糖蛋白Ibapha的268-282区域与凝血酶的肝素结合位点的相互作用抑制因子VIII的酶激活

凝血酶激活因子VIII（FVIII）在凝血级联放大中起着基本作用，并通过Arg的特异性蛋白水解裂解发生³⁷²，氩气⁷⁴⁰和Arg¹⁶⁸⁹.FVIII的完全激活需要在Arg下解理³⁷²，涉及α-凝血酶外酶-II的过程；称为肝素结合位点（HBS）。本研究旨在研究糖蛋白Ibα（GpIbα；1–282片段）与凝血酶HBS结合对FVIII激活的影响。使用以GpIbα268–282序列为模型的合成肽也进行了类似的实验，并在其序列中的所有酪氨酸残基276、278和279位置成功硫酸化。通过凝血和FXa生成分析评估，GpIbα1–282和硫酸化GpIb268–282肽诱导激活的FVIII生成逐渐减少（高达70%）。此外，SDS/PAGE和Western-blot实验表明，FVIII-Arg裂解时44kDa A2结构域的特异性外观³⁷²–序列号³⁷³GpIbα1–282或GpIb268–282肽存在时，肽键显著延迟。此外，使用反相HPLC研究了后者对凝血酶介导的具有FVIII序列341-376的肽水解的影响。这个k_猫/K（K）_米根据竞争性抑制效应，FVIII 341–376肽的凝血酶水解值随GpIbα268–282肽浓度线性下降。综上所述，这些实验表明GpIbα的268–282硫酸化区域与凝血酶HBS结合，并负责抑制精氨酸³⁷²–序列号³⁷³FVIII的键断裂和活化。