概述
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产品名称 -
亲代细胞系 希拉牌手表 -
有机体 人类 -
通道编号 <20 -
淘汰验证 免疫细胞化学(ICC)、新一代测序(NGS)、Western Blot(WB) -
经过测试的应用程序 -
生物安全水平 2 -
一般注意事项 建议控制: 人野生型HeLa细胞系( 约271142 ). 请注意,剔除细胞株订单中不会自动包含野生型细胞株,如果需要,请使用代码WILDTYPE-TMTK1免费添加推荐的野生型细胞系。 低温保存细胞培养基: 细胞冷冻介质-DMSO无血清培养基,在补充甲基纤维素的MEM中含有8.7%的DMSO。 培养基: DMEM(高糖)+10%FBS 初始处理指南: 到达后,小瓶应储存在液氮气相中,而不是-80°C。 在-80°C下储存可能会导致生存能力丧失。 1.在37°C水浴中解冻小瓶约1-2分钟。 2.将细胞悬液(0.8 mL)转移到含有8.4 mL预热培养基的15 mL/50 mL锥形无菌聚丙烯离心管中,用额外的0.8 mL培养基(总体积10 mL)清洗小瓶以收集剩余细胞,并在室温下以201 x g(rcf)离心5分钟。 10 mL代表建议的最小稀释度。 20 mL代表建议的最大稀释度。 3.将细胞颗粒重新悬浮在5 mL预热培养基中,并使用血细胞仪或其他细胞计数方法进行计数。 根据细胞计数,将种子细胞置于密度为2x10的适当细胞培养瓶中 4 细胞/厘米 2 。播种密度仅供参考,应根据各个实验室的时间表进行调整。 4.在37°C培养箱中用5%CO培养 2 。应每天监测培养物。 亚文化指南: 所有播种密度应基于通过既定方法获得的细胞数。 引导播种密度为2x10 4 细胞/厘米 2 建议使用。 如果需要,在继代培养前24小时更换部分培养基可能有助于促进生长。 当细胞达到80-90%的汇合时,应进行传代。
本产品受The Broad Institute和ERS Genomics limited的有限使用许可,并采用专利技术开发。 有关有限使用许可证和相关专利的详细信息,请参阅我们的 有限使用许可证 和 专利页 . 我们将提供复苏时增殖的活细胞。
属性
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单元格数量 1 x 10 6 细胞/小瓶,1 mL -
粘附/悬浮 粘附剂 -
组织 子宫颈 -
单元格类型 上皮的 -
疾病 腺癌 -
性别 女性 -
无支原体 是的 -
储存说明 采用干冰运输。 储存在液氮中。 -
存储缓冲区 成分:8.7%二甲基亚砜、2%纤维素、甲醚 -
研究领域
目标
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功能 肌动蛋白是一种高度保守的蛋白质,参与各种类型的细胞运动,在所有真核细胞中普遍表达。 -
参与疾病 ACTA2缺陷是家族性6型胸主动脉瘤(AAT6)的病因[MIM:611788]。 AAT的特点是胸主动脉永久性扩张,通常是由于主动脉壁的退行性改变。 它们主要与称为“内侧坏死”或“埃尔德海姆囊性内侧坏死”的特征性组织学外观有关,其中弹性纤维变性和碎裂,平滑肌细胞丢失,嗜碱性基质积聚。 -
序列相似性 属于肌动蛋白家族。 -
手机定位 细胞质>细胞骨架。 -
UniProt提供的信息
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KO细胞裂解物 -
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应用
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图像
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所有车道: HRP抗α平滑肌肌动蛋白抗体[1A4]( 约203696 )稀释1/5000 车道1: 野生型HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞系)全细胞裂解物 车道2: ACTA2敲除HeLa(宫颈腺癌人上皮细胞系)全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 暴露时间: 20秒 约203696 western blot显示与野生型HeLa细胞中的α-平滑肌肌动蛋白(HRP)反应。 当ACTA2敲除细胞系ab264014(敲除细胞裂解物 约264499 )已使用。 TBS-T(0.1%吐温)中3%牛奶中的膜被堵塞 ® )孵育前 约203696 在4°C、稀释度为1/5000的条件下过夜,以及 公元184095年 (小鼠抗GAPDH抗体[mAbcam 9484]-Alexa Fluor ® 680),稀释率为1/1000。 使用Optiblot ECL试剂开发印迹( 约133456 )和图像。 -
所有车道: 抗α-平滑肌肌动蛋白抗体[SP171]( ab150301型 )稀释1/130 车道1: 野生型HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞系)全细胞裂解物 车道2: ACTA2敲除HeLa(宫颈腺癌人上皮细胞系)全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- ab150301型 在42 kDa时观察到。 红色负载控制, 约7291 (小鼠抗α-管蛋白[DM1A])在55kDa时观察到。 ab150301型 western blot显示与野生型HeLa细胞中的α平滑肌肌动蛋白发生反应。当ACTA2敲除细胞系ab264014(敲除细胞裂解物 约264499 )已使用。 对野生型HeLa和ACTA2敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 TBS-T(0.1%吐温)中3%牛奶中的膜被堵塞 ® )孵育前 ab150301型 和 约7291 (小鼠抗α-微管蛋白[DM1A])在4°C、稀释度分别为1/130和1/2000的条件下过夜。 印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗α-平滑肌肌动蛋白抗体[EPR5368]( 约124964 )稀释度为1/10000 车道1: 野生型HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞系)全细胞裂解物 车道2: ACTA2敲除HeLa(宫颈腺癌人上皮细胞系)全细胞裂解物 每车道20µg的裂解液/蛋白质。 在还原条件下进行。 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- 约124964 在42 kDa时观察到。 红色负载控制, 约7291 (小鼠抗α-管蛋白[DM1A])在55kDa时观察到。 约124964 western blot显示与野生型HeLa细胞中的α平滑肌肌动蛋白发生反应。当ACTA2敲除细胞系ab264014(敲除细胞裂解物 约264499 )已使用。 对野生型HeLa和ACTA2敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 TBS-T(0.1%吐温)中3%牛奶中的膜被堵塞 ® )孵育前 约124964 和 约7291 (小鼠抗α-管蛋白[DM1A])在4°C下过夜,分别以1/10000和1/20000稀释。 印迹与山羊抗兔IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( ab216773号 )和山羊抗鼠IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( 约216776 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时。 -
所有车道: 抗α-平滑肌肌动蛋白抗体[1A4]( ab7817型 )稀释度为1/131.58 车道1: 野生型HeLa(人宫颈腺癌上皮细胞系)全细胞裂解物 车道2: ACTA2敲除HeLa(宫颈腺癌人上皮细胞系)全细胞裂解物 在还原条件下进行。 1-2车道: 合并信号(红色和绿色)。 绿色- ab7817型 在42 kDa时观察到。 红色负载控制, 约52866 (兔抗α-管蛋白抗体[EP1332Y])在55kDa下观察到。 ab7817型 western blot显示与野生型HeLa细胞中的α平滑肌肌动蛋白发生反应。当ACTA2敲除细胞系ab264014(敲除细胞裂解物 约264499 )已使用。 对野生型HeLa和ACTA2敲除细胞裂解物进行SDS-PAGE分析。 TBS-T(0.1%吐温)中3%牛奶中的膜被堵塞 ® )孵育前 ab7817型 和 约52866 (兔抗α-管蛋白抗体[EP1332Y])在4°C下过夜,分别以1/131.58和1/20000稀释。 印迹与山羊抗鼠IgG H&L(IRDye)孵育 ® 800CW)预吸收床( 约216772 )和山羊抗兔IgG H&L(IRDye ® 680RD)预吸收床( ab216777号 )二级抗体在成像前在室温下以1:20000稀释1小时 -
ab150301型 野生型HeLa细胞中的α-平滑肌肌动蛋白染色(上图)和ACTA2敲除HeLa的细胞(ab264014)(下图)。 用100%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 ab150301型 浓度为5 ug/ml 约7291 (小鼠单克隆抗体到α-管蛋白),以1/1000稀释度隔夜,4 o个 C,然后在室温下用山羊的兔IgG二级抗体(Alexa Fluor)进一步孵育1小时 ® 488) ( 约150081 )2 ug/ml(以绿色显示)和山羊对小鼠IgG的二级抗体(AAlexa Fluor ® 594) ( ab150120型 )2 ug/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems TCS SP8)拍摄图像。 -
约124964 野生型HeLa细胞中的α-平滑肌肌动蛋白染色(上图)和ACTA2敲除HeLa的细胞(ab264014)(下图)。 用100%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 约124964 稀释1/500 约7291 (小鼠单克隆抗体到α-管蛋白),以1/1000稀释度隔夜,4 o个 C,然后在室温下用山羊的兔IgG二级抗体(Alexa Fluor)进一步孵育1小时 ® 488) ( 约150081 )2微克/毫升(显示为绿色)和山羊抗小鼠IgG的第二抗体(Alexa Fluor ® 594) ( ab150120型 )2 ug/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems TCS SP8)拍摄图像。 -
ab7817型 野生型HeLa细胞中的α-平滑肌肌动蛋白染色(上图)和ACTA2敲除HeLa的细胞(ab264014)(下图)。 用100%甲醇固定细胞(5分钟),然后用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 ab7817型 浓度为5ug/ml 约6046 (兔多克隆到β-管蛋白),按1/1000稀释,4 o个 C,然后在室温下用山羊抗小鼠IgG二级抗体(Alexa Fluor)进一步孵育1小时 ® 488) ( ab150117号 )2微克/毫升(显示为绿色)和山羊抗兔IgG的第二抗体(Alexa Fluor ® 594) ( 约150080 )2 ug/ml(以红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems TCS SP8)拍摄图像。 -
公元202586年 野生型U-2 OS细胞中FHL2染色(顶面板)和FHL2敲除型U-2 OS细胞(ab264014)(底面板)。 用4%PFA固定细胞(10分钟),用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 公元202586年 在1/100稀释和 约7291 (Tubulin)以1/1000稀释度在+4°C下过夜,然后在室温下用山羊抗兔IgG二级抗体(Alexa Fluor®488)进一步孵育1小时( 约150081 )以2μg/ml(绿色显示)和山羊对小鼠IgG的二级抗体(Alexa Fluor®594)( ab150120型 )浓度为2μg/ml(以伪红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems,TCS SP8)拍摄图像。 -
公元202586年 野生型U-2 OS细胞中FHL2染色(顶面板)和FHL2敲除型U-2 OS细胞(ab264014)(底面板)。 细胞用100%甲醇固定(5分钟),用0.1%Triton X-100渗透5分钟,然后用1%BSA/10%正常山羊血清/0.3M甘氨酸在0.1%PBS-Tween中封闭1小时。 然后将细胞与 公元202586年 稀释度为1/100 约7291 (Tubulin)以1/1000稀释度在+4°C下过夜,然后在室温下用山羊抗兔IgG二级抗体(Alexa Fluor ® 488) ( 约150081 )以2μg/ml(绿色显示)和山羊对小鼠IgG的二级抗体(Alexa Fluor ® 594) ( ab150120型 )浓度为2μg/ml(以伪红色显示)。 核DNA用DAPI标记为蓝色。 使用共焦显微镜(Leica-Microsystems,TCS SP8)拍摄图像。
数据表和文件
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SDS下载 -
数据表下载
参考文献 (1)
风扇T 等。 免疫和非免疫细胞亚型确定预后和治疗策略的新靶点:一项基于肺腺癌多中心scRNA-seq数据集瘤内异质性分析的研究。 前部免疫球蛋白 13:1046121(2022)。 公共医学:36483553