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审查日期:2021年7月6日
预吸附(也称为交叉吸附)是一个额外的纯化步骤,用于提高二级抗体的特异性。含有二级抗体的溶液通过含有来自潜在交叉反应物种的固定化血清蛋白的柱基质。非特异性二级抗体保留在色谱柱中,而高度特异性的二级抗体则通过色谱柱。
图1:在本例中,识别兔IgG轻链的二级抗体溶液通过含有来自潜在交叉反应物种(如羊和牛IgG)的固定血清蛋白的基质。只有对兔IgG轻链高度特异的抗体才能通过色谱柱,而与绵羊或牛IgG轻链交叉反应的二级抗体仍将与色谱柱中的蛋白质结合。
在处理组织和细胞时,我们始终建议使用预先吸附(交叉吸附)的二级抗体,以最小化非特异性背景。这意味着预吸附抗体在许多不同的实验中都很有用,但它们最适用于:
例子:使用预先吸附的抗兔Alexa Fluor®488继发性抗小鼠血清和an预先吸附的抗鼠Alexa Fluor®647当使用分别在兔子和小鼠体内产生的一级抗体进行双重染色实验时,对兔子血清产生二级抗体。
例子:使用预先吸附的抗鼠HRP染色人体组织或细胞系.
以下列出的所有预先吸附的Alexa Fluor®二级抗体适用于ICC/IF、ELISA、IHC-P、IHC-Fr和流式细胞术。
反拉比Alexa Fluor®405 (IgG H&L)预吸附层(ab175648)
反辐射Alexa Fluor®405(IgG H&L)预吸附层(ab175670)
防涂层 Alexa Fluor®405(IgG H&L)预吸附(ab175665)
反窃听Alexa Fluor®405(IgY H&L)预吸附层(ab175675)
Alexa Fluor®488型
请注意,我们的一些预吸附HRP二级抗体仅适用于特定应用,如下所示。
请注意,我们的一些预吸附生物素化二级抗体仅适用于特定应用,如下所示
Alexa Fluor®是Life Technologies的注册商标。Alexa Fluor®染料共轭物包含Life Technologies授权给Abcam的技术。