图4）。(b条)卤化物电导序列从一. (**c（c）**)ATP诱导的全细胞电导的电流-电压关系。(d日)卤化物电导序列实验总结。第2页₆(**e（电子）**)UDP（10μM）诱导全细胞电流快速增加（箝位协议见图4）。(**（f）**)卤化物电导序列从**e（电子）**. (克)UDP诱导的全细胞电导的电流-电压关系。(小时)卤化物电导序列实验总结。(我和j个)克隆P2Y受体的核苷酸选择性。(我)核苷酸诱导的P2Y电导增加₁表达受体的卵母细胞。(j个)P2Y中核苷酸诱导的电导增加₆表达受体的卵母细胞。

图6
ATP和IBMX+forskolin对P2Y共存卵母细胞全细胞电导的影响₁受体和CFTR（ATP 10μM，IBMX 1 mM，forskolin 2μM）。注意不同的卤化物电导顺序（ATP vs.IBMX+forskolin）。

图7
UDP和IBMX+forskolin对P2Y表达卵母细胞全细胞电导的影响₆受体和CFTR（UDP 10μM，IBMX 1 mM，forskolin 2μM）。(一)典型实验的原始记录。UDP的应用导致电导快速瞬时增加，随后缓慢增加，类似于IBMX+forskolin诱导的效果。(b条)使用UDP和(**c（c）**)IBMX+forskolin。(d日)UDP感应和(**e（电子）**)IBMX+forskolin诱导电导。注意UDP处理的卵母细胞和IBMX+forskolin处理的卵卵母细胞的卤化物电导序列和电流-电压关系的相似性。

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