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.2000年;2(6):477-88.
doi:10.1186/ar130。 Epub 2000年8月31日。

正常人血液中的间充质前体细胞

附属公司

正常人血液中的间充质前体细胞

N J Zvaifler公司等。 关节炎研究. 2000.

摘要

研究结果声明:正常人血液中发现的间充质前体细胞(BMPC)粘附在塑料和玻璃上,在不含生长因子的DMEM-20%胎牛血清(FCS)中对数增殖。它们形成具有成纤维细胞和基质形态的细胞,这些细胞不受清除CD34、CD3或CD14细胞的影响。添加到培养物中的成骨补充剂(地塞米松、抗坏血酸和β-甘油磷酸)抑制成纤维细胞的形成,BMPC呈成骨细胞的立方形状。在补充培养基中培养5天后,淘洗细胞显示碱性磷酸酶(AP),添加骨形态发生蛋白(BMP)2(1 ng)使AP产量加倍(P<0.04)。两周后,30%的细胞非常大,并与抗骨钙素抗体反应。同样的培养物中还含有苏丹韧皮部脂肪细胞和多核巨细胞,这些巨细胞被染色以检测抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)和玻璃体凝集素受体。用波形蛋白、I型胶原和BMP受体抗体对培养的BMPC进行免疫染色,间充质细胞上表达异二聚体结构。此外,BMPC用抗CD105(endoglin)染色,这是骨髓间充质干细胞(MSCs)的假定标记物。

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数字

图1
图1
从健康人血液中富含BMPC的淘析部分分离出的细胞,并在DMEM-20%FCS中培养8天(a、b)此时,主要细胞包括具有中央细胞核、薄膜状细胞质和粘附伪足的成纤维细胞样细胞,以及具有薄粘附细胞质和圆形中央细胞核的大圆形细胞。苏木精染色。(a)×200;(b)×400.(c)从健康人血液中相同的富含BMPC的淘洗部分分离出的细胞,并在地塞米松(10-7mol)、抗坏血酸-2-磷酸(0.05 mmol)和β-甘油磷酸(10 mmol)8天。此时,所有细胞都具有圆形或立方体的形态,细胞核位于中央。×200.与(a).
图2
图2
通过相差显微镜观察在DMEM-20%FCS中培养的富含BMPC的淘析级分的延时视频摄影。第2天(a)细胞团中有小而圆的细胞,少数细胞有伪足。第6天(b),有许多大的成纤维细胞样细胞和由小而圆的细胞簇产生的大而圆的基质细胞。
图3
图3
在DMEM-20%FCS中培养的健康人血液中富含BMPC的淘洗部分。细胞固定,用抗BMPR 1A抗体染色(见方法),并在第3、5、8和11天进行分析。通过形态学(成纤维细胞样[阴影条]或大细胞[填充条])和免疫过氧化物酶染色测定BMPC。结果显示为六幅图像中细胞总数的平均值。×400.计算机图像分析(analysis)。
图4
图4
富含BMPC的淘析部分在DMEM-20%FCS的无菌玻片上培养,并允许其增殖。(a)第7天,冲洗玻片,固定细胞,并用抗BMPR 1A型抗体染色。背景中有许多未染色的小单核细胞。有两种类型的细胞被染色:一种看起来像成纤维细胞,另一种是大而圆的细胞,细胞浆粘附。(b)第12天的类似培养物,用抗内皮素(CD105)抗体染色。几乎所有大的间充质细胞的细胞质都呈点状染色,核周突起。
图5
图5
富含BMPC的淘析部分培养在补充地塞米松、抗坏血酸和β-甘油磷酸的DMEM-20%FCS中(如图1所示)。20天后,大约三分之一的细胞变得很大。它们的细胞质被抗降钙素抗体染色。免疫过氧化物酶染色也可在一些最大细胞周围形成的基质中观察到。在相同的补充培养物中,含有中性脂质的大细胞(苏丹红IV;红色染色)。(a)在相同的补充培养物(×250)和(b)高倍镜下(×400)显示细胞及其周围基质被抗钙素抗体染色(箭头)。
图6
图6
在补充地塞米松、抗坏血酸和β-甘油磷酸(如图1所示)的DMEM-20%FCS中培养的富含BMPC的淘析部分,并在此后每天进行检查。(a)到第7天,有许多大的多核细胞(相控显微镜)。(b)这些细胞被抗卵磷脂受体抗体(×250)染色。
图7
图7
富含BMPC的淘析馏分(n个=4)在具有不同浓度BMP2的DMEM-20%FCS中培养5天。收集上清液并分析其碱性磷酸酶活性(AP;pNP的释放是AP活性的一种度量)。BMP2的最低浓度(1 ng/ml)导致AP活性显著增加。**P(P)> 0.004.
图8
图8
mRNA表达的RT-PCR分析(a)趋化因子SDF-1和(b)培养的BMPC中的管家基因GA3PD(GA42、GA43)和类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞系(RA505第4代)。注意样本中的RT-PCR片段大小与作为阳性对照的SDF-1质粒(通道5)中的相似。RT-PCR的条件和使用的引物在方法部分中进行了描述。

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引用人

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