整合素

二级抗体选择指南

该抗体可帮助您选择合适的二次抗体用于细胞成像、Western blot、免疫沉淀、免疫组织化学和ELISA。


一、二级抗体有什么区别?

之间的区别二级抗体一级抗体二级抗体是针对该物种提出的,一级抗体的同种型,用于通过在一个以上的地方与一级抗体结合来检测一级抗体。导致多个二级抗体与一级抗体结合,每个抗体具有多个标签,如亚历克斯福禄®辣根过氧化物酶AP生物素铱®与二级抗体结合。

一级抗体的宿主种类

第二抗体是针对用于产生初级抗体的宿主物种而提出的,例如,如果您使用在兔中饲养的初级抗体,则需要在兔以外的宿主物种中饲养的抗兔二级抗体(例如驴抗兔次级)。

实验步骤

二级抗体倾向于以共轭形式出现。对于诸如ELISA或Western印迹的应用,酶联次级链倾向于最流行的,而对于流式细胞术或免疫荧光,有偏好与荧光蛋白或染料结合的二级抗体,如阿列克萨氟®.

抗体类/亚类

第二抗体必须针对一级抗体的同种型。

在家兔、山羊、绵羊或驴中普遍存在多克隆一级抗体,通常是IgG同种型。因此,第二抗体通常是抗IgG H&L(重链和轻链)抗体。

单克隆抗体在小鼠、兔和大鼠中普遍存在。例如,如果初级单克隆抗体是小鼠IgG1,您将需要抗小鼠IgG或不太特异的F(ab)片段抗小鼠IgG。

人免疫球蛋白类、子类、类型和子类型:

其他类型的反应:

  • 多价抗体与所有类反应
  • 抗Fc或重链(α,δ,ε,γ,μ)抗体仅与重链反应
  • 抗F(ab)或全分子抗体与重链和轻链反应独立于类。
  • 抗轻链(κ和γ)抗体与所有类反应,因为所有类使用相同的κ和La轻链。

预吸附的二级抗体-消除物种反应性的理想选择

预吸附二次抗体 当同时使用多个初级抗体及其相应的二级抗体时,多色实验是理想的。预吸附过程降低了在细胞和组织样品上存在的二次抗体和内源性免疫球蛋白交叉反应的风险。

预吸附(也称为交叉吸附)是增加抗体特异性的额外步骤。第二抗体的混合物(包含抗兔IgG轻链的第二抗体,绵羊IgG轻链和牛IgG轻链,例如)通过含有潜在交叉反应物种(在这种情况下,绵羊和牛轻链)的固定化血清蛋白的基质。

只有兔IgG轻链特异的抗体将通过该柱,而与绵羊或牛IgG轻链交叉反应的抗体将结合并保持吸附在基质上。作为该程序的结果,产生特异性识别兔IgG轻链的二级抗体。

F(ab)或(Fab′)2片段二级抗体

F(ab)和(Fab′)2片段抗体消除细胞(如巨噬细胞、树突状细胞、中性粒细胞、NK细胞和B细胞)上的抗体和Fc受体的Fc部分之间的非特异性结合,并且由于其较小的大小而更有效地穿透组织。

由于片段抗体不具有Fc部分,它们不干扰抗Fc介导的抗体检测。
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欲了解更多关于如何选择合适的二级抗体的实验,请看我们的二级抗体。选择指南。

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