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2016年6月17日在线发布。 数字对象标识:10.1038/srep28083

图2

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3437个定量外体蛋白的生物信息学分析和Western blotting验证。

(A类)基于基因本体注释的显著丰富的细胞成分分析饼图。含有<0.3%总蛋白的分类被归类为杂项(Misc.)。(B类)基于基因本体注释的生物过程分析饼图。(C类)维恩图显示了我们的iTRAQ-2D-LC-MS/MS策略确定的蛋白质的存在、缺失或重叠,以及之前从8项蛋白质组学研究中获得的2489种CRC细胞外体蛋白。根据这些已知的2489种蛋白质的识别数量,将其分为8类,范围从n到n = 1到n = 8.识别的计数越高,可靠性越高。(D类)差异表达外体蛋白的Western blotting验证。进行密度测定以量化每个通道,并在每个印迹下显示整个细胞裂解液中每个蛋白质与负载控制β-肌动蛋白或外显子中CD63的比率,WT细胞中的比率为参考值。根据我们的定量蛋白质组学结果,CD63的表达在三种外泌体类型中相对一致,因此在本研究中它被用作外泌物部分的负载控制。具有代表性的考马斯蓝染色SDS-PAGE凝胶如图所示补充图S3结果表明,这三种制剂中的外体蛋白水平相当。

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